用原位杂交法研究大鼠脑损伤后胆囊收缩素和脑啡肽mRNA量…

应用原位杂交技术，研究大鼠脑损后前胆囊收缩素（ＰＣＣＫ）和前脑啡肽原ＰＰＥ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明，在大鼠脑损伤２４ｈ后同侧脑内ＰＣＣＫ和ＰＰＥｍＲＮＡ量增加，尤其以新皮质和海马显著。阳ＮＭＤＡ受体非竞争性拮抗剂ｋｅｔａｍｉｎｅ可以抑制增加。因此，作者认为在脑损伤后可诱发胆囊收缩素（ＣＣＫ）和脑啡肽（ＥＮＫ）合成增加，并参与脑损病理改变，另外这种合成增加可能由ＮＭＤＡ受体介导。     

CCK—A及CCK—B受体mRNA在SD大鼠肺组织中的表达

ＣＣＫＡ及ＣＣＫＢ受体ｍＲＮＡ在ＳＤ大鼠肺组织中的表达丛斌凌亦凌谷振勇黄善生左敏基础医学院病理生理学教研室（０５００１７）王俊霞姚玉霞彭郁葱分子生物学研究室关键词受体，免疫；核糖核苷类／代谢；肺／代谢中图号Ｒ３２２．３５胆囊收缩素（Ｃｈｏｌｅｃ...     

八肽胆囊收缩素对谷氨酸诱导神经元死亡的拮抗作用及机制研究

以谷氨酸、ＮＭＤＡ作用原代培养的大鼠大脑皮层神经元，随药物浓度递增，作用时间延长，细胞存活率逐渐下降。八肽胆囊收缩素对谷氨酸、ＮＭＤＡ诱导的神经元死亡具有明显的拮抗作用，在其浓度为１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ时其拮抗率为７７８±４４％和７５４±６７％。ＣＣＫＢ受体拮抗剂Ｌ－３６５２６０可完全阻断八肽胆囊收缩素的保护作用，而ＣＣＫＡ受体拮抗剂Ｌ－３６４７１８无此作用。应用Ｆｕｒａ－２荧光技术测定新生大鼠大脑皮层神经元细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ），八肽胆囊收缩素可明显抑制ＮＭＤＡ诱导的神经元［Ｃａ２＋］ｉ升高，在浓度为１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ时其抑制率为９５７％。结果显示：八肽胆囊收缩素可能通过其Ｂ受体产生拮抗谷氨酸神经兴奋毒性作用，抑制Ｃａ２＋内流是其产生拮抗作用的机制之一。     

NMDAR1基因表达及其受体活性在大鼠感染性脑损伤时的变化

用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和放射性配基结合法，检测了百日咳杆菌脑损伤时大鼠大脑皮质ＮＭ－ＤＡ受体的变化。结果显示：注菌组Ｋｄ值较对照组小（Ｐ＜０．０５），ＮＭＤＡＲ１ｍＲＮＡ表达及Ｂｍａｘ值较对照组差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。提示ＮＭＤＡ受体主要表现为受体功能的激活，亲和力增加，并非基因表达的改变而使受体的数量变化。     

肺组织中胆囊收缩素mRNA的RT-PCR方法检测

肺组织中胆囊收缩素ｍＲＮＡ的ＲＴＰＣＲ方法检测丛斌凌亦凌左敏基础医学院病理生理学教研室（０５００１７）姚玉霞王俊霞郭晓青分子生物学研究室关键词收缩蛋白类／分离和提纯；核糖核酸，信使／分析；肺；大鼠中图号Ｒ３３２．３为探讨胆囊收缩素（ＣＣＫ）的肺保...     

鼻咽癌细胞中MDM2基因扩增与表达的研究

应用斑点杂交和半定量逆转录－多聚酶链反应技术对３２例鼻咽癌（ＮＰＣ）标本,１０例慢性鼻咽炎症粘膜（ＣＩＮＥ）标本,ＮＰＣ细胞株进行ＭＤＭ２基因扩增与表达的检测。结果显示;１例ＮＰＣ有ＭＤＭ２基因的扩增,ＮＰＣ细胞株ＨＯＮＥ１和１０例ＮＰＣ有ＭＤＭ２ ｍＲＮＡ高表达,ＣＩＮＥ无ＭＤＭ２基因的扩增及ｍＲＮＡ的高表达。     

大鼠伏核中胆囊收缩素对学习记忆的影响机制

目的研究大鼠伏核中胆囊收缩素（ＣＣＫ）调节学习记忆的受体机制。②方法采用行为和脑核团内微量注射相结合的方法，利用三等分辐射式迷宫模型观察大鼠伏核中胆囊收缩素对分辨学习（ＤＬ）和条件性回避反应（ＣＡＲ）的影响。③结果双侧伏核中后区注射ＣＣＫ－Ａ受体阻断剂Ｌ－３６４，７１８对ＤＬ和ＣＡＲ有明显的抑制效应（ｔ＝６．５０，８．５５，Ｐ＜０．０１），而ＣＣＫ－Ｂ受体阻断剂Ｌ－３６５，２６０对ＤＬ和ＣＡＲ无影响（ｔ＝２．１４，２．１４，Ｐ＞０．０５）。④结论伏核中后区内ＣＣＫ－Ａ受体参与对ＤＬ和ＣＡＲ的调节，提示伏核中后区内源性ＣＣＫ对学习记忆过程具有促进作用，并且是通过ＣＣＫ－Ａ受体实现的，而ＣＣＫ－Ｂ受体不起作用     

八肽胆囊收缩素对谷氨酸诱导神经元死亡的损坏抗作用及机制研究

以谷氨酸、ＮＭＤＡ作用原代培养的大鼠大脑皮层神经元，随药物浓度递增，作用时间延长，细胞存活率逐渐下降。八肽胆囊收缩素对谷氨酸、ＮＭＤＡ诱导的神经元死亡具有明显的拮抗作用，在其浓度为１×１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ时其拮抗率为７７．８±４．４％和７５．４±６．７％，ＣＣＫＢ受体拮抗剂Ｌ－３６５２６０可完全阻断八肽胆囊收缩素的保护作用，而ＣＣＫＡ受体拮抗剂Ｌ－３６４７１８无此作用。应用Ｆｕｒａ－２荧光技术测定     

胆囊收缩素cDNA探针制备及其在癫痫发病机制研究中的应用

目的 制备胆囊收缩素（ＣＣＫ）ｃＤＮＡ探针,并以此探针检测遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内ＣＣＫ－ｍＲＮＡ表达。方法 将含０．５ｋｂｐ Ｒａｔ ＣＣＫ－ｍＲＮＡ的质粒ＰＵＣ１３扩增、回收和纯化,用随机引物标记法,得到地高辛精（Ｄｉｇ）标记ＣＣＫ－ｃＤＮＡ探针。用原位杂交技术,原癫痫发作后大鼠海马和大脑皮层ＣＣＫ－ｍＲＮＡ表达进行研究。③结果 ＣＣＫ－ｃＤＮＡ探针标记效率为５０ｍｇ／Ｌ;遗传性     

非胰岛素依赖型糖尿病患者胆囊结石的发生与脂质代谢和胃肠激素的关系

检测并比较了非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）合并胆石症一未合并胆石症患者各１５例的血糖、血脂、载脂蛋白Ａ１和Ｂ、胆囊收缩素（ＣＣＫ）、胰多肽（ＰＰ）以及胰岛素水平。ＮＩＤＤＭ俣并胆石症者脱往高峰体重指数、血清胆固醇、胰岛素（空腹和餐后２ｈ）明显高于无胆石症者、差异显著（分别为Ｐ〈０．０１，〈０．０５、〈０．０５、〈０．０５），而ＣＣＫ明显低于无胆石症组（Ｐ〈０．０５）。两组性别、年龄、病程、血糖     

马桑内酯癫痫大鼠脑内ETmRNA表达的改变

目的：本文从分子水平观察马桑内酯所致的癫痫大鼠脑内ETmRNA表达以及硝苯吡啶对其表达的影响,进而分析ET在马桑内酯癫痫中的可能作用。方法：将24只SD大鼠分三组（生理盐水对照组、癫痫组和抗痫组）,采用自行标记的地高辛－ET RNA探针作大鼠脑片原位杂交。结果：在癫痫大鼠脑切片的广泛区域可见阳性杂交信号,尤以下丘脑和海马为明显;抗痫组（硝苯吡啶＋马桑内酯）大鼠脑内均未见到明显的杂交信号,与生理盐水对照组相似。表明马桑内酯致痫时,大鼠脑内ETmRNA表达增强,该作用可被L－型Ca^2 通道阻断剂硝苯吡啶阻断。结论：ET在马桑内酯致痫时,可能作为一种神经肽,通过激活L－型Ca^2 通道使细胞内Ca^2 浓度增加而产生致痫作用。     

地塞米松对内毒素休克新生大鼠脑一氧化氮合成酶基因表达的调节

目的：探讨新生大鼠内毒素休克脑损伤时脑一氧化氮合成酶(NO6)三种亚型基因表达的变化及地塞米松(DEX)对其的调控作用。方法：在新生大鼠内毒素休克动物模型基础上，采用逆转录PCR及PCR技术，对脑组织中三型NOS mRNA及caspase—3 mRNA的表达进行半定量分析。结果：正常新生大鼠脑iNOS及eNOS mRNA无明显表达，nNOS mRNA、caspase—3 mRNA有一定程度表达。内毒素脂多糖(LPS)腹腔注射后2h，三种亚型NOS mRNA开始表达，于LPS6h达高峰，并持续至24h。caspase—3 mRNA于LPS腹腔注射后2h后表达逐渐增加，24h达高峰。DEX可抑制nNOS、iNOS及caspase—3 mRNA的表达，且以用药后2h最为明显，并持续至用药后24h。结论：内毒素休克脑损伤时，各型NOS均有表达，NO的产生是内毒素休克脑损伤时重要的病理生理机制之一。DEX通过抑制NOS、caspase—3 mRNA的表达部分实现其神经保护作用．     

纹状体区神经肽表达的改变与左旋多巴诱发异动症的关系

目的 研究左旋多巴诱发异动症(LID)模型大鼠纹状体区特异性神经肽基因表达的变化,探讨LID时纹状体神经元的可塑性变化.方法 分别以SCH23390(D1受体拮抗剂)和氟哌啶醇(D2受体拮抗剂)治疗LID大鼠,观察LID大鼠的行为学改变,并用逆转录聚合酶链反应技术检测其纹状体区前脑啡肽原(PPE)及前强啡肽原(Pdyn)基因的表达情况.结果 LID大鼠经SCH23390治疗后,异常不自主运动(AIM)明显减少,其纹状体区Pdyn mRNA表达量较LID组显著减少,PPE mRNA表达量无明显变化.经氟哌啶醇治疗后LID大鼠AIM无明显改变,其纹状体区PDynmRNA和PPE mRNA表达量与LID组相比较均无明显变化.结论 大鼠纹状体黑质神经元下游靶基因Pdyn的表达异常与LID的形成有关,直接通路活动的异常增高和基底节环路功能异常参与了大鼠LID的形成.     

葛根素对大鼠急性脑缺血及缺血再灌注损伤后HSP70蛋白表达的影响

目的：探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤及缺血再灌注损伤后HSP70表达的影响.方法：采用夹闭大脑中动脉造成局部脑缺血模型,夹闭大脑中动脉后再通造成局部脑缺血再灌注模型,对脑组织用免疫组化SP法作HSP70染色,观察其HSP70表达情况.结果：大鼠急性脑缺血损伤后葛根素干预实验组的HSP70表达强度明显强于单纯缺血实验组（P〈0.01）;大鼠脑缺血再灌注损伤后葛根素保护组实验侧HSP70表达强度明显强于非保护组实验侧（P〈0.01）.结论：葛根素有上调大鼠急性脑缺血及缺血再灌注损伤后HSP70表达的作用.     

胡黄连对缺血再灌注大鼠脑内NMDAR1 mRNA表达的影响

目的 观察缺血再灌注模型大鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1（NMDAR1）mRNA的变化，探讨胡黄连对神经元的保护作用。方法 参照线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，胡黄连干预，原位杂交方法观察皮质、纹状体NMDAR1 mRNA表达。结果 对照组缺血侧皮质区、纹状体区于缺血再灌注1d时NMDAR1 mRNA表达达高峰，7d后逐渐下降，但各时间点与假手术组比较，均有显著性差异（F=3．6、7．2，q=11．4～16．7，P〈0．01）；胡黄连治疗组大鼠脑皮质与纹状体NMDAR1 mRNA基本接近假手术组，明显低于对照组（t=9．43～10．55，P〈0．01）。结论 胡黄连对脑缺血再灌注损伤神经元有一定保护作用，其机制可能与下调脑内NMDAR1 mRNA表达有关。     

脑缺血再灌注损伤后神经细胞增殖相关因子基因的表达

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞巢蛋白（Nestin）、干细胞因子（SCF）和神经细胞黏附分子（NcAM）基因的表达。方法 成年健康雌性SD大鼠36只，以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型，随机分为缺血1．5h再灌注2h、6h、12h、24h、2d、3d、7d、14d组和假手术组，每组4只。应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后脑组织Nestin、SCF和NCAM mRNA的表达。结果 假手术组皮质和纹状体区Nestin、SCF和NCAM mRNA均有微弱表达。脑缺血再灌注后Nestin mRNA表达增高，皮质除再灌注2h以外、纹状体除再灌注2、6h以外，其余各时间点均明显高于假手术组。SCFmRNA表达，皮质除再灌注2、6、12h以外，纹状体除再灌注2、6h以外，其余各时间点均明显高于假手术组。NCAM mRNA于再灌注2h后在皮质和纹状体区开始表达，分别于再灌注12h和1d达高峰，7d后逐渐减少，14d降至假手术组水平。结论 脑缺血再灌注后SCF mRNA表达可能具有促进神经千细胞增殖作用，NCAM表达可能参与了损伤后脑组织的修复过程。     

惊厥易感大鼠生后发育过程与惊厥后脑内c－fos基因表达的初步研究

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术发现遗传听源惊厥易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ在出生１４天后脑内ｃ－ｆｏｓｍＲ－ＮＡ水平迅速增高，２１天达到最高水平，而后逐渐下降，此与大鼠惊厥易感性形成规律相类似；惊厥后脑内ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ具有快速、大量及一过性表达特点；惊厥前后１５分钟内给予安定（１０ｍｇ／ｋｇ）能有效阻断ｃ－ｆｏｓ基因表达。推测ｃ－ｆｏｓ基因间接地参与了Ｐ７７ＰＭＣ大鼠惊厥易感性的形成。     

脾虚模型脑内神经肽Y水平和基因表达变化及归脾汤的影响

目的研究脾虚模型脑内神经肽Y基因表达变化及归脾汤的影响作用。方法采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法建立脾虚大鼠模型,检测下丘脑腹侧核、海马CA1区、前额叶皮层神经肽Y水平和基因表达变化。结果模型组NPY免疫阳性反应物在下丘脑腹侧核、海马CA1区、前额叶皮层明显降低;给予归脾汤的治疗组上述脑区的NPY免疫阳性反应物明显增加。模型组NPYmRNA表达在下丘脑腹侧核、前额叶皮层明显降低;治疗组上述脑区的NPY mRNA表达明显增加。结论脾虚模型学习记忆下降与脑内学习记忆有促进影响作用的神经肽Y水平和基因表达有变化,归脾汤对其有调节作用。     

缺血性脑损伤大鼠下丘脑c—fos基因表达及药物调控

目的：从分子水平探讨缺血性脑损伤的病理生理改变和渗麦注射液的保护作用,方法：将15只雄性wistar大鼠随机分为对照组,缺血组和治疗组,采用免疫组织化学方法观察了缺血性脑损伤时大鼠下丘脑视上核和室旁核内神经元c-fos基因的表达及参麦注射液的保护作用。结果：缺血性脑损伤时大鼠视上核和室旁核内神经元 - 基因的表达明显明显增多（P＜0．05）,而用参麦注射液后明显减少,但未减少至正常水平（P＜05）,结论：缺血性脑损伤时下丘脑中c-fos基因表达增多,而参麦注射液对缺血性脑损伤可能有一定治疗作用。     

自发性高血压大鼠血管紧张素Ⅱ－1型受体基因的表达

应用反转录一聚合酶链式反应（ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，亚克隆出大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ－１型受体（ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡＴｙｐｅ－１Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＴＲ１）ｃＤＮＡ，并以此为探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析和定量ＰＣＲ方法，测定大鼠不同组织中ＡＴＲ１ｍＲＮＡ的分布，证明ＡＴＲ１ｍＲＮＡ广泛存在于不同组织中，其中以肾脏含量为最高，其次为心脏和小脑；自发性高血压大鼠（ＳｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙＨｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＲａｔ，ＳＨＲ）肾、心组织中ＡＴＲ１ｍＲＮＡ较正常对照大鼠（Ｗｉｓｔａｒ－ＫｙｏｔｏＲａｔ，ＷＫＹ）明显下隆。