革兰阴性杆菌AmpC酶和AmpC耐药基因检测

目的检测革兰阴性杆菌临床分离株的AmpC酶和AmpC耐药基因,探讨产AmpC酶菌株的耐药情况。方法用超声破碎法提取102株细菌的β-内酰胺酶粗提物,进行三维试验,提取细菌总DNA,PCR扩增ampC结构基因和ACT-1、CMY-G1、CMY-G2、DHA、FOX耐药基因,MIC法药物敏感试验分析菌株的耐药性。结果 102株革兰阴性杆菌中三维试验和PCR检测AmpC基因同时阳性的有11株,确认产AmpC酶菌株11株,并全部为鲍曼不动杆菌。三维试验和PCR基因检测AmpC酶的检出率比较,差别无统计学意义（χ~2=1.125,P〉0.05）。ACT-1、CMY-G2、FOX、DHA、CMY-G1的检出率分别为14.7%、12.7%、4.9%、1.0%和0。对产AmpC酶菌株敏感度最高的是丁胺卡那霉素（90.1%）,其次是亚胺培南（54.6%）。结论三维试验和PCR基因检测对AmpC酶的检出率无明显差别,但仍存在假阳性与假阴性。产AmpC酶菌株耐药情况严重,提示临床慎重用药。     

临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌质粒介导AmpCβ内酰胺酶的研究

目的 研究儿科临床大肠埃希菌和克雷伯菌中质粒介导AmpC β内酰胺酶的检出率和基因型.方法 收集2009年1至12月北京儿童医院住院患儿中分离的大肠埃希菌和克雷伯菌.采用头孢西丁纸片扩散法进行大肠埃希菌和克雷伯菌AmpC酶表型初筛,对AmpC酶表型阳性大肠埃希菌和克雷伯菌用多重聚合酶链反应(PCR)方法测定质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR及FOX基因型.结果 大肠埃希菌和克雷伯菌中,共筛选出65株对头孢西丁不敏感的菌株,经多重PCR扩增,有17株AmpC酶DHA型基因阳性,DHA型质粒AmpC酶的总检出率为26.2%.其中,肺炎克雷伯菌14株DHA-1基因阳性,检出率为38.9%(14/36);大肠埃希菌2株DHA-1基因阳性,检出率为7.7%(2/26);产酸克雷伯菌1株DHA-1基因阳性,检出率为33.3%(1/3).其余48株质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR及FOX型基因均为阴性.结论 儿科临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌中,均有质粒介导DHA-1型AmpC酶的产生,其中肺炎克雷伯菌的产生率更高.     

多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性与AmpC耐药基因的研究

目的 了解我院临床分离的60株多重耐药鲍曼不动杆菌(multi-drug resistant Acinetobater baumannii,MDRAB)的耐药性和AmpC耐药基因的存在状况.方法 采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果,对该细菌进行总DNA的提取,用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因,结合药物敏感试验分析菌株的耐药特征.结果 检出结构基因ampC型49株,占81.7%:blaADC基因型50株,占83%;ACT基因型2株;41株菌同时携带blaADC和ampC结构基因,占68%;2株同时携带blaADC、ACT和ampC结构基因;未检测到其它AmpC耐药基因(MOX、CIT、FOX、DHA).携带AmpC耐药基因的菌株耐药率高,特别是对头孢曲松、氨苄西林、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因的耐药率已接近或达到100%,而对于丁胺卡那霉素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为5%和20%.结论 多重耐药鲍曼不动杆菌的blaADC耐药基因和ampC结构基因同时携带率高,并且是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因.     

新CMY型头孢菌素酶在大肠埃希菌中的流行

目的 对临床产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药表型以及分子生物学特性进行研究,以期发现新的头孢菌素酶。方法 对从临床分离的大肠埃希氏菌先后用纸片扩散法、三维试验、等电聚焦试验以及微量稀释法等进行表型检测。然后用接合试验、多重PCR以及基因测序等方法进行分子生物学研究。结果 719株受试的大肠埃希菌经三维试验,等电聚焦以及酶抑制试验表明有6株细菌都能够产一种等电点(PI)为8．9的能够被氯唑西林抑制而不能被克拉维酸抑制的β—内酰胺酶。用微量稀释法检测表明这些菌株对多种三代头孢菌素耐药,但对头孢吡肟、亚胺培南和美洛培南均敏感。接合试验表明它们携带的AmpC酶具有转移性,多重PCR检测表明这些基因来源于费氏枸橼酸杆菌家族,DNA测序表明该基因和CMY-2以及CMY-7有99％的同源性,为一种新的CMY型头孢菌素酶。结论发现了一种新的CMY型头孢菌素酶,它介导了高产AmpC酶大肠埃希菌对多种抗生素的耐药,其耐药性能够水平传播。     

多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因型研究

目的:了解我院临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因分布情况。方法:用三维试验检测15株多重耐药鲍曼不动杆菌ESBLs、AmpC、MBL(金属β-内酰胺酶)产酶情况;用PCR方法检测各种β-内酰胺酶基因。结果:三维试验检出2株菌产ESBLs;9株菌产AmpC;3株菌合产ESBLs和AmpC酶;3株菌产MBL(均同时产AmpC)。PCR检出15株菌均携带blaTEM基因;2株菌携带blaPER-1基因;14株菌携带AmpC基因;未检出产金属β-内酰胺酶基因。结论:我院多重耐药的鲍曼不动杆菌多含有blaTEM基因和AmpC基因,也首次发现部分产PER型ES-BLs鲍曼不动杆菌。     

CMY-39新基因亚型AmpC β-内酰胺酶的特性研究

目的对弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY-39新基因亚型AmpCβ-内酰胺酶进行酶特性研究。方法 pET-32a(+)/CMY-39表达质粒在BL21(DE3)中诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定酶蛋白的表达;原菌株和重组表达菌株进行药敏试验,并提取重组表达菌株的CMY-39酶蛋白进行AmpC酶三维试验和酶动力学检测。结果 pET-32a(+)/CMY-39在大肠埃希菌中大量表达,蛋白相对分子质量约为60000,用特异抗体经Western检测该条带为阳性;AmpC酶三维试验为阳性;CMY型重组菌株药敏试验结果与原菌株相比,对青霉素类和头孢西丁具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致。结论证实重组菌株pET-32a(+)/CMY-39能高效表达CMY-39酶蛋白,表达CMY型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性有所增加,亲和力下降。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因型及流行病学分析

目的：研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产质粒型AmpC酶株的比率、酶的基因型及其流行病学状况。方法：收集本院、福建省立医院两家医院2004年9月至2005年3月的67株耐头孢西丁不重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，用酶提取物三维试验检测高产AmpC酶；抽提高产AmpC酶株质粒。用聚合酶链式反应（PCR）及产物序列分析确定质粒AmpC酶和β内酰胺酶的基因型；质粒转化试验定位耐药基因；ERIC—PCR指纹图确定产酶株间的同源关系。结果：福州两家医院耐头孢西丁菌中产质粒型AmpC酶的发生率，大肠埃希菌分别为16．7％和10．5％。肺炎克雷伯菌则分别为8％和0。2株肺炎克雷伯菌产DHA-1型、4株大肠埃希菌产CMY-2型、1株大肠埃希菌产CMY-22型质粒Am—pC酶；5株产CMY型AmpC酶的大肠埃希菌还分别同时产CTX—M-14、CTX—M-27、TEM-144和TEM-1型β内酰胺酶。7株菌中，1株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌可将头孢西丁耐药性转移给受体菌。7株产酶菌ERIC—PCR指纹图显示，2株肺炎克雷伯菌来自相同克隆，其余菌株来自不同克隆。结论：福州地区发现产DHA-1型AmpC酶肺炎克雷伯菌和产CMY-2型及CMY-22型AmtpC酶大肠埃希菌。CMY-22型AmpC酶和TEM-144型B内酰胺酶是国内外首次报道，GenBank登陆号为DQ256079和DQ256080。     

衰减子基因突变导致临床大肠埃希菌高产头孢菌素酶的研究

目的研究临床分离的一株大肠埃希菌中衰减子基因突变对头孢菌素酶（AmpC）基因表达以及耐药表型的影响。方法用三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等对临床分离的一株大肠埃希菌进行表型检测。采用聚合酶链反应（PCR）、基因测序以及比对等方法对调节基因进行扩增、分析,并把调节基因克隆到pCAT3-basic（无启动子的报告基因载体）上,用酶联免疫法（直接法）和最小抑菌浓度测定（间接法）等方法对基因表达进行研究。结果与标准菌株大肠埃希菌K-12AmpC基因相比,受试菌的衰减子区出现了4个碱基22C—T,26、27TA—GT,32G—A的替换。该株菌三维试验阳性,等电聚焦以及酶抑制试验表明该菌株能产3种等电点（PI）,分别为5．4、8．2及9．0的B一内酰胺酶,等电点为9．0的β-内酰胺酶能够被氯唑西林抑制而不能被克拉维酸抑制。微量稀释法检测表明,该菌株不但对多种三代头孢菌素耐药,而且对头孢吡肟耐药,但对碳青霉烯类抗生素仍敏感。把它的AmpC调节基因成功地克隆到报告基因载体pCAT3-basic中,直接和间接检测表明突变的调节基因表达CAT蛋白的水平比敏感菌株调节基因高约10倍。结论大肠埃希菌衰减子突变能够导致AmpC基因高表达而对多种β-内酰胺类抗生素表现耐药。     

弗劳地柠檬酸杆菌β-内酰胺酶检测

目的探讨弗劳地柠檬酸杆菌所产各种β-内酰胺酶（β-lase）的分布情况。方法以头孢硝噻吩试验检测33株弗劳地柠檬酸杆菌所产β-lase,采用多底物纸片法（协同法、拮抗法）、AmpC酶检测法、碳青霉烯酶分类检测其所产各种β-lase。结果检出33株弗劳地柠檬酸杆菌,其中各种酶全阴菌为4株,29株检出β-lase,总检出率为87．9％（29／33）;头孢硝噻吩试验27株为阳性（81．8％）;29株产酶菌株中,产青霉素酶为2株,产头孢菌素酶为3株,产广谱酶为5株,产超广谱酶为11株,产超广谱酶＋AmpC酶为6株,ESBLs总产酶率51．5％,产碳青霉烯酶为2株（均为复合产超广谱酶＋金属酶）。结论弗劳地柠檬酸杆菌产β-lase率、ESBLs总产酶率和复合产酶率很高,产六种酶,以广谱酶、ESBLs为主。     

鲍曼不动杆菌耐药性与β-内酰胺酶基因研究

目的：了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性和β-内酰胺酶基因分布情况。方法：采用VITEK-60全自动细菌分析仪对215株鲍曼不动杆菌临床分离株进行药敏检测,并通过特异性的PCR和DNA序列测定方法检测试验菌的β-内酰胺酶相关基因。结果：鲍曼不动杆菌对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮/舒巴坦的敏感率最高,为54.1%,对亚胺培南、美洛培南的敏感率分别为46.4%、39.3%,对其他药物的敏感率均很低,对三代头孢的敏感率均低于20%;215株鲍曼不动杆菌中,27株扩增到超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因,占12.6%,包括TEM 16株,占7.4%,SHV 4株,占1.9%,CTX-M-1 4株,占1.9%,OXAⅡ3株,占1.4%,经测序分型分别为TEM-1型、SHV-1型、OXA-21型、CTX-M-15型和CTX-M-22型,未检测到VEB、GES、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、TLA、IBC、OXA-10、OXAⅠ、OXAⅢ、OXAⅣ、OXAⅤ等基因。129株扩增到头孢菌素酶（AmpC）基因,占60.0%,其中ADC阳性82株,占38.1%,DHA、EBC、ACC、CIT基因阳性株分别为35株（占16.3%）、8株（占3.7%）、3株（占1.4%）和1株（占0.5%）,未检测到MOX、FOX、CARB基因;215株菌株中检出OXA-23阳性98株,占45.6%。结论：临床分离鲍曼不动杆菌耐药严重,其携带TEM、ADC、DHA、OXA-23等多种β-内酰胺酶相关基因。     

肠道杆菌耐药基因的研究

目的检测肠道杆菌对抗菌药物的敏感性及其耐药基因。方法选取16株临床分离的肠道杆菌,用纸片扩散法检测其对14种抗菌药物的敏感性。PCR法检测TEM型β-内酰胺酶基因、DHA和ACT-1型AmpC酶基因、aac(6′)-Ⅰb型氨基糖苷类修饰酶基因、qacEΔ1-sul1耐消毒剂和磺胺基因。结果多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢噻吩全部耐药,其余药物显示不同程度的耐药。TEM型β-内酰胺酶基因检测均为阳性。对卡那霉素耐药的志贺菌和大肠埃希菌aac(6′)-Ⅰb基因检测阳性,大肠埃希菌qacEΔ1-sul1基因检测均为阳性而志贺菌均为阴性。AmpC酶基因检测结果有2株菌ACT-1阳性而DHA全阴。结论多重耐药细菌存在多种耐药基因。     

耐亚胺培南鲍氏不动杆菌超广谱β-内酰胺酶与AmpC酶研究

目的：研究临床分离的54株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌耐药表型和基因型。方法：应用VITEK 2-compact全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,采用改良三维试验方法同时检测AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶,用PCR检测ampC和blaTEM基因,并进行基因测序。结果：54株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌中,对抗菌药物耐药率除左氧氟沙星、美罗培南和头孢哌酮/舒巴坦外均〉77%,对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低（24.1%）。三维试验表明,36株（66.7%）单产AmpC酶,6株（11.1%）单产超广谱β-内酰胺酶,6株（11.1%）同时产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶。54株菌（100.0%）经PCR扩增和序列分析表明均同时携带ampC和blaTEM-1基因。结论：耐亚胺培南鲍氏不动杆菌多重耐药现象严重,同时携带ampC和blaTEM-1基因是本组鲍氏不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药的主要原因。     

临床分离弗劳地枸橼酸杆菌耐药性分析及质粒介导的AmpC酶基因检测

目的了解安徽地区临床分离弗劳地枸橼酸杆菌临床分布、耐药性及质粒介导Amp C酶(p Amp Cs)基因的流行情况。方法收集2012～2017年安徽省细菌耐药监控中心监测网内的34所医院报送的临床分离的104株弗劳地枸橼酸杆菌,采用琼脂稀释法进行抗生素敏感性实验。提取细菌质粒,聚合酶链式反应(PCR)检测质粒介导Amp C酶基因,对阳性扩增产物进行测序分析; Amp C酶阳性菌株做转移接合试验,PCR扩增并测序确定接合子的基因型;测定供体菌、受体菌和接合子对多种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。结果 104株弗劳地枸橼酸杆菌临床分布广泛,最多见于呼吸内科(30. 77%)及重症监护病房(24. 04%),标本来源以痰液、尿液最多。4株Amp C酶基因阳性的菌株中,有3株DHA-1基因阳性,1株ACT-1基因阳性。4株Amp C酶基因阳性的菌株有3株转移接合成功。这3株接合子与受体菌相比,对多种常用抗生素尤其是β-内酰胺类抗生素的MIC值提高了8～128倍。结论弗劳地枸橼酸杆菌临床分布广泛,耐药严重,携带有质粒介导的Amp C酶基因的菌株对多种β-内酰胺类抗生素耐药,并且可通过接合性质粒在不同菌属间播散。     

多重耐药的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的检测及耐药性研究

目的 对286株铜绿假单胞菌（PA）持续高产金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的检测及耐药性分析，揭示其耐药机制，指导临床合理用药。方法 采用VITEK-32和ATB自动微生物分析仪进行286株铜绿假单胞菌的鉴定与药敏试验，对可疑产金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的菌株，用改良酶提取物三维试验法和双纸片协同试验进行三种酶表型的确证。结果 286株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的总检出率为17．8％（511286），其中，金属酶的检出率为8．7％（25／286），ESBLs的检出率为5．2％（151286），AmpC酶的检出率为3．8％（111286），金属酶＋AmpC酶的检出率为0．7％。产酶菌株的耐药性比非产酶菌株的耐药性明显严重，产酶菌对第3、第4代头孢菌素、单环β-内酰胺类、氟喹诺酮类、磺胺类及酶抑制剂复合抗生素的耐药率均高于50％，结论 产生AmpC酶、ESBLs和金属β-内酰胺酶是PA对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制，产酶菌株对多种抗生素耐药，应加强对3种β-内酰胺酶的检测，合理使用抗生素，减少耐药菌株的产生及播散。     

鲍氏不动杆菌致呼吸机相关性肺炎的耐药性分析及其-内酰胺酶基因研究

目的探讨鲍氏不动杆菌（ABA）致呼吸机相关性肺炎（VAP）的耐药性,并对其β-内酰胺酶基因研究分析。方法收集明确诊断19例ABA致VAP的细菌,采用纸片扩散法测定32种抗菌药物的敏感性;采用三维试验检测ESBLs、AmpC酶、Metalloβ-内酰胺酶存在情况;采用PCR法检测β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶、碳青烯酶、AmpC酶等21种基因。结果19株ABA菌TEM阳性19株,OXM-23群阳性10株,ADC阳性14株,其余基因均为阴性;半数以上菌株同时携带TEM、OXM-23、ADC。结论ABA致VAP的耐药性强,多数同时携带3个β-内酰胺酶耐药基因,对β-内酰胺类抗生素高度耐药。     

大肠埃希菌耐药特征及AmpC酶基因分析

目的：了解产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌耐药表型和AmpC酶基因型。方法：用双纸片扩散法和E-test筛选确认大肠埃希菌产ESBLs和AmpC酶菌株,通过PCR基因扩增对AmpC酶耐药基因型进行确认。结果：68株产生超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌中有1株为AmpC酶。结论：大肠埃希菌是产生ES-BLs的常见菌,同时产生AmpC酶的菌株使其耐药性增强,实验室对其检测和监控非常重要。     

株多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

目的了解多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因存在状况和遗传学背景。方法聚合酶链反应法对多重耐药的肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、质粒AmpC酶基因、qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因、整合子遗传标记（整合酶基因）、Tn21／Tn501转座子遗传标记（汞离子还原酶基因）检测。结果TEM、SHV型β-内酰胺酶基因，DHA型质粒AmpC酶基因，aac（6’）-I型氨基糖苷类修饰酶基因，qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因，整合子遗传标记（intIl整合酶基因），Tn21／Tn501转座子遗传标记（merA汞离子还原酶基因）检测阳性。结论多重耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因和I类整合子、Tn21／Tn501转座子。     

下呼吸道标本肺炎克雷伯菌的耐药性分析及产ESBLs和AmpC酶的检测

目的探讨下呼吸道标本肺炎克雷伯菌的耐药性分析及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的检测。方法采用双纸片协同扩散法检测ESBLs和改良三维试验检测AmpC酶,并采用纸片扩散（K-B）法检测180株肺炎克雷伯菌对18种常用抗生素的耐药率。结果180株分离的肺炎克雷伯菌中检出单产ESBEs70株（38．9％）,单产AmpC酶22株（12．2％）,同时产AmpC酶和ESBLs即超超广谱-内酰胺酶（SSBLs）12株（6．7％）。单产AmpC酶、ESBLs及SSBLs对18种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株（除哌拉西林／他巴唑）。结论下呼吸道感染肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生ESBLs和AmpC酶,临床经验用药可选择β-内酰胺类／β-内酰胺酶抑制剂和头霉素类抗生素,对重症感染首选碳青霉烯类抗生素。     

阴沟肠杆菌耐药性与AMEs及BLa基因研究

目的了解分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶、β-内酰胺酶相关基因存在状况，给防治提供参考。方法采用MicroScan微生物鉴定系统Neg Combo Panel Type 21阴性复合板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应方法分析氨基糖苷类修饰酶及β-内酰胺酶编码基因。结果20株菌均呈严重多重耐药，仅对亚胺培南高度敏感（耐药率5.0％），哌拉西林／他唑巴坦耐药率50．0％，对包括3、4代头孢在内的其他β-内酰胺类及氨基糖苷类抗生素耐药率90．0％～100．0％，对复方新诺明耐药率100％；20株菌均检出氨基糖苷类修饰酶基因，未检出aac（3）-Ⅲ和aac（3）-Ⅳ基因；19株（95．0％）菌检出β-内酰胺酶相关基因，TEM和DHA基因阳性率均为70％，9株菌（45．0％）同时检出TEM和DHA基因，未检出SHV、OXA、PER、VEB和GES基因。结论广州地区医院感染阴沟肠杆菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因、DHA型质粒AmpC酶基因和TEM型β-内酰胺酶基因携带率高，在介导细菌耐药方面起重要作用。     

产AmpC酶和ESBLs的大肠埃希菌药敏分析

目的了解医院感染病原体中大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株产生及其耐药情况。方法对2008年确诊为医院感染的患者所检出的大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株情况及其耐药率进行统计分析。结果2008年150株大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株检出率分别为22.0%及55.0%。产ESBLs及AmpC酶大肠埃希菌抗菌药物的药敏耐药率均高于不产ESBLs、AmpC酶菌株。仅有阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美洛培能对产ESBLs大肠埃希菌和AmpC酶菌株具有良好抗菌活性。结论医院感染大肠埃希菌耐药情况严重,应依据其耐药特点及变化趋势,采取适当的医院感染预防控制措施。