家兔视网膜脱离状态下玻璃体NGF水平及视网膜细胞动态观察

目的 :研究视网膜脱离状态下玻璃体内源性神经生长因子 (NGF)水平及视网膜细胞的动态变化 ,为视网膜脱离的治疗提供实验依据。方法 :健康青紫兰家兔制备视网膜脱离模型 ,模型制备后 8h ,1d ,4d ,7d ,14d以夹心酶免疫反应方法检测玻璃体NGF的水平 ,同时制备视网膜光镜、电镜标本 ,观察视网膜细胞的动态变化。统计学方法采用方差分析、秩和检验和直线相关分析。结果 :①家兔正常玻璃体NGF的水平为 (16 48± 2 5 2 )ng/L。视网膜脱离后 8h玻璃体NGF水平已增加 ,1d后达正常水平的 12 6倍 ;脱离后第 4d为正常水平的 4倍 ;第 14d降至正常水平。②视网膜脱离后第 4～ 7d变性及凋亡视细胞数增加 ,与玻璃体NGF水平显著负相关。③视网膜脱离 7d后神经节细胞层的厚度与玻璃体NGF水平显著正相关。结论 :NGF对视网膜细胞可能具有保护作用 ,提示外源性NGF可应用于治疗视网膜脱离     

Bcl-2、Bax在慢性高眼压大鼠视网膜的表达

目的探讨Bcl-2、Bax在慢性高眼压大鼠视网膜的表达,以及与慢性高眼压大鼠视网膜损伤的关系。方法健康成年SD大鼠20只,分为正常组和实验组,每组各10只。实验组烙闭大鼠巩膜上静脉制作慢性高眼压模型,造模2个月后,通过HE染色观察视网膜神经节细胞丢失情况,用免疫组织化学法检测视网膜中Bcl-2、bax的表达。结果光镜下观察实验组较正常组神经节细胞数量减少（P〈0.05）。Bcl-2蛋白在正常组及实验组大鼠视网膜上均有阳性表达,位于神经节细胞层及内核层,实验组较正常组Bcl-2表达程度有增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。正常组大鼠视网膜中Bax蛋白在神经节细胞层有弱阳性表达,实验组Bax蛋白表达位于神经节细胞层和内核层,表达程度明显增强,与正常组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Bcl-2及Bax的表达失衡可能是慢性高眼压视网膜神经节细胞凋亡的原因之一。     

大鼠实验性视网膜脱离复位模型的建立及其形态学观察

目的 建立视网膜脱离复位模型并进行组织学观察.方法 30只健康SD大鼠(60眼),分3组,每组各10只.左眼为模型眼,采用视网膜下注射透明质酸钠的方法建立视网膜脱离模型,右眼为正常对照,不做任何处理,分别于术后1d,1周,3周取眼球,光镜下观察其组织学形态.结果 29只模型眼成功建立视网膜脱离模型,1周内全部复位.光镜下观察,视网膜脱离早期视网膜各层水肿,结构紊乱,光感受器外节丢失变薄.视网膜复位1周,视网膜水肿减轻,各层间有空泡样变,光感受器细胞排列紊乱、变薄.外核层细胞数目减少,排列紊乱.视网膜复位3周,视网膜各层排列整齐,外核层细胞少,神经节细胞有变性.结论 本实验成功建立视网膜脱离及短期复位的动物模型,组织学观察复位后视网膜细胞存在不可逆性受损.     

昼夜节律的改变对视网膜感光视蛋白melanopsin表达的影响

目的 研究昼夜节律的改变对视网膜感光视蛋白melanopsin表达的影响。方法出生14 d (P14) C57BL/6J小鼠随机分为实验组和正常对照组,实验组每天给予24 h持续光照,对照组模拟正常昼夜节律每天给予12 h光照、12 h黑暗环境,运用免疫荧光染色结合RT-PCR技术,分别检测实验组和对照组小鼠在光照1周后和8周后视网膜感光视蛋白melanopsin的表达情况。 结果免疫荧光染色结果显示感光视蛋白melanopsin主要位于视网膜神经节细胞层,少部分位于内核层。小鼠光照1周后melanopsin阳性细胞的表达数目实验组少于对照组；RT-PCR结果示小鼠光照1周和8周时melanopsin的mRNA含量实验组均少于各自的对照组,两者具有统计学意义(P<0.01)。结论持续光照可以减少视网膜感光视蛋白melanopsin的表达,提示melanopsin阳性神经节细胞为光敏感性细胞,其表达可能对维持正常的昼夜节律有重要作用。      

多焦视网膜电图评价视网膜脱离手术术前、术后视网膜功能

目的:探讨多焦视网膜电图(multifocal electroretinography,MERG)对视网膜脱离(retina detachment,RD)术前、术后的视功能客观评价意义。方法:应用Retiscan图像系统对101例RD患者的101只患眼及未网脱眼术前和术后的视功能进行MERG检测。测试野水平视角为±30°,垂直视角为±30°,采用ERG-jet电极,在8min(分8段)记录64个视网膜部位的反应。结果:视网膜脱离区域P1波振幅密度和N1波振幅较对侧眼相应值均明显降低(P<0.001),P1波和N1波潜伏期较对侧眼相应区域的潜伏期明显延迟(P<0.001):视网膜脱离区域术后P1波振幅密度和N1波振幅较术前同一区域均有明显提高(P<0.001),P1波和N1波潜伏期较术前同一区域的潜伏期明显缩短(P<0.001);视网膜脱离区域术后P1波振幅密度和N1波振幅较对侧眼对应区域均有明显降低(P<0.001),P1波和N1波潜伏期较对侧眼相应区域的潜伏期明显延迟(P<0.001)。结论:多焦ERG能客观定量评价RD 术前、术后的视功能;视网膜脱离手术虽然能达到解剖复位,却不能完全达到功能复位。     

泛素-蛋白酶体通路在实验性视网膜脱离后早期对视网膜细胞凋亡的调控作用

目的探讨泛素-蛋白酶体通路(UPP)在实验性视网膜脱离(RD)中对视网膜细胞凋亡的调控作用。方法 Wistar大鼠分为正常对照组(n=12)、RD实验组(n=15)和抑制实验组(n=15)。RD实验组和抑制实验组大鼠分别经左眼视网膜下注射透明质酸钠建立RD模型,其中抑制实验组大鼠建模后经腹腔注射蛋白酶体抑制剂MG132(0.10 mg.kg-1.d-1)。建模后4 d,TUNEL染色激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞;采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测视网膜组织中UPP的标志物视网膜细胞泛素(Ub)、泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)的mRNA和蛋白表达。结果激光共聚焦显微镜观察发现,与RD实验组比较,抑制实验组凋亡细胞明显增多。Ub、UCH-L1 mRNA和蛋白表达检测结果显示:RD实验组>正常对照组>抑制实验组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RD后早期UPP活性增高,在视网膜细胞凋亡发生中具有保护性调控作用。     

双目间接检眼镜下行视网膜脱离复位术疗效分析

目的：比较双目间接镜直视下与传统直接检眼镜下行视网膜脱离（RD）复位术的临床疗效.方法： 将60例孔源性视网膜脱离患者,随机分为二组,每组30例30眼,第一组用双目间接检眼镜直视下行视网膜脱离复位术,第二组在直接检眼镜下进行手术.比较两种方法术后的解剖复位率和视功能恢复情况.结果：术后随访3个月～2年,第一组30例患者视网膜复位27例,解剖复位率90%,未复位3例,占10%,其中2例二次手术后成功复位,二次手术总计复位率96.6%.术后视力提高者27例,占90%.第二组30例,视网膜复位20例,占66.6%,未复位占10例点33.4%,术后视力提高20例,占66.6%.二者比较视网膜复位率及术后冷冻反应经χ2检验差异有显著意义（P〈0.05）.结论：双目间接检眼镜直视下行视网膜脱离（RD）复位术比传统直接检眼镜下行视网膜脱离（RD）复位术成功率高.     

骨髓间充质干细胞在激光损伤大鼠视网膜下分化的观察

目的鉴定骨髓间充质干细胞(MSC)在体外不诱导的条件下移植于掺钕钇铝石榴石(Nd：Y．AG)激光损伤大鼠视网膜后的定位以及蛋白表达情况。方法体外培养大鼠。MSCs,用荧光染料4′,6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记MSCs,视网膜下移植后分别于10、20、35和50d处死动物,做DAPI荧光观察,并在阳性的连续切片上作神经元核(NeuN),神经元特异性烯醇化酶(NSE),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和角蛋白(CK)免疫组化染色及HE染色。分别于损伤前及损伤后即刻、1-7周检测损伤移植组、损伤组和损伤注射生理盐水组的视网膜电图(ERG)b波分析。结果培养的MSC集落生长迅速,均一性好;DAPI染色观察表明,10d时移植细胞多集中于移植部位周围,但分布散乱;20d时可见阳性细胞分布范围扩大,分布于视网膜视锥、视干细胞层、双极细胞层及节细胞层;到35d阳性细胞范围进一步扩大,且细胞向损伤部位迁移;50d观察损伤范围与35d相比扩大不明显。免疫组织化学染色发现阳性区域的细胞在NeuN、NSE、GFAP和CK的表达有不均一性。检测到的阳性区域视网膜未见到玫瑰花结样结构,但某些区域的细胞排列不整齐,在某些部位有细胞层增生。HE染色表明移植组损伤的恢复好于损伤对照组,ERGb波检测表明5周后损伤移植组的b波水平高于对照组。结论。MSC在视网膜下移植后可与原视网膜结构相融合,检测到的阳性细胞分布于视网膜色素上皮层、视细胞层、双极细胞层及节细胞层,但细胞的排列和蛋白表达仍有紊乱。MSC的移植对激光损伤斑及ERGb波的恢复有促进作用。     

不同日龄视网膜变性大鼠眼底组织结构学观察

目的 探究转基因视网膜退行性变性S334ter-line-3大鼠在出生后不同日龄视网膜组织结构学变化.方法 选择出生后1,9,11,18,30,59 d的S334ter-line-3大鼠,断颈或腹腔注射过量麻药后处死大鼠,摘除双眼球,置入眼球混合固定液及福尔马林液中,左眼行常规石腊包埋,右眼行Histocryl plastic包埋,HE染色,光学显微镜下观察不同时点视网膜组织学结构.结果 出生后第1天,S334ter-line-3大鼠视网膜是一种未发育完善的胚胎型组织,仅有RPE细胞层、祖细胞层,短的内丛状层和神经节细胞层;第9天时其视网膜发育才较完善.第11天时视网膜感光细胞层即开始发生退行性变性,其外核层内可见深染皱缩的凋亡细胞核;第18天时感光细胞层内外节几乎完全消失,外核层变薄,胞核数仅为正常1/2;第30天时,S334ter-line-3大鼠视网膜外层退行性变性已基本完成,仅残留1排感光细胞核层,其外接RPE细胞层,内接视网膜内核层;第59天视网膜结构与第30天基本相同.结论 S334ter-line-3大鼠在出生后随年龄的增长,视网膜外层逐渐发生退行性变性,至出生后第30 d时这种退行性变性基本完成,故出生后30 d的大鼠适合作为视网膜移植中的移植受体.     

多焦视网膜电图评价视网膜脱离手术后的黄斑功能

目的:探讨多焦视网膜电图(MERG)对视网膜脱离(RD)术前、术后的黄斑区客观评价意义。方法:应用Retiscan图像系统对12例RD患者的12只患眼及未网脱眼术前和术后黄斑区进行MERG检测。结果:视网膜脱离术前黄斑区域第1环MERG值与对侧眼对应区域比较P1波振幅密度和N1波振幅较对侧眼相应值均明显降低(P<0.05);术后黄斑区域第1环P1波振幅密度和N1波振幅较术前有明显提高(P<0.05);与对侧眼对应区域比较P1波振幅密度和N1波振幅明显降低(P<0.01)。结论:多焦ERG能客观定量评价RD术前、术后黄斑区的视功能;视网膜解剖复位后黄斑区视功能不能完全恢复;P1波和N1波潜伏期无明显改变。     

Morphological recovery in the reattached retina of the toad Bufo marinus: a new experimental model of retinal detachment

BACKGROUND: The retinal pigment epithelium (RPE) of the toad (Bufo marinus) has been used in many studies as a model for understanding its role and interaction with the neural retina. The toad's retina has been used to establish a new in vitro model of experimental retinal detachment (RD) and replacement . It has been shown that the electrophysiological measures of retinal function recovered following complete RD. The toad was chosen because its RPE is similar to the mammalian RPE . In this report, light microscopy was used to characterize the morphologic changes that occur in the RPE and neural retina following RD/replacement and to correlate these findings with recovery of electrophysiologic function. METHODS: Retinas from Bufo marinus were studied in vitro. The neural retina completely detached from the RPE and then replaced. At various times after replacement, neural retina-RPE tissues were processed for light microscopy. RESULTS: At 30 min after replacement, the subretinal space was greatly expanded, and the apical processes that normally ensheath the rod outer segments were short and no longer contacted the rod outer segments. The RPE was swollen, contained many vacuoles and the apical surface was rounded. By 2 h after replacement, the subretinal space was significantly resorbed and contained many shredded rod outer segments; RPE cells were still swollen, although less. During the next 5-10 h, the number of phagosomes in the RPE cytoplasm increased and the number of shredded rod outer segments in the subretinal space decreased. RPE cells regained their normal size and interdigitation of apical processes and rod outer segments were observed. CONCLUSIONS: These results demonstrate the re-establishment of morphological interactions between the RPE and neural retina within hours following RD/replacement. Morphological recovery coincides with recovery of electrophysiologic parameters. This is a good model to investigate the retinal pigment epithelium (RPE) and neural retina mechanisms involved in retinal adhesion and recovery from retinal detachment.     

实验性低眼压视网膜超微结构的研究

应用光镜和电镜观察了家兔低眼压在不同时间视网膜超微结构的改变。本实验表明低眼压1.33kpa(10mmHg)以下,14天以后视网膜发生病理改变,21天以后则出现严重的病理改变:视网膜神经纤维层萎缩、变薄,神经节细胞以及视杆、视锥细胞的外节破坏,并出现神经胶质细胞增生。电镜下的改变早于光镜。本实验提示我们,对临床上的低眼压,尤其青光眼术后的低眼压,应予以重视。     

中心性浆液性脉络膜视网膜病变的光学相干断层扫描图像

目的评价光学相干断层扫描（Optical Coherence Tomography,OCT）在中心性浆液性脉络膜视网膜病变（Central Serous Chorioretinopathy,CSC）患者急性期与恢复期的形态学特征。方法对临床诊断为单眼首次发病的CSC患者65例,急性期（即出现主观症状4~8周内）与恢复期分别行OCT检查。结果急性期OCT图像特征为累及黄斑中心凹的视网膜神经上皮层的拱形隆起与色素上皮层之间的浆液性弱反射暗区,主要表现为视网膜神经上皮层脱离、神经上皮层和色素上皮层同时脱离、色素上皮脱离三种不同形式。恢复期末次OCT表现为神经上皮层下液体完全吸收,部分患者黄斑中心凹厚度变薄。15例定期追踪观察的OCT均可动态地观察到液体的吸收和测量到神经上皮层脱离高度的减少。结论OCT能显示CSC患者的病变直观的图像并能进行定量的追踪观察,对随访病情的变化有重要的指导意义。     

兔视网膜中度冲击伤后血视网膜屏障改变及其治疗的研究

目的：探讨兔视网膜中度冲击伤后血视网膜屏障的形态变化及超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）和地塞米松的治疗作用，方法：建立兔视网膜中度冲击伤动物模型，采用硝酸镧示踪剂观察伤后血视网膜屏障的改变及药物治疗效果，结果：视网膜中度冲击伤后部分视网膜色素上皮细胞及感光细胞损害，血视网膜并障轻度破坏和示踪剂向视网膜内渗漏，ＳＯＤ及大剂量地塞米松治疗可明显减轻兔视网膜组织的损伤，缩短病程，改善其功能，结论：ＳＯＤ及大剂量     

Rescue of retinal function by macular translocation surgery in age-related macular degeneration and other diseases with subfoveal choroidal neovascularization

Age-related macular degeneration (AMD) is the leading cause of legal blindness among the elderly. In AMD and some other macular diseases, subfoveal choroidal neovascularization (CNV) damages the underlying retinal pigment epithelium (RPE), and because retinal function is dependent on a healthy RPE, vision is markedly reduced by a subfoveal CNV. To treat such CNVs, macular translocation surgery has been performed to move the sensory retina from the damaged RPE to healthier RPE. At present, this surgery is the only possible treatment to improve the visual acuity of patients with subfoveal CNV. Macular translocation surgery involves the detachment of the entire retina from the RPE by a subretinal infusion of fluid and creating a 360 degrees circumferential retinotomy followed by the rotation of the retina. Severe postoperative complications such as recurrent retinal detachment have been reported in about 30% of the cases after macular translocation. To determine the efficacy of this surgery, it is necessary to demonstrate an improvement in macular and overall retinal function objectively as well as subjectively. To this end, we have assessed the changes in visual function by measuring the visual acuity subjectively, and the macular function objectively by focal macular ERGs (FERGs). We shall show that there is an improvement in the FERGs in most patients after retinal translocation surgery but the full-field ERGs were reduced by about 30%. Thus, macular translocation surgery with 360-degree retinotomy may be feasible for macular function, although some degree of peripheral retinal function is lost.     

亚低温对大鼠视网膜色素上皮缺血再灌注损伤保护作用的电镜观察

目的 观察亚低温对缺血再灌注大鼠视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）超微结构的影响，探讨亚低温对大鼠RPE缺血再灌注损伤是否有保护作用。方法 24只SD大鼠随机分正常组、缺血1h再灌注1h组和亚低温缺血再灌注组，每组8只。采用提高眼压所造成视网膜缺血后，恢复眼压形成血流再灌注。用透射电镜观察各组视网膜色素上皮细胞的超微结构。结果 缺血再灌注大鼠RPE微绒毛和质膜内褶逐渐稀疏、低平，甚至脱落；细胞器损害主要表现为线粒体的脱嵴、水肿和内质网的扩张；亚低温缺血再灌注组大鼠RPE超徽结构明显改善。结论亚低温可以减轻缺血再灌注大鼠RPE病变程度，对大鼠RPE缺血再灌注损伤有保护作用。     

亚低温对大鼠视网膜缺血再灌注损伤保护作用的电镜观察

目的 观察亚低温对缺血再灌注大鼠视网膜超微结构的影响,了解亚低温对视网膜缺血再灌注损伤是否有保护作用。方法 ２４只ＳＤ大鼠随机分正常组、缺血再灌注组和亚低温缺血再灌注组,每组８只。采用提高眼压法造成视网膜缺血后,恢复眼压形成血流再灌注。用透射电镜观察各组视网膜的超微结构。结果 缺血再灌注视网膜损伤主要表现在视细胞和节细胞。视网膜视细胞外节膜盘肿胀,排列紊乱,部分膜盘脱落,椭圆体内部分线粒体肿胀,节细胞的胞浆淡而空,节细胞水肿明显,多数线粒体肿胀、空泡化,滑面内质网扩张,部分粗面内质网扩张、脱粒;少数节细胞胞膜破裂、胞浆流失。亚低温缺血再灌注视网膜的视细胞外节膜盘略见疏松,椭圆体内线粒体正常;节细胞胞膜完整,包浆内可见肿胀线粒体,但肿胀较轻,其他细胞器未见明显改变。结论 亚低温可减轻缺血再灌注视网膜病变程度,对视     

复明片对兔视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的研究复明片对兔实验性视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增殖的影响。方法用有色家兔96只设正常对照组(A组),制作视网膜脱离模型后分模型组(B组)、西药对照组(C组)、复明片组(D组)。并于造模后7、14、21 d分别取视网膜组织制备细胞悬液,流式细胞仪检测各兔增殖细胞核抗原(PCNA)在视网膜神经上皮层的表达。结果脱离后视网膜神经上皮层PCNA阳性细胞表达均呈上升趋势,7d后开始下降,且复明片组相较其余各组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论复明片通过恢复视网膜色素上皮与神经上皮之间的接触,阻止RPE的增殖即PCNA的表达。     

Hazardous effects of fried potato chips on the development of retina in albino rats

Objective

To evaluate the hazardous effects of fried potato chips upon the retina of two developmental stages of the albino rats aged 7 and 14 days from parturition.

Methods

Pregnant rats were arranged into two groups: control pregnant rats and consequently their delivered newborns until reaching 7 and 14 days old from parturition and fried potato chips group in which pregnant rats at the 6th day of gestation maintained on diet formed of fried potato chips supplied from the market mixed with standard diet at a concentration of 50% per each till 7 and 14 post-partum. Three fold integrated approaches were adopted, namely, histological, ultrastructural and proteomic analysis.

Results

Histological examination of the retina of the experimental offsprings revealed many histopathological changes, including massive degeneration, vacuolization and cell loss in the ganglion cell layer, as well as general reduction in retinal size. At the ultrastructural level, the retina of experimental offsprings exhibited number of deformities, including ill differentiated and degenerated nuclear layer, malformed and vacuolated pigment epithelium with vesiculated and fragmented rough endoplasmic reticulum, degenerated outer segment of photoreceptors, as well as swollen choriocapillaris and loss of neuronal cells. Proteomic analysis of retina of the two experimental developmental stages showed variations in the expressed proteins as a result of intoxication which illustrated the adverse toxic effects of fried potato chips upon the retina.

Conclusions

It can be concluded that the effect of fried potato chips on the development of retina in rats may be due to the presence of acrylamide or its metabolite.     

激光光凝后视网膜组织光镜观察和免疫组织化学研究

目的观察人视网膜激光光凝后组织病理学和免疫组织化学的改变及其修复,为激光治疗眼底病提供理论基础。方法7例因眼眶恶性肿瘤需作眶内容物剜出的视网膜基本正常的眼球,征得患者合作和签署同意书后,术前1、3和7d用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级光斑光凝视网膜,摘除眼球的视网膜用石蜡包埋、HE染色;再用SP法,经抗体S-100,GFAP、NSE和NF免疫组织化学染色,光学显微镜观察。结果组织病理学：光凝后第1d,Ⅰ级光斑见视网膜色素上皮细胞(rpe)、感光细胞和外核层水肿破坏,细胞数减少;Ⅱ级光斑示rpe、感光细胞和外核层细胞大量溶解破坏;Ⅲ级视网膜全层破坏严重。光凝后第3d,视网膜水肿减轻,rpe细胞和胶质细胞开始增生。光凝后第7d,rpe细胞和胶质细胞大量增生覆盖破坏区。免疫组织化学：光凝后第3d、7d见光斑区S-100和GFAP染色,光凝后1～7d光斑区NSE和NF未染色。结论不同光斑的激光引起视网膜不同程度的破坏,破坏区由增生的rpe和胶质细胞修复,神经元和神经纤维不能再生。