健脾消癌方通过PI3K/Akt信号通路抑制结肠癌血管生成的研究＊

目的 观察结肠癌HCT116细胞健脾消癌方的条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响，从PI3K/Akt生物轴调控角度探讨其作用机制。方法 培养HCT116细胞，细胞设3组：对照组，健脾消癌方组（加入15%健脾消癌方含药血清）及人参皂苷Rg3组；制备HCT116细胞健脾消癌方条件培养液（分组及制备方法见实验方法），用条件培养液干预HUVEC（脐静脉内皮细胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells），Matrigel基质胶法检测HCT116细胞健脾消癌方条件培养液对HUVEC小管形成的影响。随后采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HCT116细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、VEGF（血管内皮生长因子，Vascular endothelial growth factor）蛋白表达。最后在结肠癌HCT116荷瘤小鼠中验证健脾消癌方对肿瘤生长速度的影响，并经瘤组织VEGF蛋白表达、CD31免疫组化染色检测肿瘤内血管生成情况。结果 模型组HUVEC细胞管腔形成较空白血清组显著增加（P<0.05）；健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组较模型组HUVEC细胞管腔形成显著减少（P<0.01）。p-Akt和VEGF蛋白表达水平模型组高于空白血清组（P<0.05），健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组显著低于模型组（P<0.01）；PI3K、Akt蛋白表达量组间差异无统计学意义。与对照组比较，模型组荷瘤小鼠肿瘤体积显著性增大，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积显著性增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 健脾消癌方可抑制肿瘤的血管生成和生长，其作用机制可能与PI3K/Akt生物轴调控VEGF表达有关。     

疏肝健脾解毒方治疗乳腺增生症40例疗效观察

目的:观察疏肝健脾解毒方治疗乳腺增生症的临床疗效。方法:将80例乳腺增生症患者随机分为治疗组与对照组各40例。治疗组采用疏肝健脾解毒方治疗,对照组采用三苯氧胺治疗。结果:总有效率治疗组为80.0%,对照组为75.0%,2组比较,差异无统计学意义(P0.05);不良反应发生率治疗组为7.5%,对照组为35.0%,2组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:疏肝健脾解毒方能有效治疗乳腺增生,且无明显毒副反应。     

鼻咽癌干细胞增殖特征及细胞周期相关蛋白表达水平研究

目的　研究鼻咽癌干细胞的增殖特征并初步探讨其分子机制。方法　采用无血清悬浮培养法从鼻咽癌细胞CNE2和5-8F获得鼻咽癌干细胞CNE2-SC、5-8F-SC，分别采用细胞存活率分析计数器、细胞平板克隆形成试验观察鼻咽癌干细胞的增殖特性和克隆形成能力，Western blot法检测细胞周期相关蛋白表达水平。结果　鼻咽癌干细胞比其来源的鼻咽癌细胞增殖速度显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。鼻咽癌干细胞克隆形成率显著高于其来源鼻咽癌细胞（P＜0.01），但肿瘤干细胞克隆显著小于其来源细胞。与普通鼻咽癌细胞比较，鼻咽癌干细胞的细胞周期蛋白CylinD1、CylinD3及细胞周期调控蛋白CDK2、CDK4、CDK6的表达水平显著下调（P＜0.01）。结论　鼻咽癌干细胞比其来源的鼻咽癌细胞生长增殖缓慢，可能与其细胞周期蛋白和周期蛋白依赖激酶表达水平下调有关。     

蒋益兰治疗直肠癌术后排便功能异常经验

介绍蒋益兰教授治疗直肠癌术后排便功能异常的经验。蒋教授认为本病病机为手术攻伐伤及正气,脾胃虚衰、中阳下陷而湿热余毒未尽,治疗当以健脾益气、升阳举陷、兼清湿热为主。根据患者具体证型及症状,以四君子汤临症加减,配合中医外治法治疗,并举验案1则以证疗效。     

健脾消癌方对结肠癌外泌体诱导HFL1活化成CAFs的影响

目的:探讨健脾消癌方对人结肠癌细胞(HCT116)来源外泌体诱导正常人胚肺成纤维细胞(HFL1)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化的影响。方法:以13.1 g·kg~(-1)的健脾消癌方灌胃SD大鼠以制备含药血清,采取超高速离心法分别提取含10%无外泌体血清培养的HCT116细胞外泌体及含20%健脾消癌方含药血清培养的HCT116细胞外泌体,纳米颗粒跟踪分析仪(Zetaview)检测外泌体的粒径分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的标志蛋白凋亡转接基因2互作蛋白X(Alix),热休克蛋白70(HSP70),肿瘤易感基因101蛋白(TSG101),荧光显微镜观察HFL1对细胞膜染色试剂盒(PKH67)标记的外泌体的摄取情况;将HFL1细胞分6组:空白组,转化生长因子-β1(TGF-β1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体4 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体4 mg·L~(-1)组,均干预48 h,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白和mRNA的表达水平。结果:Zetaview检测粒径分布主要集中在50～100 nm,结合标志蛋白Alix,HSP70和TSG101的表达证实其为外泌体,HFL1细胞与外泌体共孵育后,荧光显微镜下可看到大量外泌体被HFL1细胞所摄取;与空白组比较,TGF-β1组和TGF-β1联合HCT116外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA表达水平升高(P0.05);与TGF-β1联合HCT116外泌体组比较,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA水平下降(P0.01)。结论:人结肠癌细胞外泌体联合TGF-β1可诱导HFL1活化成CAFs,健脾消癌方可通过影响α-SMA的表达水平而降低HFL1的活化能力从而达到拮抗结肠癌肺转移的作用。     

疏凿饮子加减治疗早期恶性腹腔积液65例

腹腔积液是恶性肿瘤患者临床上常见的并发症，笔者2012年10月-2013年8月应用疏凿饮子加减治疗早期恶性腹腔积液患者65例，疗效满意，现报告如下。     

蒋益兰教授从“虚、瘀、毒”论治大肠癌经验

蒋益兰教授认为"脾虚、瘀积、岩毒"并存是大肠癌发病的基本病机特点,瘀毒未尽合并正气不足是大肠癌术后复发转移的主要病机;强调分期论治,以健脾益气法贯穿全程;重视身心合调和内外合治;灵活应用虫类药及活血化瘀药;以自拟"健脾消癌方"应用于临床20余年,取得了较好的临床疗效。     

外泌体在大肠癌中的研究进展

大肠癌是发病率最高的消化道恶性肿瘤之一,总体5年生存率不高,且近年来随着饮食结构等的改变,大肠癌在我国发病率逐年上升,严重威胁着人类生命健康,故研究大肠癌发生、发展的机制及有效防治方法有重大意义。外泌体是一类由细胞分泌的直径约30~100 nm的有被小泡,表面携带特定分子,可通过受体-配体结合方式或通过内吞作用被内在化,或与靶细胞膜融合,将囊泡中的物质释放至靶细胞胞液中,诱导靶细胞生理状态发生改变,在细胞与细胞间的交流中发挥重要作用。在肿瘤组织中,外泌体作为肿瘤微环境的重要组成部分,可通过促进肿瘤新生血管形成、促使结直肠癌细胞上皮-间质转化、引导肿瘤细胞器官特异性转移、诱导结直肠癌细胞耐药及参与抗肿瘤免疫效应等影响结直肠癌的发展,对结直肠癌外泌体进行深入研究,有利于寻找防治结直肠癌的有效方法。同时,由于外泌体自身通常包含多种特异性分子,有望作为理想的肿瘤标志物用于结直肠癌的诊断及预后判断。中医药治疗以"整体观念"和"辨证论治"为基本原则,可通过多环节、多途径、多靶点起效,在降低大肠癌的复发转移率、改善大肠癌患者预后方面发挥着重要作用,已成为我国大肠癌综合治疗的重要组成部分。外泌体对大肠癌发生、发展过程影响的广泛性,与中医药防治大肠癌的多环节、多途径、多靶点性相契合,以其为切入点,或许可更全面地研究中医药防治大肠癌的作用机制。     

康艾注射液对老年晚期消化系统肿瘤患者的疗效和安全性

目的探讨康艾注射液联合最佳支持治疗用于老年晚期消化系统肿瘤患者的临床效果和安全性。方法采用随机、多中心、平行对照的临床试验法抽取5个试验分中心2013年6月至2014年12月收治的142例老年晚期消化系统肿瘤患者,采用SAS6.12软件模拟产生随机数字表分为康艾组81例及对照组61例。对照组采用最佳支持治疗,康艾组采用康艾注射液联合最佳支持治疗。对比两组临床疗效、生活质量及不良反应。结果经过21 d的治疗后,康艾组临床症状总改善率(88.88%)明显高于对照组(67.21%,P0.05);康艾组治疗前后躯体功能、角色功能、情绪功能、认知功能、社会功能及总健康状况出现明显变化(P0.05);康艾组治疗前后疲倦、恶心与呕吐、疼痛、气促、失眠、食欲尚失、腹泻、经济困难评分出现明显变化,呈现明显下降趋势,治疗后恶心与呕吐、疼痛、失眠、食欲尚失、腹泻、经济困难评分明显低于对照组(P0.05);康艾组治疗后卡氏评分(KPS)提高、稳定、下降率明显优于对照组(P0.05);康艾组、对照组中位无疾病进展生存期(PFS)分别为264(95%CI:115～531)d、142(95%CI:81～280)d,康艾组、对照组中位总生存期(OS)分别为425(95%CI:185～602)d、294(95%CI:142～483)d,两组差异无统计学意义(P0.05);治疗结束后总胆红素、中性粒细胞比异常比例康艾组显著小于对照组(P0.05)。结论康艾注射液治疗可有效改善老年晚期消化系统肿瘤患者临床症状,提高生活质量,安全性高且患者依从性好。