改良MTT比色法测定、计算IL-2活性在临床上的应用

本研究将改良的MTT比色法应用于临床检测IL-2活性,并与~3H-TdR掺入法进行了比较。结果表明,改良的 MTT比色法在应用 CTLL_2增殖检测IL-2活性时,其敏感性,所需细胞数与~3H-TdR掺入法无显著差别。由于改良MTT比色法的应用,使IL-2活性的计算得以用直接线性回归方法计算,同时还比较了直接线性回归法与增殖指数计算法的区别,观察到前者所选用的稀释度数量、比例均适用于临床检测,并明显精确于增殖指数法。     

白细胞介素-2检验方法的比较研究

应用白细胞介素-2(IL-2)依赖T细胞株(Cytotoxic T Lymphocyte line)检测 IL-2,~3H-TdR掺入法与四甲基偶氮唑(MTT)比色法的检测效果,两者有一定的一致性。~3H-TdR掺入法重复性较好。在IL-2活性单位的计算方法上,比较了直接作图法、直接回归分析及正概率分布法,并对这些方法进行了讨论。不论用何种方法统计分析,在检测样品 IL-2时用标化的 IL-2作对比是必需要的。     

齿密螺旋体对淋巴细胞免疫抑制作用的研究

齿密螺旋体超声破碎提取物与淋巴细胞相互作用后,用~3H-TdR 微量掺入法检测该提取物对淋巴细胞 DNA 合成作用的影响.其结果证实该提取物时淋巴细胞 DNA 合成有抑制作用,但不影响淋巴细胞的活性.     

流式细胞术法与3H-TdR掺入法观察细胞增殖的相关性研究

目的:研究3H-TdR掺入法和流式细胞术法研究指标的相关性,探讨用流式细胞术法来替代3H-TdR掺入法的数据依据.方法:用3H-TdR掺入法和流式细胞术法对细胞DNA合成和有丝分裂进行检测.结果:流式细胞仪指标与3H-TdR掺入实验指标呈高度的正相关关系,相关系数分别为:PI与cpm相关系数为r=0.964;SPF与3H-TdR,掺入的相关悉数r=0.876,且经检验有统计学意义(P＜0.01).结论:主动脉平滑肌细胞增殖指数、S期细胞分数与3H-TdR掺入值密切相关.     

固相CD_3MCAb+IL_2诱导T杀伤细胞的实验研究

用人外周血单个核细胞(PBMC)与固相CD_3单克隆抗体(CD_3 McAb)和不同浓度的IL_2短期体外共同制备T杀伤细胞(T—activated killer,T-AK)。另以 PBMC与IL_2制备LAK细胞。经直接计数法MTT法及间接免疫荧光法检测比较此二种细胞的增殖、细胞毒活性及Tac受体的表达水平。结果表明,T-AK细胞优于LAK细胞在于增殖能力的增加而非细胞毒作用的增强,增殖的机理与IL_2/IL-2R途径有关,并提示T-AK较IL_2/LAK疗法更具有临床应用价值。     

鳖血清抑癌活性的研究

采用同位素掺入法,以同位素标记物掺入速率为指标,观察了鳖血清对艾氏腹水癌细胞和正常小鼠骨髓细胞的DNA、RNA和蛋白质生物合成的影响,结果表明鳖血清可强烈地抑制~3H-TdR、~3H-UR和~3H-Leu掺入癌细胞,其抑制率分别为96.8％、94.8％和91.9％,而对~3H-TdR和~3H-UR掺入骨髓细胞的抑制率为39.4％和37.3％。将鳖血清在50℃加热十分钟,其抑制同位素标记物掺入靶细胞的活性几乎全部丢失。但鳖血清在生理盐水中透析不影响它的抑制活性。这些结果提示,鳖血清中存在某种不耐热的组份,可强烈抑制癌细胞生长,同时对正常骨髓细胞也有一定抑制作用。     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞中Gax基因表达及细胞增殖的影响

目的探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中生长终止特异性同源盒(growth arrest-spec ific homeobox,Gax)基因表达及细胞增殖的影响。方法以RT-PCR法、免疫细胞化学法和W estern blot法测定经低氧处理后的大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达3。H-TdR掺入法观察低氧处理后PASMCs增殖情况。结果RT-PCR、免疫细胞化学和W estern blot检测证实低氧(2.5%O2)处理后的PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达逐渐降低;与常氧组比较,低氧组Gax mRNA和蛋白的表达显著下降3。H-TdR掺入法测定结果示PASMCs3H-TdR掺入量在低氧6 h开始增加,随着低氧时间延长,3H-TdR掺入量逐渐增加,至低氧24 h时3H-TdR掺入量最高。结论低氧可下调大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达并诱导PASMCs增殖,提示Gax基因在低氧性PASMCs增殖过程中可能起着重要作用。     

用CTLL细胞~3H-TdR掺入法检测鼠麻风杆菌感染小鼠IL-2活性的初探

作者采用白细胞介素2(Interleukin 2,IL-2)依赖细胞株(Cytotoxic T-lymphocyte line,CTLL)~3H-TdR 掺入法,分别检测了正常的和鼠麻风杆菌(Mycobacterium lepraemurium,MLM)感染的BALB/c 小鼠脾细胞产生IL-2的能力及IL-2活性,以探讨麻风病的免疫抑制机理。结果表明:对 IL-2绝对依赖的 CTLL 细胞的增殖反应与加入 IL-2的含量呈正相关(r=0.9862);经MLM感染的小鼠的IL-2 活性明显降低,与正常小鼠比较,二者有显著性差异(P<0.001)。提示 IL-2活性降低可能与MLM 感染小鼠的免疫抑制现象有关。     

牛磺酸对肺动脉内皮和肺动脉平滑肌细胞增殖的双向调节作用

目的探讨肺动脉高压发生发展的细胞机制和牛磺酸对缺氧性肺动脉高压的防治作用。方法体外培养新生雄性小牛肺动脉内皮细胞(PAECs)及肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),用3H-TdR掺入法比较缺氧时PASMCs与PAECs的增殖情况,同时测定在培养液中加入牛磺酸后其增殖的改变。结果2.5%O2和<1%O2条件下培养6~24 h,PAECs的3H-TdR掺入量均显著低于常氧对照组(降低15%~48%,P<0.05);而PASMCs于缺氧12 h后3H-TdR掺入量均显著高于常氧对照组(增加19%~34%,P<0.05)。牛磺酸对细胞增殖的影响与浓度有关,高浓度(10~20 mmol/L)的牛磺酸抑制缺氧的内皮及平滑肌细胞的3H-TdR掺入,而低浓度的牛磺酸促进缺氧时PAECs的3H-TdR掺入(P<0.05),抑制缺氧时PASMCs的3H-TdR掺入(P<0.05)。结论缺氧抑制内皮细胞的增殖而促进平滑肌细胞的增殖,适当的牛磺酸可以对抗缺氧对PAECs和PASMs的作用,减弱缺氧对PAECs的增殖抑制作用,抑制缺氧的促PASMCs增殖作用,使之接近常氧水平。     

影响~3H-TdR掺入法测定正常小鼠淋巴细胞转化的因素的探讨

淋巴细胞是参与机体免疫的一大类免疫活性细胞。很多幼物有一部分淋巴细胞在致有丝分裂剂(Mitogen)作用下可被激活。致有丝分裂剂广泛用于估计个体免疫系统的功能,通常用PHA或ConA来测定T细胞功能。被激活的淋巴细胞转化为成淋巴细胞,可以从形态改变或对~3H-TdR掺入量的改变来量度。 ~3H-TdR掺入法测定人周血淋巴细胞转化,已在临床检验和基础研究中得到广泛应用。小鼠是免疫学研究中常用的实验动物,对小鼠淋巴细胞转化条件的研究,将有助于建立检测细胞免疫功能及观察免疫活性细胞之间相互作用的实验模型。本文对~3H-TdR掺入法测定正常小鼠淋巴细胞转化(以下简称淋转)的影响因素进行了探讨。     

安氟醚和普鲁卡因静—吸复合麻醉对患者IL_2产生及LT的影响

本文报道了用小鼠胸腺细胞 MTT 比色分析法检测安氟醚和普鲁卡因静一吸复合麻醉患者白细胞介素2(IL_2)及淋巴细胞转化(LT)的动态变化。结果表明,该组药物静一吸复合麻醉对患者 IL 的产生及 LT 均有明显抑制作用。麻醉后96小时可恢复到麻醉前水平,其抑制作用及恢复的机理有待进一步探讨。     

改进的MTT比色分析法在检测白细胞介素—1活性中的应用

本文应用改进 MTT 的比色分析法检测白细胞介素—_1(IL—_1)活性,并与传统的~3H—TdR 掺入法相比较,证实两者有较好的一致性。而改进的 MTT 比色分析法具有简便,快速,无需使用放射性同位素的优点,便于推广使用。     

人外周血IL-2活性检测两种方法的对比研究

本文采用ＭＴＴ比色分析法及３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测ＩＬ－２活性，结果显示：ＭＴＴ比色法与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定结果一致，但是ＭＴＴ比色分析法检测ＩＬ－２活性更简便、快速、经济、实用     

体外诱导LAK细胞活性方法及其意义

目的：比较不同诱导方法对LAN细胞杀伤活性的影响。方法：外周血单个核细胞（PBMC）用重组白细胞介素-2（rIL-2）体外诱导LAK细胞，采用3H－TdR释放法测定LAK活性。结果；（1）PBMC诱导3h后，LAK活性高于或至少不低于24～72h者；（2）PBMC诱导3h后洗去游离的rIL-2，并不影响继续诱导LAN细胞活性；（3）PBMC分离后以清洗2次为佳；（4）PBMC用正常人血浆培养比用肝炎病人自体血浆培养诱导的LAK活性高。结论：在本试验系统中，PBMC分离后，清洗2次，以正常人血浆经IL-2诱导3h为最佳回输条件。     

四甲基偶氮唑盐比色法测定白细胞介素-2活性及淋巴细胞增殖反应

用改良MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法检测白细胞介素-2(IL-2)活性和淋巴细胞转化反应,并与~3H-dT掺入法相比较。结果表明,改良MTT比色法具有简单、快速、敏感的优点,不仅适用于检测IL-2,同时也可用于淋巴细胞转换试验。在与~3H-dT掺入法平行试验时发现,两者平行相关(相关系数均>0.90)。本法无需接触同位素,便于推广应用。     

IL-6对照射小鼠脾淋巴细胞亚群活性的影响

目的研究白细胞介素6（IL-6）对照射小鼠脾淋巴细胞亚群自然杀伤活性的影响。方法BALB／C小鼠分为照射组、对照组和照射＋IL-6组，采用Panning法从小鼠脾淋巴细胞中分离L3T4、Lyt2和B细胞，用^3H-TdR释放实验检测脾淋巴细胞亚群自然杀伤活性。结果照射＋IL-6组与对照组比较，^3H-TdR释放量有显著性差异（P〈0．01）。结论IL-6具有促进照射小鼠脾淋巴细胞亚群活性作用。     

改良的MTT比色法测定NK细胞杀伤活性

目的：为提高ＭＴＴ比色法检测自然杀伤（ＮＫ）细胞活性的稳定性。方法：用改良的ＭＴＴ比色法对ＮＫ细胞的杀伤活性进行了测定,同时与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法相比较。结果：改良的ＭＴＴ法在保留了简单、敏感,可重复及安全等特性的同时,其稳定性大大提高。相关性研究表明,改良的ＭＴＴ法与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法具有高度的相关性（γ＞０９４）。结论：改良的ＭＴＴ比色法在免疫学、肿瘤学及临床研究方面极具实用价值,便于推广应用     

PYK2小干扰RNA对成年大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的以富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(PYK2)为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,探讨PYK2小干扰RNA表达载体对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响.方法以pAVU6 27质粒为载体,以PYK2为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,行酶切和测序鉴定.用PYK2短发夹状小干扰RNA表达载体转染体外培养的成年大鼠心脏成纤维细胞,反转录聚合酶链反应和Western blot法检测PYK2基因和蛋白表达的改变,四唑盐比色法和3H-TdR掺入率检测转染后细胞的增殖和DNA合成情况.结果酶切鉴定和测序分析表明靶向PYK2的RNA干扰重组体构建成功;重组体转染CFs后,PYK2的mRNA和蛋白水平较空载体转染的对照组显著下降;重组体转染CFs后MTT比色A值和3H-TdR掺入率均明显低于对照组.结论PYK2小干扰RNA表达载体是抑制心脏成纤维细胞增殖和DNA合成的有效手段,有利于深入探讨PYK2在心肌纤维化发生发展中的作用.     

3-溴丙酮酸对人肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过3-溴丙酮酸作用于HepG-2细胞,观察3-溴丙酮酸对HepG-2细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测细胞增殖,倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡。结果：3-溴丙酮酸在25～75μg/mL范围内,对HepG-2细胞的增殖具有明显的抑制作用并呈现剂量依赖性。3-溴丙酮酸处理HepG-2细胞后,倒置显微镜观察到细胞生长稀疏,细胞质透亮度下降,细胞脱落增多;透射电镜观察到染色质固缩、边集,核质内可见空泡。流式细胞术结果显示3-溴丙酮酸可将HepG-2细胞阻滞于S期,且DNA直方图上可见亚二倍体峰。在3.125～25μg/mL范围内,3-溴丙酮酸可剂量依赖性的诱导HepG-2细胞凋亡。结论：3-溴丙酮酸抑制HepG-2增殖并诱导HepG-2凋亡。     

PYK_2小干扰RNA对成年大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的以富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(PYK2)为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,探讨PYK2小干扰RNA表达载体对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响。方法以pAVU6 27质粒为载体,以PYK2为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,行酶切和测序鉴定。用PYK2短发夹状小干扰RNA表达载体转染体外培养的成年大鼠心脏成纤维细胞,反转录聚合酶链反应和Westernblot法检测PYK2基因和蛋白表达的改变,四唑盐比色法和3H-TdR掺入率检测转染后细胞的增殖和DNA合成情况。结果酶切鉴定和测序分析表明靶向PYK2的RNA干扰重组体构建成功;重组体转染CFs后,PYK2的mRNA和蛋白水平较空载体转染的对照组显著下降;重组体转染CFs后MTT比色A值和3H-TdR掺入率均明显低于对照组。结论PYK2小干扰RNA表达载体是抑制心脏成纤维细胞增殖和DNA合成的有效手段,有利于深入探讨PYK2在心肌纤维化发生发展中的作用。