微小RNA-4530通过靶向TRIB1抑制肝癌细胞增殖

目的探讨微小RNA(miRNA)-4530在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖的影响。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-4530在人正常肝细胞(LO2)和肝癌细胞系(SMMC-7721、HepG2、Hep3B和Huh-7)的表达;转染miR-4530的模拟物,构建miR-4530过表达的Hep3B和Huh-7细胞;利用CCK-8实验和平板克隆实验检测miR-4530对细胞增殖的影响;利用生物信息学、荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western blot实验检测miR-4530对G蛋白偶联诱导蛋白2受体(TRIB1)蛋白的影响;在miR-4530过表达的Hep3B和Huh-7细胞中,转染TRIB1质粒,探讨过表达TRIB1对miR-4530介导的增殖抑制的影响。结果相比于正常肝细胞LO2,肝癌SMMC-7721、HepG2、Hep3B和Huh-7细胞中miR-4530的表达均明显减少(均P<0.05),其中Hep3B和Huh-7较为显著;过表达miR-4530,明显抑制肝癌细胞Hep3B和Huh-7的增殖(均P<0.05);TRIB1被鉴定为miR-4530的靶基因,过表达miR-4530明显减少TRIB1的表达(均P<0.01);过表达TRIB1能够显著减少miR-4530介导的肝癌细胞增殖抑制(均P<0.05)。结论 miR-4530在肝癌中表达减少,miR-4530靶向抑制TRIB1的表达进而减少肝癌细胞的增殖。     

土大黄苷对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和分化的影响

目的探讨土大黄苷(rhaponticin)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖和分化的影响并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测土大黄苷对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖抑制率,镜下观察细胞形态改变,测定各组细胞SOD水平。结果不同浓度土大黄苷对SMMC-7721细胞的增殖抑制率随浓度和时间依赖性(P<0.01),并且药物浓度在100-250μmol/L的范围内显著抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖;药物在200μmol/L作用24h后,显微镜下可观察到肝癌细胞SMMC-7721的细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转;肝癌细胞在药物浓度为200μmol/L下作用12h、24h和48h后,各时间组肝癌细胞中SOD活力逐渐上升(P<0.05)。结论土大黄苷在体外可呈浓度和时间依赖性抑制人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖并促进其分化。其作用机制可能与提高SOD的活性有关。     

miR-122调控LAMC1表达与肝癌细胞迁移侵袭相关性研究

目的探讨mi R-122调控LAMC1表达与肝癌细胞迁移侵袭相关性研究。方法选取人正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721,构建mi R-122 mimics稳定表达载体并对其进行转染,Real-Time PCR检测各组细胞株内micro RNA-122含量;CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测肝癌细胞迁移侵袭能力;生物信息学预测、荧光报告载体实验Real-Time PCR检测层粘连蛋白γ1(Recombinant laminin gamma 1,LAMC1)m RNA水平变化。结果与对照组人正常肝细胞株LO2相比,mi R-122过表达后,肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,LAMC1 m RNA含量显著降低,肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721细胞侵袭和迁移能力显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论上调mi R-122表达可通过调控LAMC1表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

MicroRNA-340在肝细胞肝癌中抑制细胞增殖并促进凋亡

目的 探讨微RNA-340(miR-340)在肝细胞肝癌中的表达特点及其对细胞生物学行为的影响.方法 收集重庆医科大学附属第一医院肝胆外科2015年3月至2016年9月收治的40例肝细胞肝癌患者手术后切除的癌组织和癌旁组织标本.通过qPCR检测组织标本中miR-340的表达,并分析miR-340表达与临床病理学指标的关系.分别培养肝癌细胞株Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721以及正常肝细胞株HL-7702,48 h后使用qPCR检测5种细胞中miR-340的表达水平.通过转染增加或抑制SMMC-7721细胞中miR-340的表达,然后分别于细胞培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.通过生物信息学软件预测miR-340的靶基因,并使用qPCR和蛋白质印迹法进一步验证miR-340对靶基因的作用.结果 癌组织中miR-340的表达低于癌旁组织(P＜0.01),并且miR-340的表达与乙肝表面抗原、HBV DNA载量、肿瘤大小以及临床TNM分期有关(P＜0.01).正常肝细胞HL-7702内miR-340的表达高于4种肝癌细胞Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721(P＜0.05,P＜0.01).增加miR-340表达可抑制SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01),而抑制miR-340的表达则促进SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01);增加miR-340的表达可促进SMMC-7721细胞的凋亡(P＜0.01),而抑制miR-340则减少凋亡(P＜0.01).生物信息学分析显示S期激酶相关蛋白2(SKP2)基因是miR-340下游的一个靶基因.qPCR和蛋白质印迹分析结果显示增加SMMC-7721细胞中miR-340的表达可抑制SKP2的mRNA和蛋白表达,抑制miR-340表达则增加SKP2的mRNA和蛋白表达.结论 miR-340的异常表达可能与乙肝病毒的感染有关,其异常表达有助于评价病情以及预后.在肝癌细胞系SMMC-7721细胞中,miR-340能够抑制细胞增殖并促进凋亡,这一作用结果可能是通过miR-340对SKP2的抑制而实现的.     

肝星状细胞对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭的影响及作用机制研究

目的观察人肝星状细胞LX-2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法人肝星状细胞LX-2条件培养基（HSC-CM）与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为HSC-CM组;人正常肝细胞LO2条件培养基(LO2-CM)与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为LO2-CM组（阴性对照）;1%FBS培养基与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为1%FBS组（空白对照）。采用CCK-8法检测3组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测培养48h后细胞侵袭能力;Westernblot检测增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子资B（NF-资B）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果HSC-CM组、LO2-CM组、1%FBS组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、PCNA、VEGF、NF-资B、基质金属蛋白酶２（MMP-2）蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与LO2-CM组、1%FBS组比较,HSC-CM组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力均增强（均P＜0.05）;PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。结论肝星状细胞可促进肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭等生物学行为,其作用机制可能与上调PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2表达水平有关。     

Cytohesin-2在肝癌细胞株中的表达及调控Hep3B细胞增殖作用的研究

目的探讨Cytohesin-2在肝癌细胞株中的表达情况以及对肝癌细胞增殖的影响.方法应用western blot法检测6种细胞株中Cytohesin-2的表达情况,筛选出高表达细胞株后,给予Cytohesin-2的特异性抑制剂SecinH3了解Cytohesin-2对Hep3B细胞增殖的影响.结果Cytohesin-2蛋白在Hep3B、HepG2、SMCC-7721、BEL-7402、Huh-7中的表达均高于人正常肝细胞系HL-7702中的表达.应用Cytohesin-2抑制剂SecinH3后,Hep3B细胞的增殖能力受到显著抑制,并且Hep3B细胞的凋亡数量明显增加.结论 Cytohesin-2在多种肝癌细胞系中均具有显著地高表达,并可以通过抑制Hep3B细胞凋亡的方式促进Hep3B细胞的增殖.Cytohesin-2可能作为肝细胞肝癌生物治疗的新的靶点.     

5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素抑制肝癌细胞NF-κB表达的研究

目的：研究5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素（ADFMChR）抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡作用及机制。方法：体外培养SMMC-7721细胞,MTT比色法测定ADFMChR对SMMC-7721细胞增殖活性的影响;Western Blotting法分析ADFMChR对SMMC-7721细胞NF-kB蛋白表达活性的影响。结果：MTT比色法结果显示ADFMChR有效抑制SMMC-7721细胞增殖活性,呈剂量依赖性,其IC50值为3.56μM;Western Blot分析证实ADFMChR下调NF-κB蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。结论：ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,其机制与NF-κB蛋白表达有关。     

以二氢吡唑为先导的新型化合物靶向hTERT 抑制 SMMC-7721的增殖

目的：观察以二氢吡唑为先导的新型化合物对人肝癌细胞株 SMMC-7721增殖抑制的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法筛选对 SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用较强的小分子化合物,并用流式细胞周期实验观察化合物对细胞周期的影响,采用改良的端粒重复序列扩增程序(TRAP)实验检测端粒酶的活性, Western blot 法检测化合物对hTERT 蛋白表达的影响。结果与香豆素类衍生物相对比,新型二氢吡唑类化合物显示出较好的抑制肿瘤细胞增殖的作用;流式细胞周期检测结果显示该化合物通过 S 期阻滞影响细胞增殖;改良的 TRAP 实验结果显示该化合物对端粒酶的活性具有较明显的抑制作用;Western blot 法结果显示该化合物可以显著降低 hTERT 蛋白的表达。结论以二氢吡唑为先导的新型化合物具有抑制 SMMC-7721细胞的增殖的作用和周期阻滞作用,初步发现这主要是通过靶向 hTERT抑制端粒酶的活性实现的。     

Hedgehog信号通路与Snail在肝癌细胞系中的表达及意义

目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路在各种肝癌细胞系中的表达及其与Snail蛋白的关系.方法 用RT-PCR检测了Hh信号通路分子Shh、Ihh、Ptch-1、Smo、Gli-1、Gli-2、Gli-3 mRNA在4种肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh-7和永生化肝细胞系L02中的表达情况,应用Western blot检测了Snail蛋白在SMMC-7721和L02细胞中的表达差异.结果 RT-PCR结果显示Hedgehog信号通路分子mRNA在肝癌细胞株中呈高表达,并以Shh信号为主;Gli-2在SMMC-7721细胞中表达最显著,而在正常肝细胞株L02中表达最弱,两者差异显著(P<0.01).Snail蛋白在SMMC-7721细胞中的表达显著高于L02细胞(P<0.05),且与Gli-2的表达呈正相关(P<0.05).结论 Hh信号通路可能通过Gli-2上调Snail的表达,增强肝癌细胞增殖力和侵袭力,促进肝细胞癌的发生和发展.     

人血管内皮生长因子shRNA真核表达载体对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖影响

目的:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,观察对其增殖影响。方法:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,ELISA法检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达量,检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的增殖及细胞的克隆形成能力的变化。结果:VEGF shRNA真核表达载体大部分阻断肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达,转染后细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;MTT法观察细胞生长速度变慢,单个细胞的克隆形成能力明显下降。结论:VEGF shRNA真核表达载体可明显抑制SMMC-7721细胞增殖能力,为将VEGF shRNA真核表达载体应用于肝癌的基因治疗提供依据。     

扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究

目的 探讨扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的作用.方法 MTT法测定扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖的影响;Elisa法测定肿瘤坏死因子(TNF-α)生成;流式细胞法检测扶正消瘤汤对人肝瘤细胞SMMC-7721凋亡的影响;免疫组化法测定bcl-2和bax表达.结果 扶正消瘤汤100 μg/ml、50μg/ml剂量组在12～84 h对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显的抑制作用,24～48h对SMMC-7721细胞TNF-α生成均有明显的促进作用,对SMMC-7721细胞凋亡具有明显的促进作用,并随浓度和时间(24～72h)的增加凋亡率增加,活细胞减少;扶正消瘤汤高剂量组对SMMC-7721细胞bax表达有明显上调作用,浓度越大上调越明显.扶正消瘤汤高、低剂量组对SMMC-7721细胞bcl-2表达有明显下调作用,其中高剂量组与模型组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 扶正消瘤汤对肿瘤的治疗作用的机制可能与促进TNF-α生成有关,并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控bax、bcl-2表达有关.     

丹皮酚增强顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用

目的探讨丹皮酚和顺铂联合应用对人肝癌细胞SMMC07721的增殖抑制作用。方法用不同浓度的丹皮酚、顺铂和两药联用处理人肝癌细胞SMMC-7721,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定药物在体外对人肝癌SMMC07721细胞的增殖抑制作用,应用两药相互作用指数（CDI）进行联合用药分析。结果丹皮酚（7．81-250mg／L）和顺铂（0．625～20mg／L）单独应用均对人肝癌SMMC-7721细胞有抑制作用,呈现剂量效应关系。丹皮酚与顺铂联合应用后对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制率明显大于单药,有显著的协同杀伤作用。结论丹皮酚与顺铂联合应用具有明显的协同抗肝癌细胞株SMMC-7721增殖的作用。     

顺铂对肝癌细胞株HepG2增殖和SATB1表达的影响

目的:观察特异AT序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein 1,SATB1)在不同肝癌细胞株中的表达情况,并探讨顺铂对肝癌细胞株HepG2的细胞形态及SATB1表达的影响。方法:半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HepG2、BEL-7402、SMMC-7721三种肝癌细胞株中SATB1 mRNA的表达情况;HepG2细胞株中加入终浓度为2.5、5.0和10.0μg/ml顺铂培养24 h,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果:SATB1在肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721、HepG2中均有表达,差异无统计学意义(P0.05)。HepG2细胞与顺铂共培养24 h后,倒置显微镜下可见细胞形态明显改变,细胞数减少,损伤、死亡的细胞增多。SATB1 mRNA的表达随着顺铂浓度的增加而减少,其中5.0、10.0μg/ml顺铂组SATB1 mRNA的表达量与对照组差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SATB1在三种肝癌细胞株中均有表达,顺铂可抑制HepG2细胞增殖和SATB1的表达,从而达到抑制肝癌细胞生长的目的。     

NO供体型大黄酸衍生物的合成及抗肿瘤活性

以大黄酸为原料,利用其羧基通过不同的连接臂与呋咱氮氧化合物偶联,得到7个NO供体型大黄酸衍生物,其结构经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证.采用MTT法测试了目标化合物对人肝癌细胞HepG2、Bel-7402,人结肠癌细胞HCT116,人骨肉瘤细胞U2OS,耐药细胞Bel-7402/5-FU及正常肝细胞LO2的体外抗细胞...     

人肝癌细胞株VEGF/VEGFR的检测及意义探讨

目的：筛选血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）高表达肝癌细胞株，为进一步研究VEGF在肝癌治疗中的作用提供理论依据。并探讨VEGF受体在肝癌细胞株的表达及意义。方法：ELISA法及Western blot法分别检测人肝癌细胞株培养上清及细胞内VEGF蛋白的表达。免疫细胞化学方法检测VEGFR在人肝癌细胞中的表达。结果：5株肝癌细胞株均见VEGF蛋白表达，其中SMMC-7721的VEGF表达量最高，VEGF特异性受体Fit-1在HepG2、HHCC、SMMC-7721、Bcl-7402见阳性表达，KDR在HepG2、HHCC、Bel-7402、QGY-7701见阳性表达。结论：肝癌细胞株中VEGF表达量不尽一致，VEGF在肝癌发生发展中可能存在自分泌作用方式。     

白毛藤提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用

目的观察白毛藤水提液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因mRNA表达水平的影响,探讨中药白毛藤的抗癌作用机制。方法用不同浓度白毛藤水提取物处理肝癌SMMC-7721细胞,观察细胞形态变化,用台盼兰染色并作细胞计数,cck-8试剂盒检测不同药物浓度组的细胞增殖抑制情况。RT-PCR检测c-myc基因mRNA表达水平。结果倒置显微镜下可见给药组细胞数目明显减少,且随药物浓度增加其抑制效果增强。WST-8法显示,在药物浓度为2,4,8,16 mg/ml时,细胞增殖明显受到剂量依赖性抑制,其抑制率分别为24.37%,50.07%,66.14%,83.23%。细胞中c-myc基因mRNA表达水平降低,并与药物浓度呈明显的量效关系。结论白毛藤可显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,下调c-myc基因mRNA表达,这可能是白毛藤的抗癌作用的部分机制。     

德氮吡格对人肝癌细胞株增殖抑制的体外研究

目的:观察德氮吡格(TNBG)对人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2增殖的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:运用MTT法检测德氮吡格对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪观察细胞周期分布情况,Western blot分析cyclinB1和p34cdc2的变化.结果:德氮吡格作用SMMC-7721和HepG2细胞72h后,能抑制细胞增殖,呈剂量依赖性.流式细胞仪检测到两株细胞均有S期和G2/M期细胞增加,并且德氮吡格还能诱导HepG2细胞发生凋亡.Western blot发现CyclinB1表达在药物处理组明显降低,而p34cdc2则无明显改变.结论:德氮吡格能抑制肿瘤细胞增殖,可能通过调控CyclinB1表达将肿瘤细胞阻滞于G2/M期,从而达到抗肿瘤的效应.     

一氧化氮对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C含量的影响

目的探讨一氧化氮(NO)对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C(cytC)含量的影响.方法用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡,流式细胞术检测SMMC-7721和HepG2细胞凋亡率,MTT法观察肝癌细胞生长增殖情况,流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位变化,Western blot检测胞浆中cyt C含量的变化,同时应用线粒体膜通透性转变孔开放抑制剂CsA和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂BSO预处理细胞,并观察以上各指标的变化.结果 SNP能诱导人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2凋亡,并可导致两株细胞线粒体跨膜电位下降,胞浆中cyt C含量增加,与SNP的作用时间成正比.CsA能够抑制SNP所致的肝癌细胞线粒体跨膜电位的下降及胞浆中cyt C含量的增加;而BSO则可促进线粒体跨膜电位下降,cyt C从线粒体释放到胞浆.结论 NO可能通过下调线粒体跨膜电位、开放线粒体膜通透性转变孔并释放线粒体cyt C,来诱导SMMC-7721和HepG2细胞凋亡.     

槲寄生碱和多糖对肝癌细胞增生和凋亡的影响

目的研究槲寄生碱和多糖对异型增生肝细胞DNA含量的影响。方法采用MTT比色法测定槲寄生碱(mistletoe alkali,MA)和多糖(mistletoe polysaccharose,MP)对SMMC-7721,HepG2细胞增生的影响。用流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡,观察肝癌细胞的DNA相对含量,分析各时期细胞增生周期的移行变化。结果MA和MP有较好的抑制肝癌细胞增生的作用,呈现出时间-剂量依赖性;MP组及MA组SMMC-7721和HepG2细胞G1期比例增加(P<0.01),G2期和S期细胞比例降低(P<0.01),并使2种肿瘤细胞凋亡率增加(P<0.01),差异有统计学意义。结论MP和MA均能抑制人肝癌细胞SMMC-7721,Hep G2增生,促进其凋亡。