广西1999年医药卫生科研进展(上)

1.CD_3AK/IL-2加中药治疗原发性肝癌的研究:广西肿瘤防治研究所(肿瘤医院)采用正常人外周血单个核细胞(淋巴细胞)经加用抗CD_3单克隆抗体辅助以少量的基因重组人白细胞介素2(IL_2)和植物血凝素(PHA)诱导外周血淋巴细胞,成功地研制出一种能识别并具有抗瘤活性和免疫效应的抗CD_3单克隆抗体激活的杀伤细胞(CD_3AK细胞)。体外研究显示有显著抗肿瘤活性且毒副反应低,对140例中、晚期肝癌治疗观察,CD_3AK细胞 化疗 中药组,其疗效显著高于其他单纯对照组。CD_3AK细胞是继LAK细胞后又一种有效的杀瘤细胞,为治疗中、晚期肝癌提供一种有效手段。 2.癌患者肿瘤细胞、外周血白细胞体内外药敏相关性研究:广西肿瘤防治研究所为改善化疗效果及减少骨髓抑制,进行癌症患者肿瘤细胞、外周     

进展期胃癌患者手术前后免疫状态的对比研究

为阐明胃癌根治术中联合切脾与否对机体整体免疫状态所起的影响,本文对比 AGC 患者R~+_2(保脾)与 R_3(切脾)根治术后外周血中 NK 细胞活性与 T 细胞亚群值的变化。结果表明:(1)与正常人相比,AGC 患者的术前 CD_8~+细胞值明显升高,而 NK 细胞活性、CD~+_3、AD~+_4、CD~+_4/CD~+_8细胞比值均显著降低(P<0.05～0.001)。(2)R~+_2或 R_3患者术后的 NK 细胞、CD_4~+细胞及 CD_4~+/CD_8~+细胞比值均见明显回升(P<0.05～0.005),但 R_3者的CD_8~+细胞值亦同时有明显的下降(P<0.01)。(3)作 R_2~+或 R_3者术后近期或远期 NK 细胞活性与 T 细胞亚群值均无差异(P>0.1～0.5)。提示 AGC 患者的免疫功能因有肿瘤负荷存在而受到明显抑制;切除病灶可对机体正性免疫功能的恢复起决定性作用;如属必要,于 AGC 患者作联合脾脏切除对整体免疫状态并无明显的不利影响。     

LC-CW对人LAK细胞的影响及其机理的研究

提取干酪乳酸杆菌细胞壁成分(LC-CW),研究其对人外周血LAK细胞的影响及其作用机理。结果表明,1.LC-CW可以单独或与IL-2协同,促进PBL的增殖。2.LC-CW可以增强rIL-2诱导的人外周血LAK细胞杀伤Raji细胞的作用,统计学分析有显著意义。但是单独使用LC-CW不能诱导LAK细胞杀伤活性。3.LC-CW可使PBL的CD_4~+,CD_(16)~+抗原表达增加,与IL-2协同,可增加CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+和CD_(25)~+抗原的表达。4.LC-CW可促进PHA-P诱导的IL-2的产生。本研究结果提示LC-CW是一种重要的LAK细胞活性增强因子。     

儿童HBV慢性感染者外周血CD_4~ CD_8~ 淋巴细胞的检测

作者对24例儿童HBV慢性感染者(简称感染组)及16例正常儿童(简称对照组)外周血中CD_4~ 、CD_8~ 细胞进行了检测.结果发现感染组CD_4~ 细胞平均百分率(51.25±4.60%)明显低于对照组(54.56±3.25%),P<0.05;感染组CD_3~ 细胞平均百分率(31.60±2.99%)明显高于对照组(28.19±3.23%),P<0.01,感染组CD_4~ /CD_8~ 比值均数(1.63±0.18)明显低于对照组(1.95±0.23),P<0.01.结果提示,患儿体内细胞免疫功能紊乱,与成人患者表现一致.     

类风湿性关节炎患者外周血淋巴细胞亚群的分析

应用抗人淋巴细胞单克隆抗体(McAb),以间接免疫荧光法(IFA),对32例类风湿性关节炎(RA)患者与32例健康人比较进行了外周血CD_3细胞(OKT_3,总T 细胞,CD_4细胞(OKT_4,T 辅助细胞,T_H),CD_3细胞(OKT_8,T 抑制细胞,T_s)和B 细胞的检测,其结果提示RA 患者的CD_3~+细胞和CD_8~+细胞显著低于健康人,其分别为P<0.001与P<0.05;CD_4~+细胞与CD_4~+:CD_8比值与健康人相似,其均为P>0.05;B 细胞显著高于健康人,为P<0.001。     

索拉菲尼联合细胞因子活化的杀伤细胞对肝癌的杀伤效应研究

目的 探讨索拉菲尼联合细胞因子活化的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)对肝癌细胞的体外杀伤效应.方法 取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-1、IL-2和抗CD_3单抗诱导CIK细胞成熟,流式细胞仪检测培养第1、7、14天的CIK细胞表型.Cell Counting Kit-8试剂盒(CCK-8)检测索拉菲尼、CIK细胞及两者联合对肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤效应,并用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测肝癌细胞的凋亡率.结果 CIK细胞经多种细胞因子诱导培养后,CD_3+CD_(56)~+细胞比例明显上升,14d时CD_3~+CD_(56)~+ 细胞比例达(46.83±2.53)%,与第1天比差异有显著性(P<0.01),细胞量扩增了近1 000倍.索拉菲尼和CIK细胞在适当浓度及效靶比联合应用时表现出杀伤活性增强(P<0.01).索拉菲尼联合CIK细胞诱导的肝癌细胞BEL-7402凋亡率达(70.56±2.58)%,明显高于索拉菲尼组(45.38±1.76)%和CIK组(52.18±8.63)%(P<0.05).结论 索拉菲尼与细胞因子活化杀伤细胞疗法联合应用能明显增强对肝癌细胞的体外杀伤效应.     

再生障碍性贫血患者T细胞亚群与抑制细胞的活性

以抗生物素蛋白-生物素-过氧化酶复合物检测18例再生障碍性贫血(再障)患者外周血T细胞亚群,其中10例同时检测抑制细胞活性。结果表明:再障患者CD_4~+细胞百分率降低,CD_8~+细胞百分率明显增高,CD_4~+/CD_8~+比值明显下降。7/10例STs,显示抑制率低于正常范围,CD_8~+细胞增高,STs示功能下降,两者呈直线负相关系。提示再障的发病机制可能与细胞毒性T细胞作用有关。     

原因不明性习惯性流产细胞免疫功能变化及妊娠后主动免疫治疗

目的:探讨原因不明性习惯性流产(UHA)患者细胞免疫功能变化及妊娠后治疗的疗效。方法:采用流式细胞仪对36例UHA患者和36例正常未孕妇女(NNP)外周血Ca_4、CD_8、CD_(56)细胞进行检测;对168例已妊娠者,120例采用小剂量丈卡淋巴细胞进行主动免疫治疗,48例生理盐水0.8mL作为对照。对治疗组36例检测治疗前后Ca_4、CD_8、CD_(56)细胞的变化。结果:UHA组CD_8细胞百分比低于NNP组(P<0.01);UHA组主动免疫治疗后CD_8细胞百分比较治疗前明显上升(P<0.01);CD_4/CD_8比率及CD_(56)细胞百分比明显下降(P<0.01);治疗组妊娠成功率为93.3％,对照组妊娠成功率为31.3％。两组比差异显著(P<0.01)。结论:UHA患者存在细胞功能紊乱;主动免疫治疗可诱导CD_8细胞增殖,使细胞免疫功能抑制。亦可诱导CD_(56)细胞减少;实验采用的妊娠后主动免疫治疗的有效性。     

藏药药浴对类风湿性关节炎的免疫调整作用的研究

本文研究了藏药浴前后类风湿性关节炎(RA)的免疫功能变化。RA患者藏药浴前类风湿因子(RF)滴度,免疫球蛋白(Ig)G.M.A及CD_4细胞水平较高,但CD_8细胞水平却显著低下。临床资料表明,藏药浴对RA的有效率达94.3％。为了阐明藏药浴治疗RA的机理,我们测定了藏药浴前后的RF滴度;Ig水平;补体C_3;_3H—TdR掺入淋巴细胞转化及CD_8.CD_4.CD_8细胞水平。结果表明:藏药浴后RF滴度下降和转阴者共达70.6%;Ig水平显著降低;CD_4细胞数下降而CD_8细胞水平上升;_3H—TdR淋巴细胞转化刺激指数(SI)明显下降。这提示,RA患者未经藏药浴处理时,其淋巴细胞培养上清液中可能有高浓度的白细胞介素—2促进因子(IL_2—EF)。我们认为藏药浴可通过提高RA的CD_8细胞和降低CD_4细胞水平而达到对该病的免疫调整作用。     

小儿反复呼吸道感染外周血T细胞功能的研究

本文通过测定反复呼吸道感染(RRI)患儿的白细胞介素Ⅱ(IL—2)活性和T细胞亚群的分布,探讨T细胞在小儿RR1中的作用。结果表明,25名RR1患儿IL—2活性与健康儿童对比差异显著(P<0.01);23名RR1患儿外周血中CD_3、CD_4百分率及CD_4/CD_8比值与健康儿童对比有明显差异(P<0.01)。提示T细胞功能异常在小儿RR1发病中起一定作用。     

三七提取物对GES-1细胞及MNNG转化后GES-1细胞增殖的抑制作用

目的:通过细胞培养方法,由研究灌服三七提取物后的犬血清对胃癌前细胞的抑制作用入手,以期找出三七入血后的最佳作用时间点(段).方法:采用永生化的人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞以及N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitroso-guanidine,MNNG)进一步转化GES-1细胞后获得的细胞(以下简称MC细胞)作为胃癌前病变细胞的体外研究模型;以三七水提物给彼格犬一次性灌胃,取给药前的血清、给药后不同时点的血清作为实验药物血清.以四甲基固氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]法分别检测每个采血时间点上不同浓度(8%、4%、2%)含药血清对GES-1及MC细胞作用72 h后的抑制情况,并根据结果找出抑制作用最佳的药物血清时间点.结果:2 h和6 h含药血清刺激下的抑制率最高,两个时间点含8%药物血清的培养基对两种细胞的抑制作用均十分显著,其中2 h 8% GES-1组抑制率为70.8%(P<0.01),2 h 8%MC组抑制率为45.3%(P<0.01); 6 h 8%GES-1组抑制率为88.5%(P<0.01), 6 h 8%MC组抑制率为42.4%(P<0.01).结论:灌服三七提取物后2 h、6 h取的药物犬血清对GES-1及MC细胞的增殖抑制作用最强.     

健脾、补肾与健脾补肾三法对慢性乙型肝炎患者外周血T细胞功能的影响

目的比较健脾法、补肾法和健脾补肾法对慢性乙型肝炎患者外周血T细胞功能的影响。方法收集24例慢性乙型肝炎患者和10例健康人的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),进一步分离提取培养T细胞,采用大鼠健脾、补肾和健脾补肾药物血浆进行干预。检测T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD28+分子的表达。结果3组药物血浆干预后CD4+分子表达率升高(P<0.05),CD8+分子表达率降低(P<0.05),补肾组药物血浆干预后CD3+表达率升高(P<0.05),补肾组和健脾补肾组药物血浆干预后CD28+分子表达率升高(P<0.05)。结论健脾法、补肾法和健脾补肾法均能调节慢性乙型肝炎患者T细胞免疫功能,补肾法对慢乙肝患者T细胞功能的影响更为显著。     

中药更年春含药血清对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的：研究大鼠更年春含药血清对β淀粉样蛋白25-35（amyloid beta protein 25-35,Aβ_（25-35））导致的大鼠肾嗜铬细胞瘤细胞（pheochromocytoma cell,PC12）损伤的抗凋亡作用。方法：通过对去势雌性大鼠灌服中药更年春制备含药血清,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测不同浓度含药血清对PC12细胞存活率的影响;不同浓度Aβ_（25-35）作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病细胞模型,CCK-8法检测含药血清对损伤细胞的保护作用,流式细胞术检测PC12细胞在Aβ_（25-35）和含药血清共同培养下的细胞凋亡率;蛋白印迹法检测各组细胞Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达情况。结果：与空白血清相比,20%含药血清培养PC12细胞24 h或48 h后可促进其增殖（P〈0.05）。Aβ_（25-35）对PC12细胞有细胞毒性,并呈剂量依赖性地降低细胞存活率（P〈0.05）,导致细胞凋亡。CCK-8法和流式细胞术检测均显示,20%更年春含药血清对Aβ_（25-35）诱导的PC12细胞损伤有保护作用（P〈0.05）,其作用效果类似于阳性对照药神经生长因子。蛋白印迹法检测显示,与模型组比较,含药血清组Bax和Bcl-2蛋白表达的比值和caspase-3蛋白表达均降低。结论：更年春含药血清可提高Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率,并减少PC12细胞凋亡。其机制可能与调控Bcl-2家族蛋白的表达而实现抗凋亡作用有关。     

人参蛋白对β淀粉样蛋白1-40和H2O2损伤神经元的保护作用及其机制

目的：探讨人参蛋白(GP)对β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）和过氧化氢（H2O2）诱导神经元损伤的影响,阐明GP对神经元的保护作用及其机制。方法：从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,培养12 d后,分别采用Aβ1-40（30 μmol•L-1）和H2O2 （200 μmol•L-1）诱导神经元损伤,并随机分为模型组（Aβ1-40模型组与H2O2模型组,不加药物）、GP组和GP含药血清组。采用MTT法检测各组神经元存活率;试剂盒法检测细胞培养上清液中一氧化氮合酶（NOS）活性和一氧化氮（NO）水平;Hoechst 33342/PI荧光染色检测细胞凋亡与坏死率。结果：倒置荧光显微镜,Aβ1-40和H2O2处理后,神经元数量明显减少,轴突缩短或消失,
胞体变圆、缩小,大小不等,核固缩,核染色质聚集;Heochst 33342染色呈现高蓝光;部分细胞PI染色呈现高红光。加入GP及其含药血清后,神经元数量增多,胞体增大,细胞核着色形态为圆形、淡蓝色,PI阳性细胞数量减少。MTT法,GP组细胞存活率明显高于模型组（P<0.05或P<0.01）,GP含药血清组与模型组无显著差异（5％GP含药血清组除外,P>0.05）;试剂盒法,GP组细胞培养上清液中NOS活性与NO水平明显低于模型组（P<0.05　或P<0.01）
;Hoechst 33342/PI法,GP及其含药血清组细胞凋亡率低于模型组,以GP组差异更明显（P<0.05或P<0.01）,GP及其含药血清组细胞坏死率与模型组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：GP具有神经保护作用,作用机制与减少NOS活性、降低NO水平、抑制神经元凋亡有关。
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中药浴治疗对特应性皮炎患儿的疗效及对外周CD4~＋ CD25~＋调节性T细胞的作用

目的探讨中药浴治疗特应性皮炎（AD）患儿的疗效及对外周血CD4＋ CD25＋调节性T（Treg）细胞的作用。方法采用症状和皮损计分系统评价中药浴的疗效,并用流式细胞术检测AD患儿（n=56）外周血CD4＋ CD25＋ Treg细胞的百分比。结果中药浴治疗4周后症状和皮损评分均较治疗前明显下降（P〈0.01）,取得较好的临床治愈率（80.4%）。同时外周血CD4＋ CD25＋ Treg细胞的百分比明显升高（P〈0.01）。结论采用中药浴治疗AD患儿取得较好的疗效,可增加患儿外周血CD4＋ CD25＋ Treg细胞的百分比,值得在临床上推广。     

玉津酒对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的探讨玉津酒对机体免疫功能的影响。方法玉津酒0．2ml／d小鼠灌胃给药8d后，测定小鼠淋巴细胞增殖反应及IL-1活性。结果玉津酒可抑制T淋巴细胞增殖反应，降低IL-1活性，与对照组比较差异显著(P<0．01)，B淋巴细胞增殖反应低于对照组，但无显著差异(P>0．05)。结论玉津酒具有抑制细胞免疫功能的作用。     

健脾益气化瘀解毒方含药血清对结肠癌 HCT116细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的探讨健脾益气化瘀解毒方含药血清对人结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关蛋白Bcl-x L和Bax蛋白表达的影响。方法 10%、15%、20%健脾益气化瘀解毒方含药血清处理HCT116细胞12、24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖;不同浓度含药血清处理24、48 h后,碘化丙啶染色法检测细胞周期及凋亡率。蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞内Caspase-3,Bcl-x L和Bax蛋白的表达;对照组均予以相同浓度空白鼠血清及10%胎牛血清(FBS)。结果细胞增殖:12 h后15%、20%含药血清与相同浓度鼠空白组比较,对HC116细胞的抑制作用具有统计学意义(P0.05),72 h对HCT116细胞的抑制作用最强(P0.05),健脾益气化瘀解毒方含药血清对HCT116细胞增殖具有良好的抑制作用,并与时间、浓度呈正相关。细胞周期:10%及15%含药血清组G2期细胞减少,而G1期与S期细胞增多,20%含药血清组G1期与S期细胞减少,而G2期细胞增加,48 h作用明显,而空白鼠血清细胞周期则无明显变化,说明含药血清能阻滞细胞周期,与时间呈正相关。细胞凋亡:与相应浓度对照组比较,含药血清处理24、48 h后,HCT116细胞晚期凋亡率增加,并且随浓度、时间增加凋亡率增加(P0.05),说明含药血清能促使HCT116细胞凋亡,与时间、浓度呈正相关。Western blot检测显示,与空白鼠血清组相比,15%含药血清可上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3、Bcl-x L的蛋白表达(P0.05)。结论健脾益气化瘀解毒方可能通过将结肠癌HCT116细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,通过上调凋亡相关蛋白Bax,下调Caspase-3、Bcl-x L蛋白的表达诱导细胞凋亡。     

特发性血小板减少性紫癜患者自身血小板的细胞毒杀伤机制

目的研究细胞毒T细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK细胞)介导的针对自身血小板的细胞毒作用及其机制。方法(1)将血小板(靶细胞)与自身CD8+细胞或NK细胞(效应细胞)共同孵育后,流式细胞仪检测膜联蛋白V标记阳性血小板的比例。(2)流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者组与正常对照组CD8+细胞膜表面分子CD95配体(FasL)、肿瘤坏死因子(TNFα)和肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体(TRAIL)的表达。(3)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测ITP患者组与正常对照组CD8+细胞颗粒酶B和穿孔素mRNA的表达。结果(1)血小板单独孵育后,膜联蛋白V标记阳性率在ITP患者组(3.1%±0.9%)和正常对照组(3.2%±1.1%)间差异无统计学意义(P>0.05);(2)血小板与CD8+细胞共同孵育后,ITP患者组血小板的膜联蛋白V标记阳性率(7.6%±2.8%)明显高于正常对照组(3.6%±0.9%,P<0.01);(3)血小板与NK细胞共同孵育后,ITP患者组血小板的膜联蛋白V标记阳性率(3.5%±1.1%)与正常对照组(3.6%±1.0%)差异无统计学意义(P>0.05);(4)ITP患者组CD8+细胞膜表面分子FasL、TNFα表达(17.5%±4.4%、11.9%±4.9%)均高于正常对照组(8.9%±1.5%、6.4%±2.1%,均P<0.05);ITP患者组CD8+细胞膜表面分子TRAIL表达(16%±4%)与正常对照组(14%±3%)间差异无统计学意义(P>0.05);(5)ITP患者组CD8+细胞颗粒酶B、穿孔素mRNA的表达(2.20%±0.15%、2.47%±0.39%)均高于正常对照组(1.63%±0.22%、1.80%±0.31%,均P<0.05)。结论CTL参与了对ITP患者自身血小板的杀伤作用;NK细胞对自身血小板无明显的杀伤作用。凋亡机制和胞质颗粒依赖机制是CTL杀伤血小板的具体途径。     

原因不明性复发性流产91例主动免疫治疗效果分析

目的探讨原因不明性复发性流产(URSA)行主动免疫治疗的疗效及免疫细胞含量的变化特征。方法应用荧光染色和流式细胞技术,分别对2011年1月至2012年8月在安徽医科大学第一附属医院产前诊断中心行淋巴细胞主动免疫治疗的91例URSA患者治疗前后淋巴细胞坏死率及CD3、CD4、CD8及NK细胞比率进行测定;并随访其妊娠结局。结果 79例成功妊娠至12周胎盘形成以后,12例在孕12周以前再次流产,成功率86.81%;治疗后CD3、CD4和NK细胞比例明显下降,CD8及淋巴细胞坏死率显著上升,差异具有统计学意义(P0.05)。结论淋巴细胞主动免疫治疗对于URSA具有显著的疗效,NK细胞的降低有利于妊娠成功。     

通脉宁对AngⅡ及LPC诱导的血管平滑肌细胞内钙超载的影响

目的观察通脉宁全方及拆方药物血清对AngⅡ及LPC诱导的血管平滑肌细胞内钙超载的影响.方法组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,应用血清药理学研究的方法,AngⅡ 10-6mol/L、LPC 10-8mol/L作为刺激因子,制备通脉宁全方、益气拆方、活血拆方药物血清.采用Fluo-3染色荧光探针标记测定钙离子荧光强度.结果通脉宁全方及拆方药物血清对AngⅡ及LPC诱导的VSMC内钙超载具有明显的干预作用,且通脉宁全方组的干预作用明显优于益气拆方组及活血拆方组.结论通脉宁药物血清抑制AngⅡ及LPC诱导的VSMC增殖与部分阻断AngⅡ及LPC细胞内的信号转导途径有关,这可能是通脉宁抑制VSMC增殖的作用途径之一.