2017年临床分离阴沟肠杆菌的耐药性及其ESBLs基因研究

目的探讨某三级甲等医院2017年临床分离阴沟肠杆菌对抗菌药物的耐药性及其超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases, ESBLs)基因的产生情况。方法收集2017年1月-2017年12月自临床患者分离的159株(非重复菌株)阴沟肠杆菌。菌株鉴定及药敏试验采用Walkway 96全自动细菌鉴定及药敏仪,K-B法补充部分药敏试验。ESBLs表型检测采用双纸片扩散法,降落聚合酶链反应(PCR)检测4种ESBLs基因(blaOXA-1、blaCTX-M、blaTEM、blaSHV)。结果未检出对亚胺培南和美罗培南耐药的阴沟肠杆菌,菌株对其他抗菌药物的耐药率均<30%;38株(23.9%)阴沟肠杆菌ESBLs表型试验阳性,其中,35株携带ESBLs基因,以CTX-M-3型(28/35)为主;产酶(ESBLs)菌株对多数β-内酰胺类抗菌药物的耐药现象较严峻。结论 ESBLs表型检测可作为阴沟肠杆菌产ESBLs与否的筛选试验;降落PCR用于ESBLs基因检测简便、快捷;本地区阴沟肠杆菌对抗菌药物的耐药率略低,但产酶菌株耐药现象较严峻,临床医师应根据药敏试验结果合理选择抗菌药物,以减少耐药菌株的产生。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型及耐药谱分析

目的 研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) SCCmec基因分型情况,并对其耐药谱进行分析.方法 收集从临床标本分离出的MRSA 91株,应用多重PCR法对MRSA进行SCCmec基因分型,采用MicroScanWalk-Away-40全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌的鉴定及药敏试验,部分药敏试验采用K-B法.结果 91株MRSA中SCCmecⅡ型72株,占79.1％,SCCmecⅢ型16株,占17.6％,未分型3株,占3.3％,未见SCCmec Ⅰ型及SCCmecⅣ型;ICU中MRSA所占比例最多,为SCCmecⅡ型51.4％、SCCmecⅢ型37.5％,2种SCCmec基因型的MRSA对万古霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、利奈唑胺、喹奴普汀/达福普汀的耐药率为0,对氯霉素的耐药率分别为11.1％和12.5％,对利福平的耐药率分别为8.3％和37.5％,其余均呈高水平耐药,2种SCCmec基因型的MRSA均表现为多药耐药.结论 临床分离的MRSA以SCCmecⅡ型为主,且对抗菌药物呈多药耐药.     

高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究

目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用SPSS 17.0分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ~2检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异性。用Kappa检测分析两种结果的一致性。结果药敏试验结果显示,50株菌中有1株为非结核分枝杆菌;49株中有20株同时对利福平和异烟肼耐药、1株仅对利福平耐药;HRM检测结果显示,21株对利福平耐药,28株为敏感株。以传统药敏试验为参考,HRM检测利福平耐药性的敏感性为86.36%,特异性为92.59%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论 HRM可快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。     

用聚合酶链反应单链构象多态性分析技术检测结核分枝杆菌L型的rpoB基因突变

目的：探索结核分枝杆菌L型的耐药基因rpoB突变与利福平耐药性的关系，以及聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCR-SSCP）技术的临床应用价值。方法：收集结核分枝杆菌L型菌株52株，采用PCR-SSCP方法检测rpoB基因，与采用常规药敏试验法检测利福平耐药的结果进行对比分析。结果：采用常规法检测，52株临床分离株中有38株利福平耐药，耐药率为73.08%（38/52）；PCR-SSCP方法对52株临床耐药株rpoB基因突变的检出率为65.38%（32/52），两种方法检测耐利福平的符合率为84.21%。结论：PCR-SSCP对利福平耐药的结核分枝杆菌L型菌株检出率较高，将其与常规药敏试验联合应用，是一种指导临床用药的好方法。     

产气肠杆菌氨基糖苷类药物获得性耐药基因研究

目的研究医院产气肠杆菌临床分离株氨基糖苷类药物获得性耐药机制,了解该细菌对氨基糖苷类药物的耐药性,为临床资料提供参考依据。方法 24株产气肠杆菌分离自2012年1月-2012年12月住院患者,采用VITEK-2Compact分析系统的药敏卡AST-GN13及K-B法测定抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)检测6种氨基糖苷类修饰酶基因和两种16SrRNA甲基化酶基因。结果 24株产气肠杆菌对头孢替坦100.0%耐药,有16株对头孢曲松的耐药率为66.7%,14株对环丙沙星的耐药率为58.3%;PCR检出氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ1株,阳性率为4.2%,aac(6′)-Ⅰb 6株阳性率为25.0%,其余4种氨基糖苷类修饰酶基因未检出。结论氨基糖苷类修饰酶基因检出阳性率与产气肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药率基本相符。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的 研究农村结核病人中利福平（RIF）耐药结核分枝杆菌（M．TB）临床分离株rpoB基因突变情况。为农村结核病防制提供分子遗传学依据。方法 以标准菌株H37Rv为对照，采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）分析技术，对来自苏北2个县2001年的145株M．TB分离株（其中敏感株117株。耐RIF或含RIF耐多药株28株）的rpoB基因突变的发生率进行研究。结果 农村RIF耐药或含RIF耐多药M．TB临床分离株中rpoB基因突变的发生率平均为71．4％，所有受试117株敏感株rpoB基因均无突变。与药敏试验结果对比PCR—SSCP试验的灵敏度为71．4％；其特异度为100％。结论 M．TB耐RIF与rpoB基因突变密切相关，PCR—SSCP方法可检出RIF耐药M．TB的rpoB基因突变。有助于M．TB耐药性的快速检测和耐药性防治。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药基因KatG分析

目的:了解丽水地区结核分枝杆菌耐INH分离株KatG基因突变情况。方法:采用PCR-DNA直接测序法对48株结核分枝杆菌临床分离株KatG基因与耐INH关系密切的突变位点进行分析。结果:药敏试验共获得INH耐药结核菌12株,INH敏感结核菌36株,耐药株占25.00%(12/48);KatG基因第315位和第463位未见碱基的插入或缺失,其中有37株存在点突变,突变率为77.08%,有9株发生在S315:AGC→ACC(Ser→Thr),均为INH耐药菌株;有37株发生在R463:CGG→CTG(Arg→Leu),其中有9株为INH耐药菌株,28株为INH敏感菌株;S315和R463同时发生突变的有9株,均为INH耐药菌株;有11株均未发生突变,其中3株为INH耐药菌株。结论:丽水地区部分结核分枝杆菌耐INH是由于其KatG基因耐药位点(尤其是S315)突变所致,与药敏试验吻合率为100%;KatG基因R463/L突变无意义;有3株药敏试验耐药菌未发现S315和/或R463耐药位点突变,可能还存在其它耐药机制,需要进一步研究证实。     

深圳市某区淡水产品中香港海鸥菌的检测及耐药特征分析

目的 了解深圳市南山区淡水产品中香港海鸥菌的污染情况,并分析其耐药特征。方法 于2015年4~9月采购该区1家水产批发市场、1家超市和3家农贸市场淡水产品样本共计347份,检样接种改良头孢哌酮麦康凯琼脂（cefoperazone macconkey agar, CMA）培养分离可疑菌株,经革兰染色、生化试验及16S rRNA扩增测序确认;阳性菌株用纸片扩散法试验19种抗生素耐药性。结果 在347份淡水产品中检出香港海鸥菌108份,阳性率31.12%,其中草鱼阳性率20.44%,虎纹蛙阳性率50.82%。蛙株和鱼株药敏结果比较显示:鱼来源株对一、三类头孢菌素类抗生素耐药率高,蛙来源株对四环素类、喹诺酮类和磺胺类耐药率高。在38株多重耐药香港海鸥菌中,9株鱼分离株、29株蛙分离株分别表现为6种和20种耐药表型。结论 深圳市该区淡水产品中存在不同程度的香港海鸥菌的污染且蛙来源的香港海鸥菌耐药模式更加复杂。     

老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子的研究

目的了解老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记携带情况。方法采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率为95.0%,对第三代头孢菌素耐药率为100.0%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,intⅠ1基因的阳性16株(80.0%),intⅠ2、intⅠ3基因均阴性。结论大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子密切相关,Ⅰ类整合子的存在加快了细菌耐药性的传播。     

分格平板分枝杆菌药敏培养基在结核分枝杆菌药敏检测中的应用

目的 评价分格平板分枝杆菌药敏培养基,在结核分枝杆菌药敏检测中的应用.方法 收集临床分离的结核分枝杆菌51株,药敏方法分别采用分格平板分枝杆菌药敏培养基比例法和罗氏培养基比例法(试管比例法).结果 试管比例法:51株结核分枝杆菌的耐药率对异烟肼为68.6％、利福平为51.0％、乙胺丁醇为49.0％、链霉素为52.9％;与试管比例法相比较,分格平板琼脂比例法药敏结果2株对异烟肼耐药、1株利福平耐药和2株乙胺丁醇耐药菌株与其不符,其余结果一致;4种一线抗结核药物的药敏结果符合率分别为异烟肼94.3％、利福平96.3％、乙胺丁醇92.0％、链霉素100.0％;51株分离的临床结核分枝杆菌中泛耐药24株,多药耐药7株,而对4种药物全敏感12株,敏感率仅为23.9％.结论 分格平板琼脂比例法操作简便,结果符合率高,容易观察,能广泛应用各级临床结核实验室.     

多重耐药阴沟肠杆菌β-内酰胺酶编码基因的研究

目的了解北京朝阳医院临床分离的多重耐药阴沟肠杆菌的β-内酰胺酶编码基因. 方法对12株临床分离的多重耐药的阴沟肠杆菌进行琼脂稀释法药敏试验、改良三维试验法和聚合酶链反应克隆测序. 结果 12株阴沟肠杆菌对多种抗生素耐药,改良三维试验法证实同时产生AmpC酶和ESBLs;其中,9株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为SHV-2、SHV-12、CTX-M-3和CTX-M-14型ESBLs;对另外3株进行粗酶等电点测定发现,存在7.89和8.0等电点条带,并被克拉维酸抑制;12株细菌ampD和ampC基因PCR扩增均呈阳性,将6株耐药菌进行ampD基因的克隆测序发现均存在羧基端可疑的突变位点. 结论 12株多重耐药的阴沟肠杆菌同时产生≥1种的ESBLs及高产AmpC酶.     

多重耐药鲍曼不动杆菌ERIC—PCR的分子流行病学研究

目的监测医院不同病区分离的多重耐药鲍曼不动杆菌属耐药性变迁及基因同源性,为临床治疗和医院感染控制提供依据。方法收集2006—2008年医院临床分离非重复多重耐药鲍曼不动杆菌株23株,采用Kirby—Bauer（K—B）法进行药敏试验,应用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC—PCR）对菌株进行DNA分型及同源性分析。结果23株鲍曼不动杆菌中,对3种或以上抗茵药耐药有22株;ERIC—PCR谱型表现为7种基因型,其中来源于不同的2个克隆株A型和B型,共占79．3％,且2个克隆株的相似度为72．7％。结论来自多个病区的多重鲍曼不动杆菌对抗生素耐药率高,且具有基因同源性,存在院内克隆传播。     

耐药鲍曼不动杆菌耐药基因检测及同源性分析

目的了解南京市某医院鲍曼不动杆菌的感染和耐药情况。方法对2011年2月至2013年4月临床检出的56例鲍曼不动杆菌标本进行药敏试验;采用聚合酶链式反应(PCR)进行OXA-51、OXA-23、OXA-24、OXA-58、VIM、SHV、GES、IMP和TEM共9种耐药基因的检测;从中选择44株应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析。结果 56株检出泛耐药株38株,不同病区泛耐药与非泛耐药株的阳性率差异有统计学意义。菌株对常用抗生素除阿米卡星和妥布霉素外,耐药率均大于60.00%。56株经PCR检出OXA-51 49例(87.50%)、OXA-23 46例(82.14%)、OXA-58 1例(1.79%)、TEM 56例(100.00%)、VIM 45例(80.36%)、GES 16例(28.57%)及SHV 4例(7.14%);未检出OXA-24和IMP。44株经PFGE共分为14个型,其中A型20株,为主要流行株;B型5株,C型8株,剩余菌株为互不相同型。结论该院鲍曼不动杆菌感染以ICU和呼吸科居多,对常用抗生素高度耐药,OXA-51,OXA-23,TEM和VIM为主要耐药基因。近半数菌株以同源形式传播,交叉感染现象严重,应引起重视和采取改进措施。     

老年患者感染大肠埃希菌分离株整合子、转座子遗传标记研究

目的 了解老年患者感染大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记,转座子遗传标记(merA、tnpA基因)携带情况.方法 采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测int Ⅰ 1基因,转座子merA基因和tnpA基因,扩增产物纯化后基因测序.结果 大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60%,对复方新诺明耐药率为95%,对第三代头孢菌素耐药率为100%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,int Ⅰ 1基因的阳性16株(80%),merA基因2株(10%),tnpA基因均阴性.结论 大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子和转座子系统密切相关,携带Tn21/Tn501转座子的大肠埃希菌为国内首次报道.     

阴沟肠杆菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解某医院阴沟肠杆菌产AmpC酶情况及其对10种常用抗菌药物的耐药性,以指导临床合理选择抗菌药物。方法收集该院2007年8月-2008年7月临床分离的非重复阴沟肠杆菌98株,采用头孢西丁纸片扩散法进行AmpC酶初筛,酶提取物三维试验确证阴沟肠杆菌高产AmpC酶,聚合酶链反应检测AmpC酶基因。以K B纸片扩散法进行药敏试验。结果98株阴沟肠杆菌中有36株携带AmpC酶,检出率36.73％。在36株产AmpC酶阴沟肠杆菌中,检测到仅携带DHA基因株6株(16.67%);仅携带ACC基因株20株(55.56%);同时携带ACC和MIR基因株8株(22.22%);同时携带ACC、MIR和FOX基因株2株(5.56%)。产AmpC酶菌株对头孢西丁全部耐药,对第三代头孢菌素、联合抑酶剂、氨曲南、阿米卡星及环丙沙星均有不同程度耐药（44.44%~91.67%）;对头孢吡肟及亚胺培南较敏感,耐药率分别为27.78%、0.00%。结论阴沟肠杆菌AmpC酶携带率高,是导致其对第三代头孢菌素耐药的重要原因;治疗阴沟肠杆菌感染应以药敏检测结果为依据。     

烧伤患者感染耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶与膜孔蛋白编码基因研究

目的了解烧伤患者分离耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶和膜孔蛋白CarO、oprD2基因的存在状况,以探讨鲍氏不动杆菌耐药的分子水平依据。方法 20株耐药鲍氏不动杆菌均分离自2012年10月-2013年8月医院住院烧伤患者,采用GNS-448药敏卡及K-B法测定抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)检测34种β-内酰胺酶和膜孔蛋白CarO,oprD2基因,数据采用SPSS 15.0软件进行统计分析。结果 20株鲍氏不动杆菌对12种常用抗菌药物严重耐药,对头孢唑林、头孢噻肟和头孢西丁的耐药率达100.0%;20株耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶编码基因检出率,blaTEM-1为10.0%、blaADC为100.0%、blaOXA-2群为95.0%、blaOXA-24群为5.0%、blaOXA-23群为95.0%、blaOXA-66群为95.0%;耐药株与SDF株的OprD2蛋白分子立体结构存在4个氨基酸的变异。结论医院分离的20株耐药鲍氏不动杆菌存在β-内胺酶基因blaADC变异型、blaOXA-23和blaOXA-66,与SDF株的OprD2蛋白分子立体结构存在明显差异。     

应用MALDI-TOF MS快速检测泛耐药鲍氏不动杆菌的研究

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)建立一种快速鉴定泛耐药鲍氏不动杆菌的方法。方法收集临床微生物实验室全自动细菌鉴定/药敏系统鉴定的鲍氏不动杆菌菌株135株,其中包括28株敏感鲍氏不动杆菌(S-AB),107株泛耐药鲍氏不动杆菌(PDR-AB),随机挑选8株敏感鲍氏不动杆菌和10株耐药鲍氏不动杆菌自行建立敏感和耐药标准菌株库,用MALDI-TOF MS鉴定余下20株敏感鲍氏不动杆菌和97株泛耐药鲍氏不动杆菌菌株,并与自建库比对。结果 20株敏感菌株中有4株直接鉴定到自建库敏感菌株,97株耐药菌株中有31株直接鉴定到自建库耐药菌株,余下菌株均鉴定到系统数据库鲍氏不动杆菌属,并且所有的鉴定结果都与PhoenixTM-100结果相符。结论应用MALDI TOF MS可以对院内敏感和泛耐药鲍氏不动杆菌进行快速鉴定药敏,这种方法快速、高效,对临床医生及时准确的用药具有重要的指导意义。     

临床标本中566株葡萄球菌的检测及耐药性研究

目的 了解医院临床标本中葡萄球菌对常用抗生素的耐药情况,为临床用药提供依据.方法 对广西医科大学第一附属医院2007年1～12月检出的566株葡萄球菌的药敏结果 进行分析.结果 从临床标本中分离出的566株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌(SA)249株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)317株.其中甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)有112株,甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)有229株.药敏结果 显示,葡萄球菌对青霉素G、红霉素的耐药率均>50%,其中甲氧西林耐药葡萄球菌对多种抗生素的耐药性均高于甲氧西林敏感的葡萄球菌,但对万古霉素的耐药率为0%.结论 葡萄球菌对多种抗生素耐药情况严重,临床医生应重视药敏试验,合理选用抗生素.     

贵阳市市售水产品中副溶血性弧菌的污染状况和耐药性研究

目的了解贵阳市市售水产品中副溶血性弧菌污染状况,进一步对毒力基因和药敏进行检测,为防治副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据。方法随机采集市售水产品149份,用PCR方法对分离出的副溶血性弧菌进行tdh、trh基因扩增,并进行药敏试验。结果 149份水产品中有28份样品分离出副溶血性弧菌;28株菌检出1株tdh阳性,所有菌株trh阴性;19株菌对氨苄西林耐药,耐药率为67.86%,有1株菌出现多重耐药,所有菌株对氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、呋喃妥因、复方新诺明敏感。结论贵阳市售水产品副溶血性弧菌污染已达一定程度,同时存在耐药情况,应加强水产品卫生监督及抗生素使用管理。     

幽门螺杆菌临床分离株耐药性研究

目的 分析深圳地区幽门螺杆菌临床分离株，对多种常用抗幽门螺杆菌抗生素的药敏和耐药情况。方法 采用琼脂稀释法和E-test药敏试验检测幽门螺杆菌对甲硝唑、阿莫西林和克拉霉素的药敏和耐药性。结果 MIC范围：甲硝唑0．54～＞32μg／m1；阿莫西林0．28～＞32μg／m1；克拉霉素＜0．016～1．2μg／m1；耐药情况：65％(E-test法)对甲硝唑耐药，37．5％对阿莫西林耐药，克拉霉素耐药率为0。结论 深圳地区幽门螺杆菌对甲硝唑和阿莫西林耐药率较高，而对克拉霉素无耐药现象。