D-氨基葡萄糖对胶质瘤细胞生长特性影响的研究

目的 D-氨基葡萄糖对胶质瘤细胞的生长抑制作用,并探讨其可能的作用机理.方法 采用MTT法筛选D-氨基葡萄糖最佳浓度,应用流式细胞仪检测D-氨基葡萄糖对细胞周期的影响.结果 D-氨基葡萄糖能明显抑制胶质瘤细胞生长,并且呈现一定的剂量依赖性.3.5mg/LD-氨基葡萄糖表现出最大抑制率,为21.44%.经D-氨基葡萄糖作用后细胞在G2-M期的比例增加,说明细胞停滞在G2-M期,但是未出现凋亡峰.结论D-氨基葡萄糖能抑制人胶质瘤细胞的生长,其作用机理是使细胞生长停滞在G2-M期.     

三氧化二砷诱导慢性髓系白血病细胞G2/M周期停滞及其机理

目的 研究三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞的体外作用特点及其机理。方法 将三氧化二砷与慢性髓性白血病细胞系K562作用后，测定细胞的生长曲线及活性，流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期分布的改变；同时，采用RT-PCR方法检测药物作用前后细胞周期相关基因表达的变化。结果 ①三氧化二砷明显抑制K562细胞的生长，其作用呈时间和浓度依赖性；②三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的作用较弱，但可明显诱导K562细胞在G2／M期停滞，此效应也呈时间和浓度依赖性；③三氧化二砷作用后，细胞周期抑制基因p57表达明显上调，而细胞周期促进基因cyclinB的表达受到抑制。结论 三氧化二砷能有效抑制慢性髓系白血病细胞的生长，其机理主要为诱导细胞G2／M期周期停滞；该效应与细胞周期相关基因的表达变化有关。     

金雀黄素对子宫内膜癌细胞体外生长影响的研究

目的 研究金雀黄素抑制人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞体外增殖作用机理.方法 人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞进行体外培养,用MTT法检测细胞增殖作用,用流式细胞仪检测细胞周期情况.结果 金雀黄素能明显抑制Ishikawa细胞体外增殖,并且随着药物浓度增加其抑制作用更加明显,呈剂量依赖性,金雀黄素对Ishikawa细胞体外增殖抑制最显著的时间是加药48 h,加药后72 h的抑制率虽然有所上升,但不甚明显,加药96h其抑制率稍低,加药后120 h其抑制率明显降低;金雀黄素处理的Ishikawa细胞明显阻滞于G2-M期.结论 金雀黄素通过阻滞细胞于G2-M期,从而抑制Ishikawa细胞体外增殖.     

D-氨基葡萄糖衍生物抗人肝癌HepG2的研究

目的研究D-葡萄糖衍生物对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响．进而探讨D-葡萄糖衍生物诱导HepG2细胞捌亡的作用。方法用不同浓度的D-葡萄糖衍生物处理HepG2，采用MTT法测定其对HepG2细胞生长增殖的抑制作用，通过透射电镜、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的形态结构及其对HepG2细胞诱导凋亡的效应。结果D-氮基葡萄栅衍生物能抑制HepG2细胞的生长增殖。并呈一定的浓度、时间依赖性；D-氨基葡萄糖衍生物能诱导肝癌细胞凋亡．透射电镜可见肝癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变．DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱，流式细胞仪检测出现典型的亚二倍体凋亡峰。结论D-氨基葡萄糖衍生物在体外可显著抑制人肝癌细胞株生长。其作用机制主要是诱导肿瘤细胞凋亡。     

PDGF-B链基因的三链形成寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤生长及细胞周期的影响

目的:观察血小板衍生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)B链基因的三链形成寡核苷酸(triplex formingoligonucleotide,TFO)对大鼠胶质瘤细胞生长及细胞周期的影响.方法:所有SD大鼠(36只,体质量220～250 g)均在右尾状核区微量灌注1×106个C6胶质瘤细胞,其中实验Ⅰ组和Ⅱ组(n=12)在细胞接种后的第8天开始分别原位注射TFO 1.5mg/20μl和3.0 mg/20 μl的生理盐水,以后每隔72 h注射相同剂量的TFO,共注射3次.对照组(n=12)在相同时间原位注射20μl生理盐水.实验3周时处死所有的大鼠,观察肿瘤的生长情况,标本做常规H E染色.流式细胞仪检测肿瘤PDGF-B、PCNA的表达及细胞周期.结果:实验Ⅰ组、Ⅱ组的成瘤抑制率分别为66.1%、91.8%,两者相比有显著差异(P＜0.01).TFO对胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA表达有明显的抑制作用(P＜0.01);TFO能明显降低胶质瘤细胞G2-M期和S期(DNA合成期)的百分率,阻止细胞由静止期(G0-G1期)进入DNA合成期(S期,P＜0.01).以上作用均存在浓度依赖性.结论:原位应用TFO能抑制PDGF-B表达,阻碍细胞进入S期,使胶质瘤细胞增殖降低,达到抗胶质瘤生长的作用.     

人参皂甙Rh_2对C_6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 :观察人参皂甙 Rh2 对 C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 ,并在分子水平探讨其作用机理。方法 :细胞计数法检测细胞增殖 ,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。结果 :1 Rh2 2 ,4,8μmol/L对 C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用 ,且呈明显量效关系 ;2 Rh2 作用 72 h后 ,4μmol/L浓度对 C6胶质瘤细胞诱导凋亡作用最为明显 ;3 Rh2 作用后 ,G0 /G1期细胞百分率明显下降 ,而S期细胞百分率显著增加。结论 :Rh2 对 C6胶质瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用 ,且这种作用有周期特异性。     

Gadd45表达对肿瘤细胞HCT116生长的抑制作用及其机理

目的利用Gadd45可诱导细胞系探讨Gadd45对肿瘤细胞生长抑制作用的分子机理。方法用四环素撤除表达系统以及克隆形成实验、流式细胞检测、TUNEL法检测、Western印迹检测等方法研究Gadd45表达对肿瘤细胞HCT116生长的抑制作用及其机理。结果用四环素撤除表达系统,建立了稳定传代的Gadd45可诱导细胞系HCT116。撤除四环素,HCT116细胞的Gadd45能够被诱导高表达。实验结果证实,在我们建立的细胞系中,Gadd45诱导高表达对细胞生长的抑制率高于85％。流式细胞检测表明,Gadd45高表达有细胞G2-M期阻滞作用。同时,TUNEL法检测到Gadd45诱导的细胞凋亡,Western印迹检测观察到PARP和半胱氨蛋白水解酶3蛋白质剪切激活。结论Gadd45高表达可以抑制HCT116细胞生长,其机理主要是通过Gadd45诱导细胞G2-M期阻滞和激活细胞凋亡途径起作用。     

秋水仙碱对胶质瘤细胞抑制作用的体外实验研究

目的 研究秋水仙碱对G422胶质瘤细胞生长增殖的抑制作用.方法 传代培养G422胶质瘤细胞,将其分为对照组、秋水仙碱处理组同时进行实验,秋水仙碱处理组的药物浓度分别为2、4、8、16μg/mL.分别在1、2、3d用MTT法测定肿瘤生存率.结果 秋水仙碱能明显抑制G422胶质瘤细胞的生长,而且随着秋水仙碱的浓度增大及时间延长,肿瘤细胞的生存率也降低.秋水仙碱的浓度在64μg/mL,作用3d时,肿瘤细胞的生存率仅(16.97±1.32%.结论 秋水仙碱对G422胶质瘤细胞的生长增值有明显的抑制作用,并表现为浓度和时间依赖性.     

平阳霉素抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304的实验研究

目的 探讨平阳霉素抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304的量效和时效关系及其相关机制.方法 用不同浓度的平阳霉素作用于ECV304细胞24、48、72 h,MTT法观察细胞增殖抑制情况,电镜及DNA电泳实验分析细胞凋亡情况,流式细胞术分析细胞凋亡率、细胞周期及Fas、Bcl-2蛋白的表达.结果 MTT法显示不同浓度平阳霉素组间细胞生长抑制率有显著差异,浓度越高、作用时间越长,抗增殖效应越明显;流式细胞术显示细胞凋亡率随药物浓度和作用时间增加而升高,平阳霉素各浓度作用24 h后,G2-M期百分率增高,S期百分率降低,G0-G1期百分率无明显变化;Fas表达随药物浓度增加而递增,Bcl-2表达随药物浓度增加而递减.结论 平阳霉素能明显抑制ECV304细胞生长,并具有浓度和时间依赖性;平阳霉素可能是通过上调Fas蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达,从而诱导细胞在G2-M期发生凋亡.     

Cyclin D1调控U87胶质瘤细胞周期研究

目的探讨细胞周期蛋白D1（Cyclin D1,CCND1）在U87胶质瘤细胞周期调控中的作用。方法根据NCBI GenBank中cyclin D1序列设计双链siRNA,利用Western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND1对U87胶质瘤细胞周期进程的影响。结果经Western blotting检测,成功抑制了CCND1的表达。并且抑制CCND1后,U87细胞周期停滞在G1期,抑制了U87细胞的G1／S期转换。结论U87细胞中抑制CCND1可以显著抑制细胞周期进程,使细胞周期停滞在G0／G1期,为进一步研究胶质瘤的靶向治疗奠定了理论基础。     

大蒜素对人胃癌MKN45细胞株的影响及其作用机制的研究

目的探讨大蒜素对胃癌细胞株体外增殖的影响及其作用机制。方法利用四甲基偶氮唑蓝还原反应（MTT法）测定大蒜素在不同浓度下对胃癌细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪测定大蒜素在不同浓度下对胃癌细胞周期的阻滞作用。RT-PCR检测大蒜素在不同浓度下对胃癌细胞Caspase-3基因表达的变化。结果各实验组大蒜素能明显抑制胃癌细胞增殖（P〈0．01），且抑制率呈剂量依赖性。大蒜素可使胃癌细胞周期发生明显的改变，表现为G1期细胞减少，G2／M期细胞增加。大蒜素能增强胃癌细胞Caspase-3 mRNA的表达。结论大蒜素使细胞周期停滞于G2-M期的作用机制可能与其上调Caspase-3 mRNA的表达有关。     

丁酸钠对胃癌细胞株SGC-7901体外生长分化的影响

目的 研究丁酸钠对人胃癌细胞系生长抑制及诱导分化的抗肿瘤作用.方法 以不同浓度的丁酸钠作用体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901,应用MTT法检测对细胞生长的抑制情况;应用分光光度法检测分化标志酶活力;应用流式细胞技术检测细胞周期分布.结果 丁酸钠可以使SGC-7901细胞发生形态学改变;可抑制细胞生长,2.5mmol/L和5.0 mmol/L两种浓度丁酸钠在24、48、72 h对细胞生长的抑制率分别为27.72%、39.25%、85.02%和39.05%、60.76%、93.63%,具有时间剂量依赖性(P<0.01);可使细胞分化标志酶乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(ALP)活力降低;可使G0/G1期细胞大量增多,S期、G2/M期细胞相应减少,出现G0/G1期停滞.结论 丁酸钠可诱导SGC-7901细胞分化并抑制其恶性生长.     

二烯丙基二硫对人白血病细胞株增殖的影响

目的　研究二烯丙基二硫 (DADS)对人白血病细胞HL - 60的作用并探讨其作用机理。方法　采用MTT法、生长曲线绘制、流式细胞仪、免疫组化等方法 ,观察DADS对体外培养的HL - 60细胞的生长抑制、细胞周期分布以及PCNA表达的影响。结果　DADS对HL - 60细胞具有明显的生长抑制效应且呈剂量 -效应依赖关系 ,当 2 0mg·L- 1 DADS作用HL - 60细胞 72h ,增殖抑制率达 70 .5 %。流式细胞仪检测结果提示 :DADS处理后的HL - 60细胞主要停滞于S +G2 /M期 ,同时出现亚G1 峰 ;免疫组化结果显示 :DADS处理后的HL - 60细胞PCNA表达下降。结论　DADS对体外培养的HL - 60细胞具有明显的增殖抑制作用 ,DADS抑制HL - 60细胞增殖与细胞周期S +G2 /M期阻滞和促进凋亡有关     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

三苯氧胺对人脑胶质瘤细胞SHG-44增殖的影响

目的研究三苯氧胺（TAM）对人脑胶质瘤细胞SHG-44增殖的影响并探究其可能机制。方法将不同浓度TAM和脑胶质瘤细胞作用,分别用细胞划痕法、3H-TdR掺入法、流式细胞仪和免疫组化法检测细胞转移能力、细胞DNA合成情况、细胞周期改变和细胞凋亡率及雌激素受体的表达情况。结果TAM在体外能明显抑制SHG-44细胞转移,抑制细胞DNA合成,且抑制作用呈浓度依赖性。流式细胞仪显示细胞经TAM处理后,表现为G0/G1期和G2/M期细胞所占比例增加,而S期细胞所占比例减少。用0、2、10μmol/LTAM处理时细胞凋亡率分别为（2.05±0.28）%、（7.66±0.52）%和（19.00±0.77）%,SHG-44细胞不表达雌激素受体。结论TAM可能通过改变细胞周期和诱导细胞凋亡来抑制脑胶质瘤细胞SHG-44的生长。     

腺病毒介导的TEM8抑制小鼠在体胶质瘤模型的血管生成作用

目的探讨基于TEM8的腺病毒(Ad-TEM8)对小鼠胶质瘤G422细胞系体内外模型的生长抑制及其抗血管的生成作用。方法连续皮下注射Ad-TEM8使其激活小鼠免疫系统并收集小鼠脾淋巴细胞,将该细胞与G422细胞体外共培养,检测G422细胞的生长抑制率,并应用ELISOT检测该免疫激活淋巴细胞在体外分泌IFN-γ的能力。另构建皮下荷G422昆明小鼠在体肿瘤模型,并连续皮下注射Ad-TEM8后检测肿瘤生长速度以及瘤内血管抑制效应。结果 Ad-TEM8能有效激发小鼠产生具有肿瘤生长抑制作用的毒性效应淋巴细胞,并分泌IFN-γ。Ad-TEM8皮下注射诱导的细胞毒性作用能有效抑制在体G422肿瘤生长,产生明显的血管生成抑制作用。结论 Ad-TEM8可诱导小鼠产生细胞毒性细胞、抑制在体和体外肿瘤细胞生长,其在体抑制肿瘤生长作用机制之一可能是抑制肿瘤内血管生成。TEM8可能成为抗胶质瘤血管生成治疗的新靶标。     

珠子参对小鼠H22肝癌抑制作用及机制研究

目的：观察珠子参对小鼠移植性肝癌（H22）的增殖抑制作用及其作用机制.方法：建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,观察珠子参对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,放免法（RIA）检测血清中TNF-α含量,光镜（HE染色）观察肿瘤细胞生长增殖状态,并在透射电镜下观察肿瘤细胞超微结构形态,流式细胞仪技术（FCM）检测细胞凋亡并进行周期分析.结果：珠子参抑瘤率达44.89%;血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度珠子参组高于正常对照组,而比模型对照组低（P〈0.05）;光镜观察到珠子参组小鼠肿瘤组织周围有大量的吞噬细胞和淋巴细胞浸润,电镜下可见珠子参组癌细胞胞质浓染,核固缩,线粒体明显减少;FCM分析显示,珠子参各组G0-G1期和S期细胞（%）减少,而G2-M期细胞和凋亡细胞（%）增加.结论：珠子参对H22肝癌小鼠具有良好的抑瘤作用,其作用机制可能与珠子参阻止G2-M期细胞转换而影响癌细胞在细胞周期中的进程,干扰S期DNA合成以及诱导小鼠肝癌细胞凋亡有关;此外珠子参能明显抑制荷瘤小鼠TNF-α水平的异常增高,使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疫力等作用.     

芦丁对HepG2细胞生长的影响

目的 观察芦丁(Rutin)对人肝癌HepG2的生长和增殖的影响.方法 体外培养HepG2细胞,用甲基塞唑基四唑(MTT)法、3H-TdR掺入法测定芦丁对人肝癌HepG2的生长和增殖抑制情况,并且用荧光染色法在Olympus荧光显微镜下观察芦丁对HepG2细胞凋亡的影响,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 芦丁能抑制HepG2细胞的生长、增殖、诱发细胞凋亡;在50～250 μmol/L浓度范围内处理的HepG2,G0/G1期细胞增加,G2/M期细胞减少,细胞周期阻滞于G0/G1期.结论 芦丁能抑制HepG2细胞的生长,并诱发细胞凋亡,呈浓度依赖性.     

2-甲氧基雌二醇对胶质瘤细胞增生及凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对体外培养的U87胶质瘤细胞增生、凋亡及细胞周期的影响.方法 将不同浓度的2-ME分别作用于U87细胞,采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;四甲基偶氮哩蓝(MTT)法检测2-ME对U87细胞增生的抑制作用;流式细胞术分析2-ME对U87细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 1～15μmol/L浓度的2-ME在24、36、48及72 h均可明显抑制U87细胞增生并诱导其凋亡.并在一定范围内呈时间和剂量依赖性;各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05).U87细胞经2-ME作用后G2/M期细胞增加,而G0/G1期和S期细胞减少.结论 2-ME可明显抑制U87胶质瘤细胞增生并诱导其凋亡,在一定范围内呈时间和剂量依赖性.     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5体内外生长的影响.方法采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG-5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况.结果NDGA可显著抑制CHG-5细胞体外增殖,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,凋亡细胞增加.采用接种后第5天按50 mg/kg腹腔内注射给药,治疗组移植瘤体积较对照组缩小,未见明显的毒副作用.结论NDGA对CHG-5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用,其作用可能与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关.