Molecular cloning and characterization of NAG-7: a novel gene downregulated i n human nasopharyngeal carcinoma

目的　分离位于染色体 3p2 4 2 6区域中鼻咽癌新的抑瘤基因。方法　在染色体 3p2 4 2 6鼻咽癌杂合性丢失 (lossofheterogosity ,LOH)高频区 ,用RT PCR及Northern杂交检测了2 0个表达序列标记 (expressedsequencetag ,EST)在鼻咽癌细胞株HNE 1和原代培养的正常鼻咽上皮细胞中的表达水平 ,并对其中一个在鼻咽癌细胞株HNE 1中表达下调的EST在 19例鼻咽癌活检组织中的表达进行了检测。用cDNA文库筛选方法获得其全长cDNA序列 ,对该序列进行了初步分析。结果　获得一个位于染色体 3p2 5 3的新基因 ,命名为NAG 7基因。该基因在 2 6 3% (5 19)的鼻咽癌活检组织中表达下调。它全长 16 6 7bp ,其开放阅读框 (openreadingframe ,ORF)编码一个含 94个氨基酸的碱性蛋白质 ,分子量为 110 2 3 87道尔顿 ,预测为一跨膜蛋白质。它含有一蛋白激酶C磷酸化位点和肉豆蔻基位点。迄今为止 ,NAG 7基因序列在基因库中未见任何同源性基因。结论　NAG 7基因是一个在鼻咽癌中表达下调的新基因 ,它的改变可能参与了鼻咽癌的发生发展     

人鼻咽癌细胞系中基质金属蛋白酶9的表达及意义

目的 检测MMP9在鼻咽癌细胞株及细胞株裸鼠成瘤瘤块组织中的表达,探讨MMP9的表达与鼻咽癌发生、发展的关系.方法 采用细胞免疫组织化学技术、RT-PCR、Western blot检测鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HNE1、HNE2和SUNE15株细胞株中MMP9表达;免疫组织化学(SABC 法)检测HNE1和CNE2细胞裸鼠成瘤后瘤块MMP9的表达.结果 5株鼻咽癌细胞株中,免疫组化显示HNE1和SUNE1细胞中MMP9蛋白表达阳性.RT-PCR及Western Blot检测结果显示.HNE1和SUNE1细胞中MMP9 mKNA及蛋白高表达.HNE1和CNE2细胞裸鼠种植成瘤后,5例瘤块中MMP9蛋白均强阳性表达.结论 MMP9在鼻咽癌细胞系中表达阳性,成瘤后表达增强,提示MMP9的表达可能与鼻咽癌侵袭转移有关.     

复方黄连对NF-κB活化相关基因在鼻咽癌移植瘤组织表达活性的影响

目的 探讨复方黄连抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤生长的分子机制。方法 应用高通量互补DNA(cDNA)表达芯片杂交以及逆转录-聚合酶链式反应技术，分析复方黄连处理后CNE1和HNE1鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤组织NF-κB活化相关基因信使RNA(mRNA)的表达。结果 复方黄连在抑制移植瘤生长的同时，尚可改变包括TRAF5、TRAF6、TRAP2、p67、p68激酶、IxBα以及LAP-1在内的一些NF-κB活化相关基因在鼻咽癌移植瘤组织的表达。其中，IκBα和TRAF6基因的表达为上调，其余基因的表达均为下调。结论 复方黄连对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用，可能与其调节移植瘤组织NF-κB的表达活性有关。     

益气解毒颗粒对HNE3细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用

目的观察益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞HNE3及其裸鼠移植瘤的抑制作用。方法益气解毒颗粒作用于HNE3细胞、宫颈癌细胞及其裸鼠移植瘤，分别进行体外抑瘤试验(包括IC50测定)和体内抑瘤试验。先行体外实验测定益气解毒颗粒对癌细胞半抑制浓度及其杀伤效力，再行体内实验，观察益气解毒颗粒对荷瘤裸鼠HNE3移植瘤的抑瘤效应，并以人宫颈癌细胞Heka移植瘤和荷瘤模型动物作对照。结果益气解毒颗粒对HNE3细胞的半抑制浓度为0．037mg／mL，并显示了明显的体外杀伤效应和细胞凋亡诱导效应。在体内抑瘤实验中，益气解毒颗粒对HNE3移植瘤的抑瘤率为74．7％，伴有细胞增殖速度、成瘤能力的明显抑制，同时提高细胞分化能力，降低肿瘤的侵袭力。结论益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞HNE3具有明显抑制作用。     

p53与鼻咽癌关系的研究进展

p53基因是重要的抑瘤基因, 是细胞增牛的主要负调控子,它通过调控细胞周期和启动细胞凋亡维持细胞的正常功能。虽然p53基因突变在鼻咽癌叶中属于少发事件,但大部分鼻咽癌中都可检测到P53蛋白过表达且功能失活,EB病毒编码蛋白BZLFl, delta N-p63 可能与P53蛋白聚集失活有关。     

TRIM59靶向调控PPM1B对鼻咽癌侵袭和迁移的作用

目的 探讨TRIM59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法 TCGA数据库分析TRIM59在鼻咽癌中的表达;Western blot实验检测TRIM59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况;RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中TRIM59和PPM1B mRNA和蛋白的相对表达量;建立HNE1细胞TRIM59过表达及抑制表达的稳定细胞系,实验设未转染组（Control）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、TRIM59 模拟物组（mimic-TRIM59）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及TRIM59抑制剂组（si-TRIM59）。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测TRIM59和PPM1B靶向关系;Transwell小室检测HNE1细胞侵袭和迁移能力的变化。结果 TCGA数据库结果表明,TRIM59在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P= 0.006）;TRIM59在鼻咽癌组织中表达增加（P=0.01）且PPM1B 表达下降（P=0.03）;与HNEpC细胞相比,TRIM59在HNE1细胞中相对表达量显著增加（P=0.04）,PPM1B在HNE1细胞中相对表达量显著下降（P=0.02）;PPM1B为TRIM59下游靶基因且与TRIM59表达呈负相关（P=0.01）;Transwell结果显示,上调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力增强（P=0.01,P=0.02）,下调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制（P=0.01）;同时下调TRIM59且上调PPM1B表达后,HNE1细胞侵袭和迁移能力均较单独下调TRIM59表达显著被抑制（P=0.02,P=0.01）。结论 TRIM59通过靶向调控PPM1B影响鼻咽癌细胞侵袭和转移。     

氯喹通过上调miR129增强顺铂抗鼻咽癌作用

目的 探究miR129在氯喹增强顺铂促鼻咽癌细胞HNE1凋亡的作用及机制。方法 实验分为空白对照组、氯喹组、顺铂组、氯喹+顺铂组。MTT法观察HNE1细胞存活率;结晶紫染色法观察HNE1细胞集落克隆形成;采用HNE1细胞接种BALB/C 裸鼠建立移植瘤模型,随机分为4组,6只/组,3 d给药1次,连续用药4周,观察各组肿瘤生长情况;q-PCR检测HNE1细胞中miR129表达;质粒转染下调HNE1细胞miR129的表达;Western blot 法检测自噬相关蛋白p62、LC3B、Beclin1和耐药蛋白P-gp的表达;Annexin V/PI双染法,检测细胞凋亡率。结果 体内外实验结果均显示氯喹+顺铂较顺铂单用能显著抑制肿瘤的生长（P<0.01）。体外实验表明,下调抑癌基因miR129能显著促进HNE1细胞自噬、上调P-gp的表达（P<0.01）;氯喹显著抑制顺铂诱导的HNE1细胞自噬,上调HNE1细胞中miR129的表达（P<0.01）;转染抑制miR129后,氯喹抑制顺铂诱导HNE1细胞自噬的作 用被取消、氯喹和顺铂联合作用后HNE1细胞存活率显著增加（P<0.05）,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论 氯喹通过上调miR129抑制HNE1细胞自噬和耐药,增强顺铂的促凋亡作用。     

鼻咽癌基因研究进展

肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病，对于肿瘤癌基因和抑癌基因的研究具有重大意义，其中与鼻咽癌相关的癌基因以及候选瘤基因有LMP1基因、bcl—2基因、ras基因、c—erbB—基因、Tx基因、NAG23／FBXO30基因等，抑癌基因及候选抑瘤基因有p53、p16基因、p130／Rb2基因、nm23基因、NAG7基因、NAG11基因、NAG12基因、UBAP1基因、YH1基因、NGX6基因等，这些基因在鼻咽癌发生、发展过程中有着重要作用。     

新疆维吾尔、汉族鼻咽癌组织p16抑癌基因表达比较

目的:探讨抑癌基因p16在维吾尔、汉族鼻咽癌组织中的阳性表达及其意义。方法:应用免疫组织化学LSAB法对新疆鼻咽癌60例(维吾尔、汉族各30例)、非瘤鼻咽组织37例(维吾尔族17例,汉族20例)分别进行抑癌基因p16蛋白阳性检测。结果:鼻咽癌p16蛋白检出率分别为35.0%(21/60),明显低于非瘤鼻咽组织的83.8%(31/37)(P<0.05);维吾尔族鼻咽癌p16蛋白阳性检出率43.3%(13/30),明显低于非瘤鼻咽组织76.5%(13/17)(P<0.05);汉族鼻咽癌p16蛋白阳性检出率为26.7%(8/30),明显低于非瘤鼻咽组织90%(18/20)(P<0.05);维吾尔族与汉族鼻咽癌阳性检出率差异无有统计学意义(P>0.05)。两民族鼻咽癌p16蛋白阳性表达与临床分期、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05)。结论:(1)p16抑癌基因失活在新疆维吾尔、汉族鼻咽癌的发病过程均具有普遍而重要的作用。(2)两族鼻咽癌p16基因阳性表达与淋巴结转移、临床分期无相关性,可能说明p16蛋白失活是鼻咽癌发生的早期事件。     

A cDNA located on chromosome 7q32 shows loss of expression in epithelial cell line of nasopharyngeal carcinoma

ｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｍａｒｋｅｒｓｏｎ 7ｑ32ｉｎＤＮＡｆｒｏｍ 2 4ｂｉｏｐｓｉｅｓｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｍａｔｃｈｅｄｎｏｒｍａｌｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆ 2 0ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ (ＥＳＴｓ)ｏｎ 7ｑ32ｂｅｔｗｅｅｎｈｕｍａｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ 1(ＨＮＥ1)ａｎ…     

P16蛋白在鼻咽癌中的表达及意义

目的通过测定鼻咽癌组织中P16蛋白的表达情况,探讨P16抑癌基因异常或失活与鼻咽癌发生的关系。方法 应用S-P免疫组化技术,检测90例鼻咽癌组织中P16蛋白的表达情况,以慢性鼻咽粘膜炎症标本80份作为对照分析。结果 90例鼻咽癌组织中P16蛋白表达阴性68例,阴性率为75.56％(68/90);对照组80鼻咽炎症组织的P16蛋白表达阴性13例,阴性率为16.25％(13/80),两组比较差异有高度显著性(x2=59.717,P<0.01)。结论 抑癌基因P16失活或P16蛋白低表达与鼻咽癌的发生、发展有关系。     

p16基因与鼻咽癌生物学行为的相关性研究

目的通过测定鼻咽癌组织中p16蛋白的表达情况,探讨p16基因与鼻咽癌临床生物学行为的关系。方法应用S-P免疫组化技术,检测90例鼻咽癌组织中p16蛋白的表达情况,以慢性鼻咽粘膜炎症标本80份作为对照,检测结果进行统计学检验分析。结果①鼻咽癌p16蛋白表达阴性率为75.56%,鼻咽炎症为16.25%,两者差异有高度显著性(P<0.01)。②高分化鳞癌的P16蛋白阴性表达率为34.78%,低分化鳞癌为88.68%,未分化癌为92.86%,提示p16基因的缺失可能与鼻咽癌的分化程度有关(χ2=20.88,P<0.01)。③颈淋巴结转移阳性(N+)者p16蛋白阴性表达率为92.06%,颈淋巴结转移阴性(N0)者为37.03%,p16蛋白表达与颈淋巴结转移情况呈负相关(r=-0.59,P<0.01)。结论抑癌基因p16失活或p16蛋白低表达可能与鼻咽癌的发生、癌细胞的分化程度及颈淋巴结转移有关,而与鼻咽癌原发灶大小无关。     

KISS1基因激活ERK1/2磷酸化通路抑制鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的研究

目的:探讨KISS1及其受体基因KISS1-R在ERK1/2磷酸化通路中调节鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR以及蛋白免疫印迹技术,检测KISS1、KISS1-R基因、黏着斑激酶（FAK）的表达;验证ERK1/2信号通路的磷酸化激活,EZR蛋白的表达与鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的关系。构建过表达KISS1及KISS1-R基因载体,通过划痕实验及Transwell实验分析过表达KISS1（SUNE-KISS1）及KISS1-R（SUNE-1R）基因对SUNE-1-5-8F鼻咽癌细胞系的迁移能力的影响。通过蛋白免疫印迹技术,检测在过表达KISS1及KISS1-R基因后,磷酸化FAK（p-FAK）和磷酸化ERK（p-ERK）以及EZR蛋白的表达水平。通过阻断ERK1/2通路的磷酸化激活,验证KISS1及KISS1-R基因对鼻咽癌细胞迁移能力的影响,以及对细胞转移相关蛋白p-FAK、EZR表达量的影响。最后,通过siRNA抑制KISS1基因表达,进一步验证KISS1基因对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的调控作用。结果:实时荧光定量PCR实验发现,KISS1基因在SUNE-1-6-10B细胞中表达量相对于SUNE-1-5-8F细胞中较高。蛋白免疫印迹分析发现,KISS1及KISS1-R的蛋白表达量,以及p-FAK的表达量与鼻咽癌细胞转移能力呈负相关;EZR与鼻咽癌细胞转移能力呈正相关关系。划痕及Transwell实验分析发现,过表达KISS1及KISS1-R基因均能够有效抑制SUNE-1-5-8F细胞的迁移和侵袭能力。蛋白免疫印迹分析发现,过表达KISS1及KISS1-R基因能增加p-FAK及p-ERK1/2的蛋白表达量,抑制EZR蛋白的表达。加入ERK1/2通路特异性的阻断剂PD98059后,由过表达KISS1及KISS1-R基因引起的细胞迁移和侵袭的抑制状态被阻断。同时,由过表达KISS1及KISS1-R引起的p-FAK与p-ERK1/2的上调,EZR的下调均被恢复。通过siRNA的干扰,抑制了KISS1基因表达,从而引起SUNE-1-5-8F细胞的迁移和侵袭能力的增加。结论:过表达KISS1基因可以显著抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力;同时,通过siRNA干扰KISS1基因的表达,能够增加鼻咽癌细胞的迁移能力。KISS1及KISS1-R基因通过磷酸化激活ERK1/2通路,进一步激活p-FAK并抑制EZR表达,从而抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力。     

蛋白质组学筛选抑癌基因CCDC19在鼻咽癌中的调控蛋白

目的本研究利用蛋白质组学筛选抑癌候选基因CCDC19在鼻咽癌中可能调控蛋白。方法提取CCDC19稳定高表达的鼻咽癌3D8和对照鼻咽癌C6细胞蛋白,并采用双向凝胶电泳(2D-PAGE)技术进行有效分离,图像扫描后获得高分辨率的2D-PAGE图谱。选用差异蛋白质组学技术筛选差异蛋白位点,然后用肽质量指纹谱(peptide mass fingerprinting,PMF)和数据库检索技术给予鉴定。荧光定量PCR和Western blot验证差异基因表达水平。结果质谱分析显示,FASN、CTSD和PGK1在CCDC19过表达的3D8细胞中表达下调,分别为-3.28、-1.64和-6.97倍。荧光定量PCR在mRNA水平验证了FASN、CTSD和PGK1以及Western blot在蛋白水平验证CTSD蛋白在3D8细胞中表达下调。结论 FASN、CTSD和PGK1可能是CCDC19在鼻咽癌中调控的靶基因。     

鼻咽癌组织RASSFIA基因的表达

目的 探讨RASSFIA基因在鼻咽癌发病过程中的作用。方法 采用逆转录—聚合酶链技术在4种鼻咽癌细胞株、32例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽部组织中检测RASSFIA基因的表达。并分析鼻咽癌组织在3p21.3D3S4604徽卫星多态性位点的等位基因杂合性丢失状况。结果 RASSFIA基因在4种鼻咽癌细胞株中低表达，32例鼻咽癌组织的RASSFIA基因表达显著低于16例正常鼻咽部组织(P=0．001)；43．75％(14／32)的鼻咽癌组织在3p21．3D3S4604位点发生了杂合性丢失。鼻咽癌RASSF1A基因表达与性别、年龄、颈部淋巴结转移、TNM临缶床分期、D3S4604位点杂合性丢失和血清EB病毒VCA／IgA抗体滴度无显著相关性，但伴远处转移的鼻咽癌组织的RASSFIA表达显著低于无远处转移的鼻咽癌(P=0．014)。结论 RASSFIA基因的表达下调可能是鼻咽癌发病过程中的晚期事件，3p21区域可能还存在与鼻咽癌发生密切相关的抑瘤基因。     

Novel chromosomal alterations detected in primary nasopharyngeal carcinoma by comparative genomic hybridization

Objective　To gain a better understanding of genetic changes in Cantonese nasopharyngeal carcinoma (NPC). Methods　Comparative genomic hybridization (CGH) was performed on 17 primary nasopharyngeal carcinomas. Results　A novel copy number gain an chromosome 4q and loss of chromosome 1p were found at a high frequency (&gt;50%). Conclusions　Current analysis revealed a comprehensive profile of the chromosomal regions showing gain of chromosomes 4q, 12q, and 1q as well as loss of chromosomes 1p, 3p, 11q, 14q, 15q, 13q, Xq, 9q, 10p, 10q, and 16q. Frequently altered loci may encode oncogenes or tumor suppressor genes involved in the development of primary NPC.     

鼻咽癌组织RASSF1A基因的表达

目的探讨RASSF1A基因在鼻咽癌发病过程中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术在4种鼻咽癌细胞株、32例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽部组织中检测RASSF1A基因的表达,并分析鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604微卫星多态性位点的等位基因杂合性丢失状况。结果RASSF1A基因在4种鼻咽癌细胞株中低表达,32例鼻咽癌组织的RASSF1A基因表达显著低于16例正常鼻咽部组织(P=0.001);43.75%(14/32)的鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604位点发生了杂合性丢失。鼻咽癌RASSF1A基因表达与性别、年龄、颈部淋巴结转移、TNM临床分期、D3S4604位点杂合性丢失和血清EB病毒VCA/IgA抗体滴度无显著相关性,但伴远处转移的鼻咽癌组织的RASSF1A表达显著低于无远处转移的鼻咽癌(P=0.014)。结论RASSF1A基因的表达下调可能是鼻咽癌发病过程中的晚期事件,3p21区域可能还存在与鼻咽癌发生密切相关的抑瘤基因。     

Influence of suppressor gene p16 on retinoic acid inducing cancer cell A549 differentiation

Objective To investigate the role of suppressor gene p16 in the process of differential regulation of retinoic acid (RA) on the A549 lung cancer cells.Methods Tumor suppressor gene p16 was transferred into A549 cells and the cells were treated with all-trans retinoic acid (ATR) at the dosage of 5×10-6 mol/L for 4 d. After that, the proliferation and differentiation of A549 cells were examined by growth curve and cytometry analysis, the change of lung lineage-specific marker MUC1 was tested by immunohistochemical staining. Meanwhile, Western blot was used to observe the change of p16 protein expression in A549 cells treated with ATRA.Results ATRA could obviously inhibit the growth and induce the differentiation of A549 Cells that were transferred with p16 gene. There were more cells arrested in G1/G0 phase and the expression of MUG1 was markedly down-regulated than in control cells. The expression of p16 protein was up-regulated in A549 cells treated with ATRA.Conclusion Suppressor gene p16 could enhance the effects of RA and proliferated suppression and differential induction of A549 cells.