肝细胞生长因子及其受体与ⅡA期宫颈癌临床病理关系分析

目的 探讨ⅡA期宫颈癌患者血清肝细胞生长因子(Hepatocyte growth facto, HGF)水平及其受体c-Met表达与官颈癌临床病理特征的关系.方法 采用酶联免疫吸附法(ELLSA)及免疫组化法测定48例宫颈癌ⅡA期患者外周血HGF的含量及其组织c-Met受体的表达并分析HGF/c-Met与宫颈癌临床病理特征的关系.结果 血清HGF水平与病理分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P＜0.05);组织中c-Met表达阳性率72.9%,与病理分级、浸润深度有关(P＜0.05);宫颈癌患者血清HGF水平与其组织中c-Met表达阳性率成正相关.结论 HGE/c-Met参与了宫颈癌的发生发展,其表达升高可能在宫颈癌的发生、侵袭及转移中起促进作用,HGF/c-Met的联合检测可望成为判断宫颈癌预后的指标.     

NK4基因转染对裸鼠人卵巢癌种植瘤生长的影响

目的 NK4不仅具有肝细胞生长因子(HGF)拮抗剂的作用,而且具有抗血管生成作用。该实验通过在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4cDNA片段,研究NK4在裸鼠体内对人卵巢癌的治疗作用。方法 NK4和荧光霉素(luciferase)表达质粒分别转染人卵巢癌细胞SKOV-3,稳定转染后,得到SKOV-3/NK4细胞和对照(SKOV-3/LUC)细胞。检测NK4在细胞培养基中的表达情况以及经不同培养基(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4培养基上清)培养后SKOV-3细胞中c-Met和磷酸化-c-Met的表达,检测三组肿瘤细胞(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4)体外生长速度,建立裸鼠皮下肿瘤生长模型,比较三组肿瘤细胞在裸鼠体内的生长速度。结果在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞中无表达。磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达。c-Met表达在各组无差别。三种细胞体外生长曲线差异无显著性(P>0.05)。一周后SKOV-3/NK4细胞接种的肿瘤生长缓慢,SKOV-3和SKOV-3/LUC细胞接种的肿瘤生长迅速,与SKOV-3/NK4组相比有统计学意义(P<0.05)。结论 NK4蛋白在SKOV-3/NK4细胞培养基中大量分泌,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化。在裸鼠体内NK4能抑制卵巢癌细胞生长,NK4可作为卵巢癌基因治疗的新方法。     

PSA特异性树突状细胞瘤苗过继免疫治疗小鼠前列腺癌

目的:利用LNCaP前列腺癌裸鼠模型,观察PSA特异性树突状细胞(dendritic cell,DC)瘤苗(PSA-DC)体外诱导的CTL体内过继输入的抗肿瘤效果。方法:采用裸鼠皮下接种LNCaP细胞的方法建立LNCaP前列腺癌荷瘤裸鼠模型;应用前期制备好的Non-DC、Ova-DC、Lys-DC及PSA-DC瘤苗体外诱导抗原特异性CTL细胞,并在LNCaP细胞接种第15天模型制备成功时首次将体外诱导的抗原特异性CTL细胞经尾静脉过继输入小鼠体内,7 d后重复输入1次。以初次治疗后50 d为终止点,观察肿瘤生长情况;观察各组荷瘤裸鼠的存活情况。结果:过继输入治疗后第30、50天,Non-DC、Ova-DC、Lys-DC及PSA-DC组瘤体明显大于肿瘤细胞接种第15天(P<0.01);Lys-DC、PSA-DC组瘤体明显小于Non-DC、Ova-DC组(P<0.01)。在观察期间内,Lys-DC、PSA-DC组裸鼠生存时间明显长于Non-DC、Ova-DC组(P<0.01)。结论:前列腺癌瘤苗PSA-DC体外诱导的PSA特异性CTL细胞过继输入可抑制裸鼠体内LNCaP肿瘤生长,提高裸鼠生存时间。     

人视网膜色素上皮细胞原代培养及HGF/c-Met的表达

目的：探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)及其受体c-Met在原代培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞中的表达情况。方法：体外培养人RPE细胞，3—5代细胞用于实验；采用免疫细胞化学和RT-PCR方法检测细胞内HGF及其受体c-Met的表达。结果：人RPE细胞HGF及其受体c-Met免疫细胞化学染色的阳性信号分别位于细胞浆内和细胞膜上；RT-PCR方法可检测到HGF及其受体c-Met mRNA的表达。结论：人RPE细胞自身产生HGF并表达其受体c-Met，提示HGF可能通过自分泌和(或)旁分泌途径作用于RPE细胞，涉及眼内多种疾病过程。     

人宫颈癌侧群细胞的分选及其生物学特性的研究

目的通过人宫颈癌细胞中侧群细胞的富集、分离和鉴定,确定其肿瘤干细胞特性,探讨以侧群细胞作为宫颈癌干细胞研究切入点的可行性。方法收集40例宫颈癌患者的手术标本,通过原代培养、流式细胞荧光激活分选法将宫颈癌细胞分为侧群(side population,SP)细胞和非侧群细胞(non-side population,NSP)2个亚群,观察2组细胞的增生和分化能力,并进行裸鼠接种以观察其成瘤能力,化疗药物顺铂以不同浓度作用于SP细胞和NSP细胞后计算细胞抑制率,以评价2组细胞对化疗药物的耐受性。结果人宫颈癌细胞中侧群细胞的比例约为2.04%±0.93%,侧群细胞的比例随分化程度的降低而下降(P<0.05)。细胞生长曲线(MTT法)显示,SP细胞的体外增生能力明显强于NSP细胞(P<0.05);行裸鼠接种时,SP细胞表现出较强的致瘤性,只需1×103个即可致瘤,其致瘤能力是NSP细胞的100倍,且成瘤时间显著缩短;化疗药物顺铂以不同浓度分别作用于SP细胞与NSP细胞24h后,SP细胞的抑制率明显低于NSP细胞(P<0.05)。结论人宫颈癌细胞中存在外排Hoechst 33342荧光染料的SP细胞,分化越差的肿瘤细胞其SP细胞比例越低。宫颈癌SP细胞体外增生能力和裸鼠成瘤能力均强于NSP细胞,对化疗药物具有较强的耐受性,具备肿瘤干细胞的特性,可作为宫颈癌干细胞研究的切入点。     

VEGF—siRNA对人舌癌TCA8113细胞体内及体外生长影响的初步研究

目的探讨针对血管内皮生长因子(VEGF)的小分子RNA干扰(siRNA)对舌癌TCA8113细胞体内和体外生长的影响。方法将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体,以空载体组做实验对照组,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以未转染舌癌细胞作空白对照组,MTT检测转染后各组细胞增殖情况;将稳定转染的各组细胞接种裸鼠,接种后7 d开始,每4 d测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较各时间段肿瘤生长,接种后47 d处死,比较瘤体积和瘤重。结果与实验对照组和空白对照组相比较,两个实验组细胞生长速度降低,细胞抑制率均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),裸鼠接种肿瘤生长缓慢,处死后测量到瘤体体积小、重量轻(P<0.05),而实验对照组和空白对照组细胞抑制率、瘤体体积、瘤重等差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF-siRNA在体内和体外能有效的抑制人舌癌细胞的生长。     

宫颈癌患者血清HGF水平及其组织中受体c-Met表达的临床意义

目的探讨血清肝细胞生长因子（HGF）水平及其受体c-Met在宫颈癌中的表达。方法采用酶联免疫吸附法（ELLSA）及免疫组化法测定15例正常宫颈、例CINⅠ-Ⅱ及15例CINⅢ、例宫颈浸润癌患者血1271清HGF的含量及其组织c-Met受体的表达。结果宫颈浸润癌血清HGF平均浓度为458pg/ml,显著高于正常宫颈175pg/ml、CINⅠ-Ⅱ168pg/ml、CINⅢ245pg/ml（P均〈0.05）;宫颈浸润癌组织c-Met受体阳性率为52.1%显著高于正常宫颈及CIN（P〈0.05）,宫颈癌患者血清HGF水平与其组织中c-Met表达阳性率成正相关。结论宫颈癌血清HGF水平及其组织c-Met阳性表达增高可能是宫颈癌发生发展及侵袭的重要因素,HGF/c-Met联合检测可能成为宫颈癌诊断的指标。     

1,25-二羟基维生素D3对鼠宫颈癌免疫作用的研究

目的探讨1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)对裸鼠宫颈癌移植瘤生长的抑制作用。方法制备BALC/c裸鼠皮下宫颈癌模型20只,随机分为4组:1,25-(OH)2D3组、单纯放疗组、1,25-(OH)2D3+放疗组及对照组,每组5只。观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况,测量肿瘤直径并计算瘤体积。断颈处死裸鼠,天平称量肿瘤的重量。测定引流淋巴结中单个核细胞中CD4+、CD4+CD25+含量。结果 1,25-(OH)2D3组及单纯放疗组对肿瘤生长均有抑制作用,二者联合作用抑制更显著。1,25-(OH)2D3组、单纯放疗组及1,25-(OH)2D3+放疗组抑瘤率分别为34.8%、52.1%、54.1%。1,25-(OH)2D3干预后CD4+、CD4+CD25+含量与对照组及放疗组差异无统计学意义,而CD4+CD25+/CD4+在1,25-(OH)2D3组与对照组相比差异显著(P<0.05),1,25-(OH)2D3+放疗组与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论 1,25-(OH)2D3+放疗对对裸鼠移植瘤宫颈癌生长有显著免疫抑制作用,为宫颈癌的综合治疗提供了实验依据。     

二烯丙基二硫下调PCNA抑制人宫颈癌移植瘤生长

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对宫颈癌HeLa细胞裸鼠致瘤的影响.方法 裸鼠皮下注入人宫颈癌HeLa细胞建立人宫颈癌裸鼠异种移植模型,观察DADS对宫颈癌移植瘤在裸鼠体内生长情况的影响,HE染色观察DADS对移植瘤组织形态的影响,免疫细胞化学检测DADS对移植瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 DADS可明显抑制人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的生长,具有杀伤人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞作用.PCNA蛋白在人宫颈癌移植瘤组织中高表达,DADS作用后PCNA蛋白表达明显下调.结论 DADS可明显降低人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖的PCNA蛋白表达有关.     

蛞蝓有效提取物抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长

目的 观察蛞蝓有效提取物(EL-3)对宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法制备宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤模型,检查EL-3对瘤体积、瘤重及VEGF蛋白表达的影响,评估EL-3在体内治疗宫颈癌的有效性。结果EL-3(10、30和100 mg/kg)实验组的瘤体积显著低于生理盐水组(P<0.05),同时,其移植瘤的瘤重抑制率分别为42.0%、67.0%和83.0%,提示EL-3在体内抗宫颈癌作用较强,且呈剂量依赖性;采用免疫组化检测证实EL-3下调宫颈癌裸鼠移植瘤细胞VEGF蛋白表达。结论EL-3具有抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的作用,其机理可能与抑制肿瘤血管生成有关。     

pSilencer2.0-c-Met-siRNA基因在裸鼠体内对人喉癌Hep-2细胞生长的影响

目的探讨pSilencer2.0-c-Met-siRNA重组质粒对人喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法采用裸鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟c-Met-siRNA基因治疗实验,观察c-Met-siRNA重组质粒的抗瘤疗效,Western-blot法检测重组质粒对c-Met基因及MMP-2、MMP-9、VEGF基因表达的影响。结果肿瘤接种后第35 d,重组质粒组肿瘤体积为13 827 mm^3,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;重组质粒组瘤体内c-Met、MMP-2、MMP-9、VEGF基因表达率比对照组明显降低（P〈0.05）。结论pSilencer2.0-c-Met-siRNA重组质粒能明显抑制人喉癌Hep-2细胞移植裸鼠成瘤后的生长,siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性c-Met治疗的新策略。     

悬浮培养乳腺癌干细胞放疗抵抗与G2期阻滞相关

目的悬浮培养富集MCF-7细胞系中乳腺癌干细胞,探讨其细胞周期与放疗抵抗关系。方法无血清悬浮培养体系富集MCF-7细胞系中肿瘤干细胞,体内成瘤实验验证其干细胞特性,克隆形成检测其辐射敏感性;进一步流式细胞仪分析放疗前后其细胞周期变化,蛋白印记法测定放疗前后pCDC25C(ser216)蛋白含量。结果无血清悬浮培养富集的乳腺癌干细胞体内成瘤能力明显强于贴壁培养细胞;乳腺癌干细胞和贴壁培养细胞SF2Gy分别为0.856±0.061和0.783±0.097(P<0.05);乳腺癌干细胞放疗前后G2期细胞含量分别为22.03%±2.12%和45.83%±2.25%(P<0.01),G2期相关蛋白pCDC25C(ser216)放疗后表达明显增高,而贴壁培养放疗前后细胞周期及周期相关蛋白均无明显差异。结论 MCF-7细胞系中乳腺癌干细胞放疗后出现的G2期阻滞可能与其放疗抵抗特性相关。     

SDZ PSC833和维拉帕米逆转宫颈癌耐药的对照研究

目的:对照研究耐药逆转剂SDZ PSC833和维拉帕米(Verapamil,VER)体内逆转宫颈癌细胞对丝裂霉素(mitomycin,MMC)耐药的效果。方法:利用人宫颈癌耐药细胞亚系HeLa/MMC裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠体内MMC联合应用SDZ PSC833和VER后荷瘤裸鼠肿瘤体积、瘤重、生长曲线及其瘤组织形态学变化,评价SDZPSC833和VER逆转宫颈癌细胞对MMC耐药的效果。结果:裸鼠体内单用MMC抑瘤率为35.79%,联合应用SDZ PSC833和VER后,抑瘤率分别为83.18%和73.24%,分别提高了1.32倍和1.0倍,统计学分析有高度显著差异(P<0.01)。结论:无毒剂量的SDZ PSC833和VER裸鼠体内能基本逆转HeLa/MMC细胞对MMC的耐药性,且SDZ PSC833逆转耐药作用强于VER。     

紫杉醇联合放疗对鼻咽癌裸鼠移植瘤的疗效研究

目的:研究紫杉醇联合放疗治疗鼻咽癌CNE2细胞裸鼠移植瘤的疗效,建立紫杉醇联合放疗治疗鼻咽癌的体内研究模型。方法:建立鼻咽癌CNE2细胞裸鼠移植瘤动物模型,分别进行生理盐水(空白对照组)、紫杉醇(紫杉醇组)、放疗(放疗组)、紫杉醇加放疗(紫杉醇联合放疗组)处理,观察实验动物全身状况、移植瘤生长情况测定及计算抑瘤率。结果:与对照组相比,紫杉醇组、放疗组、紫杉醇联合放疗组的移植瘤重量和体积明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);其中紫杉醇联合放疗组疗效最显著,其肿瘤重量和体积与紫杉醇组、放疗组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。移植瘤鼠在经上述方法处理后在活动、进食和体重变化等情况方面差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:紫杉醇联合放疗对鼻咽癌移植瘤具有明显的抑制作用,无明显不良反应。     

hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对HeLa裸鼠移植瘤生长抑制的作用

目的:探讨hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对宫颈癌HeLa裸鼠皮下移植瘤生长抑制的作用. 方法:将含有hTERT启动子的TRAIL基因载体转染宫颈癌细胞HeLa,检测稳定转染细胞中GFP/TRAIL的表达;实验裸鼠分为基因组,化疗组,放疗组,综合组(基因 放化疗),对照组,每组5只,未转染HeLa组为对照组,不作任何处理;将稳定转染基因载体及未转染的HeLa细胞种植于裸鼠背部皮下,联合放化疗,来观察移植瘤成瘤情况,移植瘤的体积、质量以及质量抑制率的变化. 结果:转染hTERT-TRAIL细胞中GFP/TRAIL(绿色荧光蛋白)表达率高于对照组,有统计学意义 (P＜0.01);各组裸鼠在接种细胞第5～7日全部长出肿瘤小结节,结节出现的时间差异无统计学意义(P＞0.05);转染hTERT -TRAIL细胞与对照组HeLa细胞裸鼠的移植瘤质量相比差异有统计学意义(P＜0.05); hTERT -TRAIL细胞在裸鼠体内所形成的移植瘤生长较慢, 4 wk后肿瘤质量抑制率为43.08%,联合放化疗后肿瘤质量抑制率为61.63%,有统计学意义(P＜0.01). 结论:hTERT启动子驱动的TRAIL对人宫颈癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,联合放化疗能抑制裸鼠移植瘤的生长. 基因治疗联合放化疗等多途径综合治疗为以后的肿瘤研究和临床治疗提供思路.     

细胞因子HGF体外增强骨肉瘤细胞株的增殖和黏附性

【目的】研究肝细胞生长因子/离散因子(HGF/SF)及其受体蛋白c-Met在骨肉瘤细胞株MG-63和HOS中的表达及对瘤细胞生物学行为的影响,探讨HGF/c-Met系统在骨肉瘤细胞生长侵袭过程中的作用。【方法】用流式细胞术检测HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的表达;外源性HGF刺激此2株细胞株后,用MTT法、黏附性检测方法研究细胞增殖速率和黏附性的变化。【结果】HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的阳性表达率均低于3%。HGF浓度达50ng/mL以上时,MG-63和HOS的增殖速率显著增高,P<0.01。当外源性HGF的浓度分别达5ng/mL和10ng/mL时,MG-63和HOS的黏附性指标即显著升高,P<0.01。外源性HGF刺激后HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的表达略有变化,但差异无统计学意义,P>0.05。【结论】HGF可以促进骨肉瘤细胞株MG-63和HOS的体外增殖和黏附能力。     

益气解毒颗粒对HNE3细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用

目的观察益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞HNE3及其裸鼠移植瘤的抑制作用。方法益气解毒颗粒作用于HNE3细胞、宫颈癌细胞及其裸鼠移植瘤，分别进行体外抑瘤试验(包括IC50测定)和体内抑瘤试验。先行体外实验测定益气解毒颗粒对癌细胞半抑制浓度及其杀伤效力，再行体内实验，观察益气解毒颗粒对荷瘤裸鼠HNE3移植瘤的抑瘤效应，并以人宫颈癌细胞Heka移植瘤和荷瘤模型动物作对照。结果益气解毒颗粒对HNE3细胞的半抑制浓度为0．037mg／mL，并显示了明显的体外杀伤效应和细胞凋亡诱导效应。在体内抑瘤实验中，益气解毒颗粒对HNE3移植瘤的抑瘤率为74．7％，伴有细胞增殖速度、成瘤能力的明显抑制，同时提高细胞分化能力，降低肿瘤的侵袭力。结论益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞HNE3具有明显抑制作用。     

肿瘤相关成纤维细胞促肿瘤转移和放射抵抗的相关研究进展

肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)作为肿瘤微环境中的主要细胞类型,其生物学特性具有来源、表型和功能异质性,通过产生和分泌各种趋化因子和促进上皮间充质转化,从而促肿瘤生成、增殖、侵袭和转移。CAFs可介导肿瘤干细胞支持肿瘤产生及增殖,促使肿瘤细胞放疗抵抗。CAFs还可通过旁分泌外泌体,增强肿瘤的生长和能诱导放疗抵抗。大分割放疗应用于CAFs,可诱导CAFs表达衰老表型发生变化,促肿瘤能力下降,为临床肿瘤的放疗带来新契机。     

分割剂量射线照射富集宫颈癌肿瘤干细胞的研究

【目的】 研究分割剂量射线照射的宫颈癌Hela细胞表达肿瘤干细胞相关蛋白情况及裸鼠体内成瘤能力,探讨经此法富集宫颈癌肿瘤干细胞的可行性。【方法】 Hela细胞分组接受分割剂量分别为2、4、6、8、10及12 Gy的射线照射,总照射剂量24 ~ 42 Gy。流式细胞术检测各照射组及对照组细胞的ABCG2、CD44及CD133表达率;各组细胞接种裸鼠皮下,检测其体内成瘤能力。【结果】 各照射组细胞的ABCG2表达率均明显上调,以Hela-R2组(4 Gy×10次)细胞的表达率最高[(46.89±1.20)%],且随着照射次数的增加而升高(P < 0.05);各组细胞的CD44及CD133表达率变化均无明显趋势;Hela-R2组细胞的裸鼠体内成瘤能力最高,其次为Hela-R5组(10 Gy×3次)。【结论】 分割剂量射线照射可在体外富集宫颈癌肿瘤干细胞,以分割剂量为4 Gy组富集效果最好,诱导Hela细胞株表达ABCG2显著上调,及提高其裸鼠体内成瘤能力。     

组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2对白血病SHI-1细胞生长及体内浸润的影响

目的研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)过表达对白血病 SHI-1细胞增殖、侵袭能力以及于裸鼠体内浸润、转移能力的影响。方法用流式细胞术检测 SHI-1细胞膜表面TIMP-2的表达。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT 法)及与白血病患者骨髓基质细胞共培养跨人工基底膜侵袭实验检测高表达 TIMP-2的 SHI-1细胞体外增殖及侵袭能力的改变。经尾静脉接种进行预处理后的6周龄裸鼠,于接种后第30天处死部分裸鼠,检测 SHI-1细胞在各脏器中浸润生长情况。结果 SHI-1/TIMP-2细胞膜表面 TIMP-2的表达为99.3％±0.1％,显著高于 SHI-1/MSCV 细胞TIMP-2表达(85.9％±2.6％,P<0.05),平均荧光强度也提高2.06倍。SHI-1/TIMP-2细胞体外增殖能力及跨人工基底膜侵袭能力强于 SHI-1/MSCV。接种 SHI-1/TIMP-2细胞的裸鼠平均生存期为33.7 d,而接种 SHI-1/MSCV 细胞的裸鼠为40 d,两者之间平均生存期差异有统计学意义,体内浸润转移现象显著增强。结论膜表面高表达 TIMP-2的人单核细胞白血病细胞株 SHI-1/TIMP-2较 SHI-1/MSCV 细胞具有更强的增殖、浸润和转移能力。