抗人胸腺细胞单克隆抗体2G_2B_2和2G_2C_2的制备及特性鉴定

用杂交瘤技术制备２株单克隆抗体（单抗）２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２。经研究发现,它们主要与胸腺细胞、脐血及ＰＨＡ激活的外周血单个核细胞等反应;免疫组化显示其主要作用于皮质胸腺细胞;与造血系统中分化早期的瘤细胞、骨髓瘤细胞等反应阳性率较高。生物学特性鉴定结果提示,单抗均属免疫球蛋白ＩｇＧ１亚类,腹水效价达１：１２８０００,所识别抗原分子量为４５／４６ＫＤａ,无抗原调变作用。故２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是类似ＯＫＴ１０的抗ＣＤ３８单抗,但竞争抑制结果表明三者分别作用于不同的抗原决定簇,即２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是两个抗ＣＤ３８新单抗。     

B细胞系特异性单克隆抗体ZCH－4－2E8的制备鉴定及其初步应用

本文报告一种识别Ｂ细胞系白血病相关抗原的鼠单克隆抗体ＺＣＨ－４２Ｅ８（ＩｇＧ１），免疫印迹试验示其所识别的抗原分子量为２４５ｋｄ。经多种细胞系、正常外周血细胞成分、骨髓单个核细胞、胚胎肝、脾、胸腺和１３８例急、慢性白血病细胞的鉴定结果表明，２Ｅ８为Ｂ细胞系特异性单抗，其反应谱与ＣＤ１９类似，但其尚能识别早至１８周龄的胚胎脾（Ｂ）细胞，阳性率为３１．９％（ＣＤ１９为０％）。作者认为：２Ｅ８是一种能用于分化早期Ｂ细胞系急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的诊断和急性未分化型白血病（ＡＵＬ）鉴别诊断的Ｂ细胞系特异性单抗。     

基因重组人粒细胞集落细胞刺激因子单克隆抗体的制备及特性

采用高效免疫方法，利用ｒｈＧ－ＣＳＦ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，经过两次融合制备了３株抗ｒｈＧ－ＣＳＦ的单克隆抗体，分别命名为１Ｈ１１、２Ｂ３，３Ｃ３；抗体类型均为ＩｇＧ２ａ，，免疫印迹试验证明为特异性抗Ｇ－ＣＳＦ的单克隆抗体，单抗加试验和单抗竞争试验表明３株单抗针对Ｇ－ＣＳＦ两具不同的抗原决定簇；中和试验表明２Ｂ、２Ｃ３识别的位点与Ｇ－ＣＳＦ刺激ＮＦＳ－６０细胞增殖活性有关。     

肝癌单克隆抗体HL_2在肿瘤组织中免疫组化的观察

本文用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹法测定人肝癌相关抗原──ＨＬ＿２抗原分子量为５０ｋｄ。ＡＢＣ免疫组织化学染色１２７例肿瘤及肝病变组织石蜡切片显示ＨＬ＿２单抗与原发性肝细胞癌组织有较高的阳性反应率（６２．７％），与胃癌组织也有较多的交叉反应（８／１０），但与消化道其他癌和肝炎组织仅有少量的交叉反应，与肝硬化及其他系统的癌组织无交叉反应，说明单抗ＨＬ＿２对原发性肝细胞癌的诊断及与其它系统肿瘤的鉴别诊断有一定的临床应用价值．     

抗肺炎衣原体种特异性单抗制备及初步鉴定

以纯化的肺炎衣原体ＡＴＣＣＶＲ１３１０原体兔疫８周龄雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，并于第１４天加强免疫，第２４天将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合。杂交瘤细胞进行细胞与克隆的直接选择，在淘汰与沙眼衣原体Ｌ１、Ｌ２、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ鹦鹉热衣原体ＥＡＥ以及未感染的ＢＧＭＫ细胞有交叉反应的克隆后，最终获得２株分泌抗肺炎衣原体种特异性单克隆抗体（ＭＡｂ９）杂交瘤（Ｐ１７Ｃ２和Ｐ３３Ｃ），其免疫球蛋白类型均为ＩｇＧ２ａ。Ｗｅｓｔｅｍ印迹发现两株ＭＡｂｓ均与三个种的衣原体主要外膜蛋白反应，但ｍｉｃｒｏ－ＩＦ显示它们系肺炎衣原体种特异性单抗其腹水ＭＡｂｓ滴度＞１：２５６００。     

TGFβ1对胃腺癌细胞SGC—79001,Bcl—2表达的影响

研究转化生长因子β１对胃癌细胞Ｂｃｌ－２的表达的影响。方法：ＴＧＦβ１作用于人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１，４８Ｈ后收集细胞爬片。用抗Ｂｃｌ－２ｍＡｂ和免疫组织化学ＳＡＢＣ法及图像分析技术分析Ｂｃｌ－２。结果；ＴＧＦβ１作用的胃腺癌细胞Ｂｃｌ－２表达量１     

抗胃转移性腺癌细胞系单克隆抗体的制备及鉴定

用胃转移性腺癌细胞系ＳＧＣ７９０１免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，筛选出４株抗胃癌单克隆抗体，分别命名为ＢＭＧ１，ＢＭＧ２、ＢＭＧ３和ＢＭＧ４。经间接细胞免疫荧光和ＡＢＣ免疫组化染色鉴定，这组单抗与胃癌细胞系和胃癌组织有高的反应性，其中ＢＭＧ１、ＢＭＧ３与中分化腺癌及低分比腺癌的反应性分别为８４．６％和８３．３％；与正常胃粘膜腺体不反应；与部分异型增生腺体呈阳性反应。初步认为，此组单抗在胃癌的组织学和体液诊断方面有一定应用价值。     

河豚毒素单克隆抗体的制备及特性

河豚毒素（ＴＴＸ）与角孔ｑｉ血蓝蛋白（ＫＬＨ）结合生成完全抗原，用此抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠（５～６周龄），取２只小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞融合，ＥＬＩＳＡ法检测阳性克隆，共检出５株高效价抗ＴＴＸ阳性克隆细胞，对此抗ＴＴＸ单克隆抗体分析结果表明：（１）单抗对ＴＴＸ有很高的抑制作用。１０＾－９水平的毒素就可抑制单抗５０％左右的Ａ值。（２）抗体属ＩｇＧ１亚类，ＩＣ５０为２．５～５μｍｏｌ／Ｌ。（     

CD40培养体系的建立及B淋巴细胞的体外培养

采用自行研制成的功能性抗人ＣＤ４０单克隆抗体、转导ＣＤ３２的Ｌ细胞（ＬＣＤ３２）和细胞因子建立体外研究人Ｂ淋巴细胞增殖、生长和分化的ＣＤ４０系统。方法：①流式细胞仪分析ＣＤ４０分子的表达;②在ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１）与ＬＣＤ３２共培养中,加入ＩＬ－４及其它细胞因子,组成ＣＤ４０培养系统,观察人扁桃体来源Ｂ细胞的体外生存和增殖等生物学效应。结果：①ＣＤ４０分子表达于人外周血、扁桃体来源的Ｂ细胞及人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞株ＸＧ２和人Ｂ淋巴瘤细胞株Ｄａｕｄｉ;②用ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１和２Ｇ１１）与ＬＣＤ３２细胞联合ＩＬ－４能使静止期Ｂ细胞体外长期生存和增殖。表明用激发型ＣＤ４０单抗５Ｃ１１和２Ｇ１１建立的ＣＤ４０培养体系,能使Ｂ细胞长期生存和增殖,为体外研究Ｂ细胞提供了有效的手段。     

化疗＋G—CSF与化疗＋G—CSF＋GM—CSF动员外周血干细胞效果？…

目的：比较化疗＋Ｇ－ＣＳＦ与化疗＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ二种动员方案动员外周血干细胞（ＰＢＳＣ）和造血重建的效果。方法：将３３例患者（急性白血病２３例，恶性淋巴瘤９例，乳腺癌１例）分为化疗＋Ｇ－ＣＳＦ与化疗＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳ组，化疗后ＷＢＣ最低时开始分别应用Ｇ－ＣＳＦ１５０μｇ皮下注射，２／ｄ及Ｇ－ＣＳＦ１５０μｇ，ＧＭ－ＣＳＦ１５０μｇ，皮入注射，上，下午各１次。动员３ｄ后行ＰＢＳＣ采集     

HCG特异的10株单克隆抗体的研制

用杂交瘤技术获得１０株ＨＣＧ特异的单克隆抗体（简称单抗）。其中，２６ＡＧ只与全ＨＣＧ反应而不与ＨＣＧ－α或ＨＣＧ－β反应，其余９株与全ＨＣＧ和ＨＣＧ－β反应而不与ＨＣＧ－α反应。放射免疫试验（ＲＩＡ）表明这１０株单抗与ＬＨ及ＦＳＨ无明显的交叉反应。３０ＡＧ及３４ＡＧ与１３５Ｉ－ＨＣＧ的结合可被标准ＨＣＧ抑制，这两株单抗与ＨＣＧ的亲和力均约２×１０９Ｌ／Ｍ。１０株单抗均耐反复６次冻融，除３３ＡＧ外都还耐５６℃３０分钟热灭活。单抗Ｉｇ类别．９株都是ＩｇＧ１，只３０ＡＧ是ＩｇＧ２ｂ。     

OK—432和IL—2联合用药对C57BL／6小鼠Lewis肺癌的抑制作用及Bc1—2表达的影

目的 研究Ａ组溶血性链球菌冻干生物制剂ＯＫ－４３２联合白细胞介素２（ＩＬ－２）对小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）生长的抑制作用及对Ｂｃ１－２表达的影响。方法 将４０只Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤ＬＬＣ小鼠分４组,分别用生理盐水、ＯＫ－４３２、ＩＬ－２和ＯＫ－４３２联合ＩＬ－２处理,观察用药后肿瘤生长的状况,用抗鼠ｂｃ１－２单克隆抗本进行ＳＡＢＣ免疫组化技术半定量测定Ｂｃ１－２在Ｌｅｗｉｓ肺癌原发灶中的表达。结果 ＯＫ－４３２／ＩＬ－２抑制肿瘤作用强,抑瘤率为６０％,（Ｐ〈０．０５）。对照组中的Ｂｃ１－２的表达明显高于联合用药组（Ｐ〈０．０５）。结论 ＯＫ－４３２与ＩＬ－２有明显的协同抗肿瘤活性,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击,并促进体内多种反应细胞相互作用,其机制可能与抑制Ｂｃ１－２基因的表达、诱导瘤     

抗人粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术，用重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地获得了多种能够分泌抗ｒｈＧ－ＣＳＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交癌细胞。对其中的２株杂交瘤细胞２Ａ６和２Ｃ２分泌ＭｃＡｂ的研究表明，它们能够特异性地和ｒｈＧ－ＣＳＦ结合，而与重组的人ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－２α和ＴＮＦ细胞因子无交叉反应，为抗Ｇ－ＣＳＦ特异性ＭｃＡｂ。这些杂交瘤细胞经反复冻存和复苏后，仍能稳定地分泌ＭｃＡｂ。     

抗沙眼衣原体主要外膜蛋白种特异性单克隆抗体

用人工合成沙眼衣原体主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）氨基端１／４肽链免疫８周龄雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠３只，第１４天用Ｌ１／４４０／Ｂｕ原体加强免疫，第２４天将免疫反应良好的１只小鼠脾细胞与ＮＳ－１瘤细胞融合。用１／４ＭＯＭＰ和Ｌ１原体抗原包被的聚丙乙烯板检测上清中抗体，淘汰与鹦鹉热衣原体种（ＥＡＥ株）、肺炎衣原体种（ＡＴＣＣＶＲ１３１０株）以及正常组织培养细胞（ＢＧＭＫ）有交叉反应的克隆，最后得到４株抗沙眼衣原体特异性单克隆抗体（ＭＡｂｓ），其抗体属ＩｓＧ１和ＩｇＧ２ａ亚类。微量免疫荧光试验（ｍｉｃｒｏ－ＩＦ）发现４株ＭＡｂｓ均与本实验室制备的沙眼衣原体Ｌ１、Ｌ２、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ原体及Ｌ２包涵体抗原发生反应，并与沙眼衣原体所有１５个标准血清型结合，其腹水ＭＡｂｓ滴度≥１：１２８００。免疫印迹试验显示４株ＭＡｂｓ均与沙眼衣原体分子量为４００００的ＭＯＭＰ反应。     

抗脆弱类杆菌单克隆抗体的研制及其初步应用

用脆弱类杆菌ＡＴＣＣ２５２８５免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合。得到一株能稳定分泌高效价特异性抗体的杂交瘤细胞株（２Ｃ）。经鉴定该单抗主要与脆弱类杆菌的菌体抗原ＬＰＳ发生反应。玻片凝集试验和ＥＬＩＳＡ检测，该单抗只与脆弱类杆菌呈现阳性反应，而与其它厌氧菌和需氧菌均呈阴性反应。应用该单抗建立的ＥＬＩＳＡ夹心法快速检测脆弱类杆菌，具有特异性和敏感性高。方法简便、快速的优点。     

重组人白介素2卡介苗的构建及表达

采用聚合酶链反应及基因工程技术,克隆卡介苗（ＢＣＧ）的主要分泌抗原Ａｇ８５Ｂ基因的５’端第９４～２１１的核苷酸的信号肽序列和构建重组人ＩＬ－２穿梭表达质粒,并用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）鉴定外源基因在ＢＣＧ中的表达。结果表明,构建的ＢＣＧ重组体能表达和分泌人ＩＬ－２。此将试用于临床治疗膀胱癌病人。     

质粒单独转染与共转染哺乳动物培养细胞的对比研究

我们对ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株Ｐ８１５细胞通过鳞酸钙围染技术，用含ＨＢＶＳ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＭＶＳ与含筛选标记基因ｎｅｏ’基因的质粒ｐＳＶ２－ｎｅｏ进行了共转染，用含ＨＣＶＣ，Ｅ１，Ｅ２以及ｎｅｏ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＥ２进行了单独转染，经Ｇ４１８筛选，分别获得了Ｇ４１８抗性细胞；Ｐ８１５－Ｓ和Ｐ８１５－ＣＥ２细胞，提示单独转染与共转染的获成功，进一步证实的质粒单独转染与共转染哺乳支     

分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用人ＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾脏与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞在ＰＥＧ作用下融合，经３次克隆化后获得五株抗人ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞，用被动血凝法和ＥＬＩＳＡ检测培养上清滴度为２￣４，用琼脂双扩散法证明此单克隆抗体只与人ＩｇＧ发生反应，产生透明沉淀线。经ＩｇＧ亚类血清鉴定，其单克隆抗体均属ＩｇＧ－Ｇ１亚类抗体。五株杂交瘤细胞在液氮保存数月，经反复复苏培养，不改变其分泌抗体的性能。     

以包涵体形式表达的6B11卵巢癌抗独特型单链抗体的复性、纯化和活性研究

目的：探讨以细菌胞浆内包涵体形式表达的６Ｂ１１卵巢癌抗独特型单链抗体（６Ｂ１１ｓｃＦｖ）的复性、纯化及其活性。方法：重组质粒ｐＬ６Ｂ１１ｓｃＦｖ转化大肠杆菌ｐｏｐ２１３６，温度诱导，以包涵体形式获高效表达。超声破碎细菌细胞得包涵体，用８ｍｏｌ·Ｌ－１尿素溶解包涵体后直接稀释复性，探讨复性条件并采用ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化复性蛋白，ＳＤＳＰＡＧＥ分析蛋白纯度，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ及竞争抑制ＥＬＩＳＡ测活性。结果：复性蛋白质经纯化，纯度达９５％以上。当氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ）浓度为５ｍｍｏｌ·Ｌ－１，还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）浓度为０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１，１０℃复性４８ｈ以上时，复性率较高。纯化后的表达蛋白６Ｂ１１ｓｃＦｖ能与ＨＲＰＣＯＣ１６６９卵巢癌单抗反应并与卵巢癌抗原共同竞争结合卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６９，抑制率达６７％，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示其相对分子质量为２８×１０４，证明纯化后的表达蛋白质，能模拟卵巢癌抗原与卵巢癌单抗特异结合。结论：以包涵体表达的６Ｂ１１ｓｃＦｖ，经溶解复性纯化后，纯度高，活性好。     

抗HSV－1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究

以ＨＳＶ－１为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，取其脾细胞在ＰＧＥ介导下与ＳＰ２／０细胞常规融合，ＩＦＡ法筛选鉴定，反复克隆，共获得７株能稳定、持续分泌抗ＨＳＶ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为８７～１０３条之间，Ｉｇ类型分别为ＬｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ｇ）、ＩｇＧ＿３，腹水抗体效价在１０￣（－５）～１０￣（－７）之间免疫沉淀。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析，２株与１３２Ｋ多肽发生特异性反应，只具有ＨＳＶ－１型特异性，其余３株与１２０～１２８Ｋ多肽，２株与６０Ｋ多肽发生特异性反应，具有ＨＳＶ型共同抗原特异性。７株ＭｃＡｂ与ＣＭＶ均不发生特异反应。这些杂交瘤细胞系的建立对于ＨＳＶ的临床早期、快速诊断有重要的应用价值。