低氧增强骨髓间充质干细胞增殖维持分化潜能

目的观察低氧增强人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)体外增殖并维持其多向分化潜能的作用。方法分离10例骨髓血标本BMMSCs,分别进行低氧(低氧组)及常氧(常氧组)培养,观察BMMSCs的形态、增殖能力及成骨、成脂分化能力。结果低氧组BMMSCs保持其长梭形,鱼群样分布,增长状态良好,常氧组BMMSCs形态呈多角形或扁平状,低氧组BMMSCs数量及生长速率较常氧组增加(P0.05),且低氧组BMMSCs具有成骨、成脂分化能力。结论低氧能促进BMMSCs的体外增殖且维持其多向分化潜能。     

骨髓间充质干细胞移植对低龄扩张型心肌病模型鼠心功能及心室肌钠通道的影响

目的 观察阿霉素诱导的低龄扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)模型鼠心功能和心室肌细胞钠通道的情况,以及骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)移植后低龄DCM鼠心功能和钠通道的改变,探讨BMMSCs移植后钠通道对心功能改善的作用.方法 75只14 d龄的雌性SD鼠分为5组:正常组、正常+BMMSCs移植组(正常鼠左室前壁注射BMMSCs)、DCM组、DCM+ PBS移植组(DCM鼠左室前壁注射PBS)、DCM+BMMSCs移植组(DCM鼠左室前壁注射BMMSCs),以腹腔注射阿霉素来诱导低龄DCM模型鼠;移植后4周以荧光显微镜观察心肌组织冰冻切片评价BMMSCs植入情况,通过超声心动图和全细胞膜片钳技术对各组大鼠心功能和钠通道功能的变化情况进行检测.结果 荧光干细胞示踪检查显示植入的BMMSCs在注射点附近呈团分布或沿进针路径分布,生长良好;超声心动图检查显示DCM组心功能较正常组及正常+BMMSCs移植组降低(P＜0.05),DCM+ BMMSCs移植组心功能较DCM组及DCM+ PBS移植组提高(P＜0.05),DCM+BMMSCs移植组移植4周后心功能较移植前提高(P＜0.05);膜片钳检查显示DCM组钠电流(sodium channel current,INa)的电流密度峰值较正常组及正常+BMMSCs移植组降低,电流-电压(I-V)曲线上移,激活减慢,激活曲线右移,失活加快,失活曲线左移,差异具有统计学意义(P＜0.05);而DCM+BMMSCs移植组的INa电流密度峰值较DCM组及DCM+PBS移植组提高,I-V曲线下移,激活加快,激活曲线左移,失活减慢,失活曲线右移,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 BMMSCs移植能改善低龄DCM鼠的心功能,其机制可能与BMMSCs移植后钠通道功能增强有关.     

结直肠癌细胞源性外泌体中miR-17-5p的表达对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响及其机制

目的：分析结直肠癌细胞源性外泌体(Exo)中微小RNA-17-5p (miR-17-5p)表达对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响,阐明其可能的作用机制。方法：实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测人结直肠癌HCT116细胞、CT26细胞、LoVo细胞、HT29细胞、SW620细胞、SW480细胞和人正常结肠直肠黏膜上皮HIEC细胞中miR-17-5p表达水平。CT26细胞分为对照组、miR-NC inhibitor组和miR-17-5p inhibitor组,提取各组细胞Exo,透射电子显微镜观察Exo形态表现,纳米粒子跟踪分析法检测粒径分布情况,Western blotting法检测Exo中标志蛋白CD9、CD63、凋亡诱导因子6互作蛋白(Alix)和肿瘤易感基因101 (TSG101)蛋白表达水平,RT-qPCR法检测Exo中miR-17-5p表达水平。CT26细胞分为对照组、Exo组、Exo-miR-NC inhibitor组和Exo-miR-17-5p inhibitor组,分别以不同转染组CT26细胞源性Exo处理CT26细胞,Exo绿色荧光标记PKH67染料示踪法观察各组...     

HIF-1α在骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性心肌梗死中的作用

目的 观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在骨髓间充质干细胞(BMMSCs)治疗大鼠急性心肌梗死中的作用,并与单纯BMMSCs移植作比较.方法 ① BMMSCs的提取、培养、标记.② 建立急性心肌梗死模型.将大鼠随机分为4组,对照组、单纯BMMSCs组、HIF-1α反义寡核苷酸组、HIF-1α错义寡核苷酸组.术后4周...     

The effect of adhesion molecules on expressing and homing of the bonemarrow mesenchymal stem cells in myocardial infarction area in rats

目的 探讨炎性因子对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)黏附分子表达及对其向心肌梗死区归巢的作用.方法 采用全骨髓直接贴壁法获取大鼠原代BMMSCs,体外培养至第3代用于以下实验:①将培养的BMMSCs用浓度为10 μg/L的IL-1β刺激24 h,采用流式细胞术检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-l(ICAM-1)的表达率;②开胸结扎雄性SD大鼠左冠状动脉前降支,于心肌梗死后24 h,经尾静脉输注经Brdu标记、10 μg/L IL-1β预刺激的BMMSCs;输注BMMSCs 24 h后取心肌组织,做冰冻切片,荧光显微镜下计数组织中的BMMSCs数目.以上实验以设不加IL-1β刺激作空白对照组,另在刺激组加抗VCAM-1单克隆抗体作为实验对照.结果 生理状态下,大鼠BMMSCs表面黏附分子ICAM-1表达较高,而VCAM-1表达较低;而IL-1β刺激后,黏附分子VCAM-1表达升高;浓度为10 μg/L的IL-1β刺激BMMSCs,输注到大鼠体内,心肌梗死区组织的BMMSCs数目明显高于对照组及IL-1β+抗VCAM-1单克隆抗体组.结论 炎性因子IL-1β能够增强大鼠BMMSCs表面VCAM-1的表达,但对大鼠BMMSCs表面ICAM-1的表达无影响;其可以有效促进BMMSCs与血管内皮细胞的黏附,提高BMMSCs向心肌梗死区域迁移,其机制可能与BMMSCs表面VCAM-1表达升高有关.     

银杏叶提取物对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化能力的影响

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)对大鼠的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)成脂分化能力的影响,阐明GBE在细胞水平上对骨质疏松治疗及预防的意义。方法:将50、100、150、200和400 mg·L^-1GBE与成脂诱导液加入到已纯化的第3代BMMSCs中(50、100、150、200和400 mg·L^-1GBE组),不加药的BMMSCs为对照组,共培养7 d,观察BMMSCs的形态学和表面抗原CD44、CD105和CD34的表达;采用油红O染色观察BMMSCs中脂滴形成情况,并对BMMSCs的成脂能力进行定量分析;采用RT-PCR法检测BMMSCs中脂肪组织脂肪酸结合蛋白(AP2)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)的亚型(PPAR-γ)mRNA的表达水平。结果:形态学检测,体外培养的原代BMMSCs 3 d后可见细胞呈梭形,7 d后细胞呈漩涡状生长,同向排列;表面抗原标记物染色,CD44和CD105呈阳性表达,而CD34呈阴性表达,证明其为BMMSCs;油红O染色,约7 d后显微镜下见大量脂滴形成,并随着GBE浓度的增大脂滴数量减少;与对照组比较,其他各组BMMSCs的A₅₁₀值降低(P<0.05);RT-PCR检测,与对照组比较,其他各组细胞中AP2和PPAR-γ mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论:GBE在体外可抑制BMMSCs的成脂分化能力,且抑制能力随着GBE浓度的增高而逐渐增强。     

外泌体通过HMGB1抑制骨关节炎软骨细胞凋亡和炎症

目的 探讨滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast, SF)来源的外泌体中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖、凋亡以及炎症反应的影响。方法 对获得HMGB1沉默稳转滑膜的成纤维细胞(滑膜成纤维细胞组)和ExoQuick-TC试剂盒处理后细胞(Exo组)提取上清液，用Western blotting检测两组HMGB1、CD63及CD81蛋白的表达。将软骨细胞HC-A分为空白对照组、IL-1β组(100 pg/ml IL-1β预刺激)和IL-1β+Exo组(100 pg/ml IL-1β预刺激+50μg/ml滑膜成纤维细胞来源的外泌体),并使用实时定量PCR方法检测IL-6、TNF-α、MMP-1、MMP-13和COL2A1的mRNA水平。随后将IL-1β处理的软骨细胞分为IL-1β组、IL-1β+Exo组、IL-1β+Exo+NC-siRNA组和IL-1β+Exo+HMGB1-siRNA组。IL-1β+Exo+NC-siRNA组和IL-1β+Exo+HMGB1-siRNA组IL-1β处理的软骨细胞分别加入转染NC-siRNA或HMGB1-siRN...     

黏附分子在骨髓间充质干细胞的表达及向心肌梗死区归巢的作用

目的探讨炎性因子对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)黏附分子表达及对其向心肌梗死区归巢的作用。方法采用全骨髓直接贴壁法获取大鼠原代BMMSCs,体外培养至第3代用于以下实验:①将培养的BMMSCs用浓度为10μg/L的IL-1β刺激24 h,采用流式细胞术检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-l(ICAM-1)的表达率;②开胸结扎雄性SD大鼠左冠状动脉前降支,于心肌梗死后24 h,经尾静脉输注经Brdu标记、10μg/L IL-1β预刺激的BMMSCs;输注BMMSCs 24 h后取心肌组织,做冰冻切片,荧光显微镜下计数组织中的BMMSCs数目。以上实验以设不加IL-1β刺激作空白对照组,另在刺激组加抗VCAM-1单克隆抗体作为实验对照。结果生理状态下,大鼠BMMSCs表面黏附分子ICAM-1表达较高,而VCAM-1表达较低;而IL-1β刺激后,黏附分子VCAM-1表达升高;浓度为10μg/L的IL-1β刺激BMMSCs,输注到大鼠体内,心肌梗死区组织的BMMSCs数目明显高于对照组及IL-1β+抗VCAM-1单克隆抗体组。结论炎性因子IL-1β能够增强大鼠BMMSCs表面VCAM-1的表达,但对大鼠BMMSCs表面ICAM-1的表达无影响;其可以有效促进BMMSCs与血管内皮细胞的黏附,提高BMMSCs向心肌梗死区域迁移,其机制可能与BMMSCs表面VCAM-1表达升高有关。     

Klotho蛋白在子痫前期患者胎盘外泌体中表达及其对血管内皮细胞氧化应激的影响

目的：探讨Klotho在子痫前期（PE）患者来源的胎盘外泌体（Exo）中的表达,阐明其对血管内皮细胞氧化应激的影响。方法：收集40例孕产妇的临床资料,其中正常妊娠（NP）者20名,PE患者20例,设为NP组和PE组,分离2组研究对象外周血中胎盘Exo。将oe-Klotho和oe-NC质粒转染入人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo中,作为oe-Klotho组和oe-NC组,收集HTR-8/SVneo细胞Exo。采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)法和Western blotting法检测2组研究对象胎盘Exo和2组HTR-8/SVneo细胞Exo中Klotho mRNA及蛋白表达水平。取生长状态良好的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,按Exo来源不同将HUVECs分为PE-Exo组（与PE患者胎盘Exo共培养）、NP-Exo组（与NP胎盘Exo共培养）、oe-Klotho-Exo组（与转染oe-Klotho的HTR-8/SVneo细胞Exo共培养）和oe-NC-Exo组（与转染oe-NC的HTR-8/SVneo细胞Exo共培养）。采用透射电子显微镜（TEM）观察Exo形态表现,W...     

脐带间充质干细胞源外泌体通过自噬对肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用研究

目的 研究间充质干细胞源外泌体(Exo)对衣霉素(TM)诱导肾小管上皮细胞(HKC)的凋亡作用。方法 以不同浓度(0、1、2、4μg/mL)TM诱导HKC产生凋亡。采用CCK-8法检测细胞增殖活性。采用蛋白印迹法及流式细胞术检测细胞凋亡情况;检测自噬蛋白LC3B、Atg5和Beclin1的基因及蛋白表达水平。分离脐带间充质干细胞Exo,并进行流式细胞术表面标志物鉴定,研究不同浓度Exo(0、50、75、100、150、200μg/mL)与TM共处理对细胞活性的影响。通过流式细胞术及细胞免疫荧光检测LC3B的表达情况。分析Exo与TM共处理对细胞凋亡水平的影响。结果 1、2、4μg/mL TM均能抑制HKC增殖活性并呈浓度依赖性;不同浓度TM均能诱导HKC凋亡,并激活细胞自噬信号通路。与TM组(1μg/mL TM处理)比较,TM处理中分别加入75、100、150、200μg/mL Exo后细胞增殖活性明显增强;免疫荧光和流式检测发现,TM+Exo组自噬标志性蛋白LC3B表达水平上调。TM组细胞凋亡率为(13.36±1.47)%,TM+Exo组细胞凋亡率为(7.75±0.62)%,差异有统...     

人骨髓间充质干细胞分离培养及其向神经细胞分化的研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向神经细胞分化的潜能。方法体外培养人BMMSCs,并诱导其向神经细胞分化。诱导前后观察细胞形态变化,免疫细胞化学法检测细胞神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达以鉴定细胞类型,流式细胞术检测细胞周期以确定细胞增殖活性。结果分离培养的BMMSCs有克隆增殖能力。诱导后,分化细胞呈现典型神经元的表型,且免疫荧光染色呈NSE阳性。流式细胞术分析显示诱导前BMMSCs的增殖指数(PI)较高,细胞增殖活跃。与诱导前比较,诱导分化细胞的PI显著降低(P<0.01),细胞增殖发生抑制,而分化阶段各期细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BMMSCs可以在体外增殖扩增,并能分化为神经元样细胞,且分化的神经元样细胞能较长时间存活。     

miR-210促进小鼠BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌

目的 通过体内与体外的手段验证miR-210能够有效的促进骨髓间充质干细胞(BMMSCs)血管内皮生长因子(VEGF)的表达和分泌.方法 构建慢病毒载体,分别转染BMMSCs和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),Lenti-miR-210/BMMSCs和Lenti-LacZ/BMMSCs培养第7天RT-PCR法检测VEGF表达,第14天Western blot法检测VEGF表达,PKH26荧光染色Lenti-miR-210/HUVEC和Lenti-LacZ/HUVEC,Matrigel成管实验24 h,荧光显微镜观察成管效果;agomir-210和agomir-NC分别与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后取标本CD31免疫荧光染色.结果 miR-210慢病毒载体转染BMMSCs,第7天RT-PCR和第14天Western blot法检测VEGF表达,明显高于Lenti-LacZ/BMMSCs(P ＜0.05);Matrigel成管实验24 h结果显示:LentimiR-210/HUVEC组与Lenti-LacZ/HUVEC组相比,端端接触明显且管状结构完整;agomir-210和agomir-NC与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后标本CD31免疫荧光染色结果:agomir-210组CD31阳性细胞含量明显高于agomir-NC组.结论 通过体内与体外的检测,miR-210过表达能够有效促进BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌.     

转化生长因子-β1对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及Slug表达的影响

目的检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSCs)增殖及Slug表达的影响。方法采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠BMMSCs,用免疫组织化学方法对培养第3代的细胞进行鉴定。用MTT法检测不同浓度TGF-β1对细胞增殖的影响;免疫荧光和免疫印迹法检测TGF-β1处理前后Slug的表达情况。结果密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化大鼠BMMSCs,免疫组织化学法检测显示CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45表达阴性;低浓度TGF-β1对BMMSCs的增殖有促进作用,高浓度却抑制BMMSCs的增殖。TGF-β1处理24 h,Slug蛋白表达明显增强。结论一定浓度的TGF-β1可以促进BMMSCs的增殖,而且引起Slug蛋白增加。     

心脏营养素-1对骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的作用

目的 观察心脏营养素-1(CT-1)是否能促进经诱导分化剂5-氮杂胞苷(5-aza)诱导的骨髓间充质于细胞(BMMSCs)分化为心肌样细胞,并研究其相关机制.方法 自成年大鼠骨髓中分离BMMSCs,分别以普通培养基(A 组)、加入含CT-1的培养基(B组)培养、经5-aza诱导后加入普通培养基(C组)及5-aza加入含CT-1的培养基(D组)培养.观察细胞形态的改变,并通过免疫组化分析分化后细胞表达心脏特异性肌钙蛋白T(cTnT)的情况.电镜观察分化后细胞的超微结构及实时荧光定量检测a-actin、β-myosin heavy chain(ffMHC)、Nkx2.5、GATA4基因表达.结果 C、D组的BMMSCs在培养4周后均形成心肌样细胞形态,并且均表达eTnT D组BMMSCs分化的心肌样细胞形成了肌管样结构;D组α-actin、β-MHC、Nkx2.5、GATA4基因表达明显高于C组.结论 CT-1可能通过对GATA4、Nkx2.5基因表达的调控而促进5-aza诱导的BMMSCs分化为心肌样细胞.     

骨髓间充质干细胞培养液对牙周组织再生的影响

目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs）培养液对牙周组织再生的影响。方法 原代培养SD大鼠BMMSCs,取细胞培养液（conditioned media, CM）。采用ELISA检测培养液里与成骨相关的IGF-1、VEGF、PDGF-BB、BMP-2的含量;利用BMMSCs培养液对牙周膜细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）进行培养后,RT-PCR法检测PDLCs矿化相关基因核心结合因子2（Runx2）、骨桥素（OPN）、骨钙素（OCN）的变化;Western印迹法检测Runx2、OPN、OCN蛋白的表达变化。将BMMSCs培养液及种子细胞分别制备成凝胶,在大鼠左下第一磨牙颊侧及根分叉处制备牙周缺损,放入制备好的凝胶。分别在术后第4、8周,处死大鼠,取出左侧下颌骨,进行Micro-CT扫描及组织学分析。结果 BMMSCs培养液中含有大量IGF-1和VEGF;RT-PCR和Western印迹法均能检测到牙周膜细胞OPN、OCN、Runx2的表达,且利用BMMSCs培养液培养的PDLCs表达高于常规培养的PDLCs(P＜0.05)。8周时,BMMSCs培养液凝胶组相比于对照组生成了更多的牙槽骨(P＜0.05)。结论 同等条件下,BMMSCs培养液比种子细胞能更好地修复缺失的牙周组织。     

超声微泡辅助干细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究

目的:探讨超声微泡在自体骨髓间充质干细胞(BMMSCs)移植治疗猪急性心肌梗死(AMI)改善心功能中的作用。方法:选取14只3~4月龄小型家猪,抽取骨髓,分离、培养、标记BMMSCs,球囊封堵猪左冠状动脉前降支(LAD)建立AMI模型,分为实验组(超声微泡作用下移植干细胞,n=8)和对照组(无超声微泡作用,n=6),7 d后向LAD梗死处输注自体BMMSCs移植治疗。在移植前1 d和移植后6周分别行64层螺旋CT心脏扫描及组织病理学检查。结果:与对照组相比,实验组心功能改善更为明显,梗死区毛细血管数(16.37±3.20vs9.50±1.87,P<0.05)、普鲁士蓝染色阳性细胞数(71.63±14.09vs40.67±9.48,P<0.05)、结蛋白免疫组化染色阳性细胞数(31.88±4.16vs19.00±2.28,P<0.05)均明显增加。结论:超声微泡增效自体BMMSCs移植治疗AMI,能更有效地改善心肌梗死后的心功能,促进血管新生。     

系统性红斑狼疮模型鼠骨 BMP/Smads信号通路状态的研究

目的 :探讨狼疮鼠(MRL/lpr)骨BMP/Smads信号通路表达情况。方法 :分离小鼠股骨制备组织切片,常规苏木素-伊红(HE)染色,观察骨质情况;免疫组化观察骨组织中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达;密度梯度离心法和贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞(bone marrow masenchymal stem cells,BMMSCs),细胞爬片后免疫荧光法观察BMP-2、p-Smad1/5/8蛋白表达情况;BMP-2诱导BMMSCs向成骨细胞分化,RT-PCR法检测BMMSCs ALP、Runx2基因m RNA水平,ALP染色鉴定早期成骨情况。结果:狼疮鼠骨皮质较正常鼠减少,皮质骨占骨体积比例较正常鼠减低(P<0.01);狼疮鼠股骨BMP-2表达与正常鼠无明显差别(P>0.05);细胞免疫荧光显示狼疮鼠BMMSCs BMP-2、p-Smad1/5/8表达减弱(P<0.05);狼疮鼠BMMSCs BMP-2刺激7 d后ALP活性较正常鼠减低,BMP-2刺激3 d后ALP m RNA水平较正常鼠减弱(P<0.01),Runx2 m RNA水平较正常鼠无明显差别(P>0.05)。结论 :狼疮鼠骨BMP/Smads信号通路处于抑制状态。     

In vivo transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells accelerates repair of injured gastric mucosa in rats

Background  Adult stem cells provide a promising alternative for the treatment of injured tissues. We aimed to investigate the effect of in vivo transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) on injured gastric mucosa in rats.

Methods  The gastric ulcer in rats was induced by indomethacin. BMMSCs from male rats, labeled with the fluorescent cell linker 5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFDA SE), were transplanted into the female rats via tail vein injection. The healing process of gastric ulcers was monitored by HE staining. The protein levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) and the epidermal growth factor receptor (EGFR) in the injured gastric mucosa were determined by immunohistochemistry. 

Results  At 48 and 72 hours after BMMSCs transplantation, the CFDA SE labeled cells were found scattered in the injured gastric mucosa, but not in the gastric mucosa of control rats. At 72 hours after BMMSCs transplantation, the mean ulcer index was 12.67±2.16 in the BMMSCs transplanted group and 17.33±1.97 in vehicle-treated controls (P <0.01). Both VEGF and EGFR protein expression levels were significantly higher in the gastric section from the rats that received BMMSCs transplantation as compared to rats without BMMSCs transplantation.

Conclusion  Autologous BMMSCs transplantation can accelerate gastric ulcer healing in injured gastric mucosa in a rodent model.

     

犬自体骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后胶原纤维含量影响的实验研究

目的探讨犬急性心肌梗死后自体骨髓间充质干细胞(BMMSCs)心肌移植对胶原纤维含量的影响。方法结扎犬冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型,将用Brdu标记的BMMSCs细胞悬液注入心梗区不同部位,取心梗区标本,行Massion三色染色测定胶原纤维含量。结果犬BMMSCs培养生长状况良好,传代后经Brdu标记,标记率达80%;梗死心肌组织切片发现,胶原纤维含量明显减少,血管周围胶原纤维沉积减少。结论犬经心肌内注射途径植入的自体BMMSCs可以在梗死心肌组织内定植、存活,减少胶原形成,从而有利于延缓AMI后的心室重构。     

兔纤维环细胞和骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的:初步探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)与纤维环(AF)细胞的共培养对细胞增殖及主要细胞外基质的影响,进一步确定BMMSCs移植对椎间盘退变的预防和治疗作用。方法:分别培养兔的BMMSCs与AF细胞,将两种细胞按1∶1的比例混匀,利用离心管培养技术培养3周后取材,大体观察并行HE染色;使用荧光染料Hoechst33258检测细胞增殖;通过实时荧光PCR对Ⅱ型胶原、蛋白多糖含量进行测定。结果:在体外培养3周后,细胞团体积达到最大,涂片染色显示共培养组细胞致密,细胞增殖较对照组明显,实时荧光PCR检测结果显示Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达增强。结论:在离心管内三维培养条件下,BMMSCs与AF细胞共培养能够促进增殖,增加Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量。