鼠源性抗人IgMμ链单克隆抗体的制备和鉴定

目的 :建立能稳定分泌高效价抗人 Ig Mμ链单克隆抗体的细胞株 ,收获并纯化抗体用于进一步研究。方法 :小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞用 PEG融合 ,小鼠体内诱生腹水的方法收获大量单克隆抗体 ,辛酸硫酸铵提纯 ,并鉴定其纯度。结果 :获得 3个稳定分泌抗体的细胞株 M1、M2、M3,鉴定其亚类分别为 Ig G3、Ig G2 a、Ig G1;腹水抗体纯化后获得纯化抗体含量分别为 0 .36 mg/ ml、0 .2 8mg/ ml、3.71mg/ ml。结论 :用 PEG进行细胞融合 ,辛酸硫酸铵盐析法纯化能够获得较高效价和纯度的抗体     

鼠源性抗人IgM μ链单克隆抗体的制备和鉴定

目的:建立能稳定分泌高效价抗人IgM μ链单克隆抗体的细胞株,收获并纯化抗体用于进一步研究.方法:小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞用PEG融合,小鼠体内诱生腹水的方法收获大量单克隆抗体,辛酸硫酸铵提纯,并鉴定其纯度.结果:获得3个稳定分泌抗体的细胞株M1、M2、M3,鉴定其亚类分别为IgG3、IgG2a、IgG1;腹水抗体纯化后获得纯化抗体含量分别为0.36 mg/ml、0.28 mg/ml、3.71 mg/ml.结论:用PEG进行细胞融合,辛酸硫酸铵盐析法纯化能够获得较高效价和纯度的抗体.     

鸡胚心肌内移植入人干细胞的动物模型的建立

目的　建立人干细胞移植到鸡胚心肌中的动物模型。方法　通过显微注射的方法 ,将Hoechsst 332 5 8标记的人胚胎生殖嵴细胞 (humanprimordialgermcells ,hPGC)注射到孵化 3～ 4d的鸡胚心脏中 ,先运用人特异性的DNA探针对活鸡胚心脏切片进行原位杂交 ,以检测心肌中移植细胞的存在 ,再运用人心肌特异性抗体肌钙蛋白T(cTnT)对相邻的心肌切片进行免疫组织化学染色 ,以观察有无人心肌细胞分化 ,并统计移植成功率。结果　原位杂交显示 ,在术后 10d鸡胚的心肌中观察到有人的细胞 ,呈心肌纤维样并与鸡胚心肌细胞发生嵌合。免疫组织化学观察到鸡胚心肌中有人心肌特异性的标记物cTnT表达。移植成功率为 15 .3%± 2 .4 %。结论　在鸡胚的心肌内建立一个人干细胞移植的模型是可行的。     

中华眼镜蛇蛇毒磷脂酶A2的提纯

目的:探索从中华眼镜蛇蛇毒中快速分离提纯磷脂酶A2(PLA2)的方法方法:应用ARG-CY仿生配基,用亲和层析一步法从中华眼镜蛇蛇毒粗毒中纯化PLA2,用SDS-PAGE进行纯度鉴定及相对分子质量测定,并测定其溶血活性.结果:纯化后获得的PLA2电泳图谱呈单一区带,相对分子质量为14 000,活性为182 μmol/(min·mg).产物具有溶血活性.结论:仿生亲和层析法提纯LPA2操作简单,纯度高,为一高效实用的方法.     

心肌肌钙蛋白T检测及其在病毒性心肌炎诊断的价值

目的:探讨肌钙蛋白T(cTnT)在病毒性心肌炎诊断中的价值。方法:对10 2例急性病毒性心肌炎病人入院后进行1周、2周、3周及3个月cTnT和心肌酶谱的动态研究。结果:急性病毒性心肌炎患者在各检测期内血清cTnT的阳性率较心肌酶谱(CK、CK -MB、GOT、LDH、α-HBD)显著增高,具有统计学意义(P <0 . 0 0 5 )。结论:在病毒性心肌炎的诊断中,cTnT以其更高的敏感性、特异性可取代传统的心肌酶谱检测。     

在心肌细胞/MSCs共培养体系中MSCs出现心肌分化表型

目的:观察MSCs在心肌细胞/MSCs共培养体系中向心肌细胞的分化情况.方法:体外分离培养大鼠心肌细胞,然后将传代后大鼠MSCs与心肌细胞混合培养,建立心肌细胞/MSCs共培养体系,同时以心肌细胞培养上清液及成纤维细胞培养上清液为诱导因素作对照.培养1周后行免疫细胞化学染色,鉴定MSCs中心肌特异性cTnT蛋白的表达.结果:在心肌细胞/MSCs共培养体系中,MSCs与心肌细胞交织成网状,部分MSCs出现cTnT的表达,而对照组MSCs未检出cTnT的表达.结论:体外模拟的心肌环境可以诱导MSCs向心肌细胞分化并表达心肌细胞特异性标志物,诱导MSCs向心肌分化的分子信号可能是心肌细胞膜蛋白.     

P38MAPK通路在BMP9诱导C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化中的作用

目的:研究P38丝裂原活化蛋白激酶(P38mitogen-activated protein kinases,P38MAPK)通路在骨形态发生蛋白9(Bonemorphogenetic protein 9,BMP9)诱导C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法:免疫印迹检测经pAdEasyBMP9诱导24 h的C3H10T1/2干细胞磷酸化P38MAPK和P38MAPK表达水平,免疫荧光定位磷酸化P38MAPK;SB203580抑制C3H10T1/2干细胞磷酸化P38MAPK活性,pAdEasyBMP9诱导21 d时免疫印迹检测心肌特异性蛋白CX43、cTnT表达,免疫荧光检测心肌特异性蛋白cTnT、α-MHC表达,RT-qPCR检测心肌特异性基因GATA4、MEF2C表达。结果:pAdEasyBMP9促进磷酸化P38MAPK表达增高,却不影响P38MAPK表达水平;磷酸化P38MAPK有表达于胞浆和胞核、仅表达于胞核的不同状态。SB203580可显著性地抑制由pAdEasyBMP9诱导的C3H10T1/2干细胞CX43、cTnT、α-MHC、GATA4、MEF2C表达。结论:pAdEasyBMP9诱导C3H10T1/2干细胞能激活P38MAPK通路,并促进其向心肌样细胞分化。     

两种纯化大鼠毛囊干细胞方法的比较

目的:显微分离技术分别与流式细胞仪分选和免疫磁珠分选两种方法联合使用,比较不同方法的优缺点,以进一步探"索毛囊干细胞的体外分选培养的条件.方法:显微分离鼠毛囊隆突部,消化成单细胞悬液.分别利用流式细胞仪和免疫磁珠分选毛囊干细胞.观察细胞形态并检测分选前后细胞的纯度,活性,回收率,进行免疫荧光鉴定.结果:两种方法均能分选出实验所需的毛囊干细胞.流式细胞仪分选细胞纯度高,活性稍弱;免疫磁珠法分选细胞纯度稍低但活性强.结论:流式细胞仪分选和免疫磁珠分选均能有效获取毛囊干细胞.显微分离技术可根据实验需求选择不同的分选方法搭配.     

心肌肌钙蛋白T的检测与急性心肌梗塞的相关性

目的 客观评价人心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T cTnT)在急性心肌肌钙蛋白T梗塞(AcuteMyocardial Infarction,AMI)检测中的性能,了解心肌肌钙蛋白T检测作为AMI诊断的临床价值.方法 我们采用美国CARDIAC READER快速心梗检测仪对高度疑为AMI的患者进行cTnT的检测.结果 在AMI患者发病早期(2h-12h),cTnT的诊断价值高于cTnI、肌红蛋白、CK-MB.结论 cTnT已取代了传统的心肌酶检测,成为诊断AMI的金标准之一,总之,cTnT定量分析能反映心肌坏死面积的大小,即可以诊断AMI,反映疗效和监督预后.     

链酶亲和素-生物素ELISA检测人心肌肌钙蛋白T

目的 建立人心肌肌钙蛋白T (cTnT)链酶亲和素-生物素（SAB）双抗体夹心酶联免疫分析（ELISA）方法,诊断急性心肌损伤性疾病。方法 以固相化单抗3F7捕捉样品中cTnT,生物素化3H12单抗为检测抗体,加入SA-HRP,显色。根据已知不同浓度标准cTnT显色后D(l)值的标准曲线,检测待测样品cTnT含量。结果 cTnT的最低检测值为0.15 ng/ml,批内变异系数为3.8%,批间变异系数为11.2%,回收率为98%。35例急性心肌损伤患者cTnT含量为(0.68±0.17) ng/ml,明显高于52例正常人对照组(0.20±0.03) ng/ml(P<0.01)。结论 本方法灵敏、特异、稳定,可用于临床急性心肌损伤疾病的诊断。     

人心肌特异性肌钙蛋白的提取与鉴定

目的从人心肌组织中提取和纯化心肌特异性肌钙蛋白,为建立心肌梗塞病人免疫诊断试剂准备抗原。方法取新鲜人心室肌组织经捣碎离心提取,ＤＥＡＥ５２柱层析纯化,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳鉴定。结果１００ｇ心室肌可提取３７ｍｇ纯品肌钙蛋白。结论本次提取的心肌特异性肌钙蛋白纯度较高,能作抗原使用。     

人心肌肌钙蛋白T亚型的克隆及表达

目的 构建人心肌肌钙蛋白T(cTnT)亚型的重组载体。 方法 应用RT-PCR技术,从人胚胎心肌组织中扩增cTnT1及cTnT2基因,连接到T Easy vector载体上,筛选重组子。结果 成功地扩增出cTnT1（764 bp）及cTnT2(124)基因片段,经测序证实,构建pExSecI-cTnT1表达载体并获得表达。结论 获得单一亚型的cTnT1及cTnT2基因片段,为研究心力衰竭时的胚胎型基因重构与发病关系提供了依据。     

半自动消化法分离纯化人胰岛细胞的实验研究

目的 探索用半自动胰腺消化系统建立大规模人胰岛细胞纯化的可靠方法.方法 使用自制的半自动人胰腺消化分离装置及胶原酶P进行人胰腺的消化分离,用COBE2991细胞分离机及HCA-Ficoll纯化人胰岛细胞.通过DTZ染色,在倒置显微镜下计数胰岛细胞的数量和纯度,用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的分泌功能.结果 消化后平均每条胰腺可平均获得(38 6201±78 219)个胰岛细胞当量(IEQ),纯化后平均每条胰腺可获得231 420±28 054IEQ,平均每克胰腺组织可获得(3148±317)IEQ,纯化后胰岛细胞平均纯度为(62.81±2.68)%.纯化后的胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖(16.7 mmol/L)时胰岛素的释放量为低糖(3.3 mmol/L)时的3.53倍(P≤0.001).结论 成功建立了半自动人胰岛细胞分离、纯化的方法,纯化的人胰岛细胞具有良好的生物活性.     

重组人瘦素的分离纯化

目的：探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法：采用强阴离子交换柱(Sepharose Qfast flow)和疏水层析柱(Phenyl Sepharose 6 fast flow)在pH7．5的条件下进行纯化。结果：经Q柱一步纯化后，产物纯度由42．3％到达89．6％，随后通过疏水层析纯化后，产物纯度达到96．2％。经SDS—PAGE证实为单一蛋白条带。结论：通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。     

Purification and renaturation of recombinant human interleukin-2-pseudomonas exotoxin (IL2-PE66(4GLU)) fusion protein.]

OBJECTIVE: To evaluate the effect of a novel approach for purification and renaturation of recombinant human interleukin-2-pseudomonas exotoxin (IL2-PE66(4Glu)) fusion protein. METHODS: A novel purification method established in our laboratory was adopted for the purification of the inclusion body, and after renaturation, recombinant human IL2-PE66(4Glu) fusion protein was purified by DEAE-Sepharose FF ion-exchange chromatography. RESULTS: The purity of the fusion protein that retain its biological activity was as high as 95%, and a recovery rate over 80% of the refolded IL2-PE66(4Glu) fusion protein was achieved. CONCLUSION: The purification and refolding method for inclusion body adopted in this study is simple and practical, which lays the foundation for a large-scale production of the fusion protein.     

心肌肌钙蛋白T检测在婴幼儿肺炎并发心力衰竭中的临床研究

目的：探讨心肌肌钙蛋白T(cTnT)检测在婴幼儿肺炎并发心衰中的意义。同时为婴幼儿肺炎是否并发心衰提供实验依据。方法：对42例肺炎并发心衰及15例同期肺炎而无并发心衰患儿进行cTnT、CK-MB检测。结果：无先天性心脏病肺炎并发心衰息儿，cTnT阳性率不高，射血分数、心轴缩短率及心脏指数测定值也不低；而有先天性心脏病并发肺炎心衰患儿则相反。结论：cTnT检测可作为评价心衰的一项生化指标；婴幼儿肺炎若无先天性心脏病，极少引起心衰，而有心衰者常是发生在有先天性心脏病的基础上。     

人心肌肌凝蛋白重链的制备研究

目的：探讨制备人心肌肌凝蛋白重链（MHC）的方法,为制备其抗体提供抗原。方法：采用改良性制备人心肌MHC,通过SDS-PAGE及Western印迹分析其纯度及抗原特性。结果：①SDS-PAGE显示,纯化的人心肌MHC呈现只有一分子量较大的代表人心肌MHC带的典型图像;②Western印迹显示,200ku处有一典型的感光带。结论：所用的改良法能有效地提取纯化人心肌MHC,可满足制备其抗体的需要。     

Variation of Perioperative Blood cTnT Levels in Patients Undergoing Cardiopulmonary Bypass and Its Clinical Implication

The measures we used in the past for detectingmyocardial cell damage are not sufficiently specificand sensitive for accurate diagnosis. Cardiac troponinT ( c Tn T) is a cardiac contractile apparatus proteinand is released into the circulation if myocardial is-chemia results in either reversible or irreversible cellinjury. The purpose of this study was to investigatethe clinicalvalueofc Tn T asa markerin assessing thedestruction of myocardial cell in patients undergoingopen heartsurgery.1　PA…     

肌钙蛋白T判断心脏手术心肌保护效果的临床应用

以心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）、肌酸激酶（ＣＫ）等为指标，对浅低温心脏不停跳心内直视术（实验组）及低温心脏停跳术（对照组）的心肌保护效果进行了临床研究。发现：①ｃＴｎＴ于停机时，术后２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ两组均升高，但各时间段实验组低于对照组；②ＣＫ酶于停机时两组无差异，术后２４ｈ、４８ｈ实验组低于对照组，术后７２ｈ两组均恢复正常；③开胸非心脏手术患者的ｃＴｎＴ值均为正常。结果提示，浅低温心脏不停跳术心肌保护效果优于低温心脏停跳者，其反映心肌损伤程度的指标ｃＴｎＴ的敏感性与特异性明显优于心肌酶谱。ｃＴｎＴ在心肌保护效果方面的研究具有广阔前景     

人重组白细胞介素-8的快速纯化

报道一种快速人重组IL-8纯化方法，大肠杆菌表达的IL-8包涵体经尿素变性后，直接用DEAE柱和SephadexG50柱纯化。纯化的hIL-8经FPLC鉴定，纯度达90%以上。该法为实验室快速、简便纯hIL-8提供了新的技术路线。