表皮生长因子及染料木黄酮对垂体瘤细胞增殖的调节

12例垂体瘤做原代细胞培养,检测了表皮生长因子(EGF)及染料木黄酮(Genistein)对肿瘤细胞3H-TdR掺入率及酪氨酸激酶产物表达的影响.研究表明EGF使大部分功能性腺瘤及所有非功能性腺瘤细胞的3H-TdR掺入率明显增加,酪氨酸激酶活性增强,而Genistein能抑制EGF的作用使所有瘤细胞的3H-TdR掺入率下降.提示表皮生长因子对垂体瘤细胞有明显的增殖刺激作用;Genistein能消除表皮生长因子的细胞增殖刺激作用,抑制肿瘤细胞增生,对垂体瘤治疗有重大意义.     

表皮生长因子及染料木黄酮对垂体瘤细胞增殖的调节

12例垂体瘤做原代细胞培养，检测了表破生长因子（EGF）及染料木黄酮（Genistein）对肿瘤细胞^H,TdR掺入率及酷氨酸激酶产物表达的影响，研究表明EGF使大部分功能性腺瘤及所有非功能性腺瘤细胞的^3H-TdR掺入率明显增加，酷氨酸激酶活性增强，而Genistein能抑制GF的作用使所有瘤细胞的^3H-TdR掺入率下了,提示表皮生长因子对垂体瘤细胞有明显的增殖刺激作用，Genistein能消除表皮生长因子的细胞增于刺激作用，抑制肿瘤细胞增生，对垂体瘤治疗有重复大意义。     

表皮细胞生长因子对培养表皮角朊细胞DNA合成的影响

目的 :选择培养表皮角朊细胞时添加表皮细胞生长因子 ( EGF)及小牛血清的最适浓度。方法 :添加不同浓度的 EGF及小牛血清 ,测定 3 H- Td R掺入量。结果 :添加 2 0μg· L-1EGF时3 H- Td R掺入量明显高于添加 5和 1 0 μg·L-1EGF时。结论 :2 0 μg·L-1EGF、2 0 %小牛血清为培养表皮角朊细胞的最适浓度。     

异鼠李素作用后HeLa细胞bcl-2基因表达的变化

目的　本研究采用人宫颈癌细胞 (He L a细胞株 ) ,观察异鼠李素诱导下 He L a细胞 bcl- 2和 bax基因表达的改变以研究其抗癌作用的机理。方法　体外培养的人宫颈癌细胞 (He L a)经 2 0μg/ml异鼠李素处理后 ,作光电镜观察 ,集落形成实验 ,3H- Td R掺入实验和流式细胞术检测。结果　异鼠李素作用后 ,He L a细胞的生长明显受到抑制 ,细胞形态出现凋亡特征 ,集落形成率和3H- Td R掺入率显著低于对照组 ,流式细胞仪检测显示异鼠李素处理组的细胞被阻止在G2 /M期 ,细胞凋亡率升高 ,bcl- 2癌基因表达降低 ,bax癌基因表达明显增加。结论　异鼠李素可能通过影响癌基因表达 ,从而抑制 He L a细胞增殖 ,达到抑制肿瘤的作用。     

两种酪氨酸激酶抑制剂对结肠癌细胞增殖的影响

目的:研究两种酪氨酸激酶抑制剂对体外培养的HT-29结肠癌细胞生长的影响及可能机制.方法:用MTT比色法观察不同浓度的Genistein及Tyrphostin AG1478对体外培养的结肠癌细胞生长的影响;免疫细胞化学法检测两种酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKIs)对肿瘤细胞PCNA表达的影响;Western blot技术分析Genistein及Tyrphostin AG1478对结肠癌细胞ERK-1及pERK表达的影响.结果:不同浓度的Genistein及Tyrphostin AG1478对HT-29结肠癌细胞的增殖均具有抑制作用,并具有良好的量-效关系.免疫细胞化学检测表明,Genistein及Tyrphostin AG1478明显下调HT-29细胞PCNA表达.蛋白质印迹检测发现,两种酪氨酸激酶抑制剂不抑制ERK表达,但能够抑制ERK磷酸化.结论:酪氨酸激酶抑制剂Genistein及Tyrphostin AG1478能有效抑制HT-29结肠癌细胞生长,其作用机制与抑制肿瘤细胞ERK表达及磷酸化有关.     

EGF诱导结肠腺癌HCT-116细胞神经内分泌分化实验

目的 利用表皮生长因子 (EGF) 及表皮生长因子受体 (EGFR) 抑制剂西妥昔单抗 (Cetuximab) 诱导和阻断诱导结肠腺癌HCT-116细胞神经内分泌分化 (NED) , 探讨诱导和阻断诱导后肿瘤细胞生物学变化特点及相关因素.方法 通过HE和免疫组化染色, 观察肿瘤细胞裸鼠种植成瘤后及NED诱导前后肿瘤细胞形态变化特点和免疫组化表达情况;低密度平板克隆实验检测肿瘤细胞克隆形成率;流式细胞术检测肿瘤细胞生长周期;MTT法绘制肿瘤细胞生长曲线.结果 结肠腺癌HCT-116裸鼠种植后成肿瘤细胞明显异型;经EGF及EGFR作用前后HCT-11肿瘤细胞形态无明显变化;EGF组克隆形成率增加 (P>0.05) , 肿瘤细胞Cg A、Ki-67、Bcl-2表达增强, 增殖活性增高, EGF作用后肿瘤细胞与其它各组相比差异有显著统计学意义 (P<0.01) .而CEA、CA19-9、CDX2、COX2、Syn、NSE在各组表达差异无统计学意义 (P>0.05) .结论 EGF可诱导结肠腺癌细胞HCT-116 NED;肿瘤细胞增殖活性增加、抗凋亡能力增强;EGFR可阻断EGF诱导HCT-116 NED及相应生物学特性变化;而CEA、CA19-9、CDX2、COX2对肿瘤细胞NED和增殖凋亡无明显调节作用.     

EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响

目的：探讨EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响及其机制。方法：对体外培养的人舌鳞癌细胞株用重组人表皮生长因子（rhECF）作为刺激因子,采用半定量RT-PCR和Western Blot方法测定癌细胞中MMP-3mRNA和蛋白含量变化。结果：与未处理组相比,用不同浓度（0．1,1,10ng／m1）EGF处理舌鳞癌细胞后MMP-3表达随浓度的增加而增加,酪氨酸激酶抑制剂Genistein（10μg／ml）能够抑制EGF对癌细胞MMP-3表达的诱导作用。结论：EGF通过酪氨酸激酶通路诱导口腔癌细胞MMP-3的表达。     

RNAi 技术抑制乳腺癌细胞表皮生长因子受体表达的在体实验研究

目的 探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染乳腺癌细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据.方法 (1)建立裸鼠肿瘤动物模型,计算成瘤率.(2)体外转染乳腺癌细胞,常规动物接种,测量肿瘤体积和动物重量,计算肿瘤抑制率.(3)采用免疫组化和Western blotting技术测定肿瘤组织的表皮生长因子受体蛋白水平,采用Real-time PCR检测表皮生长因子受体基因水平,采用ELISA检测动物血清及肿瘤抽提蛋白中EGF含量.结果 MDA-MB-231、ZR-75细胞成瘤率依次为30.00%、88.89%,MDA-MB-231细胞的成瘤能力明显弱于ZR-75细胞.ELISA检测结果证实dsRNA-表皮生长因子受体可将血清及肿瘤组织抽提蛋白中的EGF含量分别降低16.77%、12.59%.Real-time PCR结果表明dsRNA-表皮生长因子受体可将表皮生长因子受体基因表达下调21.05%.结论 (1)采用体外化学合成的siRNA结合阳离子脂质体可有效在体转染乳腺癌细胞.(2)在体实验中RNAi效应持续的时间明显长于体外实验.(3)针对表皮生长因子受体基因序列设计的siRNA可作为极具开发前途的抗肿瘤新药,其在体实验中触发RNAi可能的作用机制尚需进一步深入探讨.     

选择性环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞生长的影响

目的　观察选择性环氧合酶 - 2 ( COX- 2 )抑制剂 (美洛昔康、塞来昔布、罗非昔布 )对人胃癌细胞株SGC790 1生长的影响以及罗非昔布对人胃癌裸鼠移植瘤生长的抑制效应。方法　采用 3H-胸腺嘧啶核苷 ( 3H- Td R)掺入法了解细胞的增殖 ;用免疫组化检测细胞增殖核抗原 ( PCNA)及细胞 COX- 2的表达 ;用 TUNEL 染色法检测细胞凋亡。建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型 ,给予罗非昔布 8周 ,观察肿瘤大小、COX- 2及 PCNA表达情况。结果三种选择性 COX- 2抑制剂均较阿司匹林更有效抑制体外培养的胃癌细胞 3H- Td R掺入 ,3H-胸腺嘧啶掺入值与药物浓度呈负相关。美洛昔康、塞来昔布、罗非昔布对胃癌细胞 3H-胸腺嘧啶掺入的 IC50 分别为 1.18× 10 - 7mol/ L、1.68× 10 - 8mol/ L、4.3 9× 10 - 9mol/ L。经 1× 10 - 5m ol/ L 的上述三种药物作用 2 4h,SGC790 1细胞凋亡指数分别为 19.8%± 1.8%、2 4.6%± 1.2 % 3 1.2 %± 2 .2 %。 COX- 2抑制剂的选择性越高 ,凋亡指数也显著升高 ( P<0 .0 1)。罗非昔布对裸鼠胃癌原位移植瘤的抑瘤率为 93 .9% ;肿瘤组织的 COX- 2、PCNA表达均较对照组明显下降。结论　COX- 2抑制剂的选择性越高 ,对胃癌生长抑制作用越强。罗非昔布可成为胃癌综合治疗的重要药物之一     

MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

目的: 研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在葡萄糖(GS)和/或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其可能的调控机制. 方法: 实验以平滑肌细胞蛋白合成速率和蛋白含量为平滑肌细胞增殖的指标,以平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率表示细胞蛋白质合成速率,通过3H-胸苷(3H-TdR)反映平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖情况;并通过给予PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处理,观察它们对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响. 结果: ① AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;AngⅡ HG处理平滑肌细胞3H-胸苷掺入率显著增高. ② AngⅡ增加3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制;AngⅡ HG增高3H-胸苷掺入的作用也可被PD098059所抑制. ③ AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率明显增高;HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率增加;AngⅡ HG处理平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率显著增加. ④ AngⅡ增加3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制;AngⅡ HG增加3H-亮氨酸掺入的作用可显著被PD098059所抑制. 结论: 应用MAPK的特异性抑制剂PD098059抑制血管平滑肌细胞的增殖,证明MAPK激活在GS和/或AngⅡ导致平滑肌细胞增殖反应中有重要作用.     

胰岛素上皮生长因子对消化系统肿瘤细胞株增殖的影响

目的　通过体外实验研究 ,探讨胰岛素、上皮生长因子 (EGF)对人体消化系统 4种肿瘤细胞株 ,即人胃腺癌细胞株 30 5 1 80、人胰腺癌细胞株PaTu 890 2、人结肠腺癌细胞株SW 480和HT 2 9增殖生长的影响。方法　配置各细胞株生长所需的介质液 ,其中加入不同浓度胰岛素 (0 2 ,2 ,2 0 ,2 0 0 ,2 0 0 0mu/ml)或胰岛素 EGF(1ng/ml) ,置各细胞株的一定数量细胞于相应介质液中培养 2 4h ,用 3H Thymidine掺入法检测细胞增殖状况。 结果　 30 5 1 80在胰岛素或胰岛素 EGF的介质液中迅速增殖 (P <0 0 5 ) ,且与胰岛素呈浓度依赖关系 ;PaTu 890 2在胰岛素浓度为 0 2 ,2 ,2 0mu/ml时增殖明显 ,在同样胰岛素浓度 EGF的介质液中也表现出相似的效应 (P <0 0 5和P <0 0 1) ,但在其它浓度时无显著变化 ,SW 480的增殖仅在胰岛素浓度为 2 ,2 0 ,2 0 0mu/ml时明显 (P <0 0 5 ) ;而对HT 2 9细胞株 ,胰岛素或胰岛素 EGF对其增殖的刺激作用均不大 (P <0 0 5 )。在本实验中 ,未见到胰岛素和EGF对细胞增殖的明显协同效应。结论　人体消化系统的肿瘤对胰岛素和EGF促细胞增殖作用可因其细胞株的不同反应各异。     

1,25—（OH）2D3对人垂体GH瘤细胞GH分泌的影响

在15例体外培养的人垂体生长激素(GH)分泌瘤细胞上研究1,25-(OH)_2D_3对GH分泌的调节作用,发现14例瘤细胞的GH分泌对血清生理范围(40～80pg/ml)的1,25-(OH)_2D_3有兴奋和抑制两种反应,其中9例出现GH分泌明显的抑制反应,2例呈明显兴奋反应,3例在培养不同天分别出现兴奋和抑制不同形式的反应。1,25-(OH)_2D_3使垂体GH瘤GH分泌的抑制平均为对照的63.1±3.3％,GH分泌的增加达对照值的164.0±6.2％.本研究结果表明,血清生理范围的1,25-(OH)_2D_3对大多数体外培养的人垂体GH瘤的GH分泌有直接调节作用,这种作用包括抑制与兴奋两种,其中抑制作用更为常见。     

表皮生长因子通过上调环氧酶2促进人食管鳞癌细胞HKESC-1的增殖

目的研究表皮生长因子(EGF)促进人食管鳞癌细胞增殖的机制。方法氚标记的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖。酶免疫法检测前列腺素(PGE2)的释放。免疫印迹法检测环氧酶1(COX-1),环氧酶2(COX-2),PGE2受体亚型EP1和EP2的蛋白表达。结果 EGF上调人食管鳞癌HKESC-1细胞COX-2蛋白表达,而不影响COX-1蛋白表达。EGF还能刺激HKESC-1细胞释放PGE2,并上调PGE2受体亚型EP2的蛋白表达。非选择性COX抑制剂吲哚美辛和COX-2选择性抑制剂SC-236均可完全阻断EGF刺激的PGE2释放。这两种COX抑制剂也都能够抑制EGF的促细胞增殖作用。结论 EGF对HKESC-1细胞的促增殖作用,一方面是通过诱导COX-2蛋白的表达从而促进PGE2的释放;另一方面通过上调EP2受体的蛋白表达。     

生长因子和雌激素对大鼠垂体前叶细胞增殖活性及催乳素？…

目的 观察外源性生长因子和雌激素对离体正常大鼠垂体前叶细胞增殖活性及催乳素基因表达的影响,并探讨生长因子与雌激素作用的关系。方法 应用无血清原代培养的大鼠垂体前叶细胞,分别采用荧光染色细胞ＤＮＡ的激光扫描共聚焦显策镜扫描,以及原位杂交方法,观察了１７β－雌二醇,表皮生长因子及转化生长因子β１对大鼠垂有叶细胞增殖活性和催乳素基因表达的影响。结果 生长因子或雌激叶细胞增殖活性和催乳素基因表达的影响。结     

酸性成纤维细胞生长因子在卵巢癌中的表达及其信号传导途径

目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)在卵巢癌发生发展中的作用及其信号传导机制。方法　应用逆转录 聚合酶链反应技术 (RT PCR)和Western印迹方法对 40例上皮性卵巢癌组织aFGF及其受体FGFR1的表达进行了分析 ;并以不同浓度的aFGF和酪氨酸蛋白激酶 (TPK)抑制剂 genistein诱导卵巢癌细胞株CAOV3细胞 ,利用 [γ 32 P]ATP掺入外源性底物的方法 ,液体闪烁测定蛋白激酶C(PKC)及细胞外信号调节激酶 (ERK)的活性。结果　aFGFmRNA和FGFR1mRNA在上皮性卵巢癌组织中的半定量检测结果分别为 0 981± 0 1 30和 1 0 4 7± 0 1 4 8,与正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤相比 ,差异有显著意义 (P <0 0 5) ,且在Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌中的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期 (P <0 0 5) ;Western印迹检测见上皮性卵巢癌组织中aFGF和FGFR1条带均深于正常卵巢组织 ;随着aFGF浓度的增加 ,CAOV3细胞PKC及ERK活性随之升高 ,与aFGF浓度呈剂量依赖效应 ;Genistein抑制细胞内PKC及ERK活性 ,与 genistein浓度亦呈剂量依赖效应。 结论　aFGF与上皮性卵巢癌的发生、发展、浸润呈正相关 ,其受体具有TPK活性 ,TPK激活后可进一步激活PKC和ERK ,进一步证明PKC及ERK确是TPK的下游信号分子     

先天性肾上腺发育不良症基因-1对垂体瘤细胞自噬和增殖的调控作用

目的：探讨先天性肾上腺发育不良症基因-1（DAX -1 ）对垂体瘤（MMQ）细胞自噬和增殖的作用。方法：利用基因芯片技术筛选垂体瘤与正常垂体之间的差异基因群,并通过PubMed数据库基因组分析侵袭性垂体瘤和非侵袭性垂体瘤之间DAX -1 的表达差异;将siRNA转染至MMQ细胞敲低DAX -1 的表达（DAX-1 KD组）,DAX -1 过表达质粒转染至MMQ细胞提高DAX -1 的表达（DAX-1 OE组）,正常对照组（NC组）,采用CCK-8和平板克隆实验检测DAX -1 对MMQ细胞增殖的影响;通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测自噬相关基因ATG5 、ATG7 和ATG12 的表达;通过蛋白质印迹（Western blot）法和免疫荧光法检测DAX -1 对自噬标记蛋白LC3的表 达影响,通过裸鼠移植瘤实验观察敲减DAX -1 对MMQ细胞生长和自噬的影响。结果：基因芯片结果提示,和正常垂体组比,垂体肿瘤中DAX -1 基因表达显著下调,并且DAX -1 在侵袭性垂体瘤中比非侵袭性垂体瘤表达低（P ＜0.05）;与NC组MMQ细胞比,DAX-1 KD组MMQ细胞增殖水平升高,而DAX-1 OE组MMQ细胞增殖受抑且 卡麦角林和溴隐亭的药物敏感性增高（均P ＜0.05）;与NC组MMQ细胞比,DAX-1 KD组MMQ细胞自噬水平降低（P ＜0.05）;裸鼠移植瘤实验显示,与NC组MMQ细胞移植瘤比,DAX-1 KD组移植肿瘤生长速度更快（P ＜0.05）。结论：DAX -1在垂体瘤中表达降低,且DAX -1表达降低后促进垂体瘤发展,DAX -1可能是垂体瘤治疗的潜在靶点。     

染料木黄酮抑制血管内皮生长因子诱导的血管内皮细胞活化及蛋白激酶K活性

目的 探讨染料木黄酮(genistein,Gen)抗肿瘤血管生成的分子机制.方法 实验以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为研究对象,通过锥虫蓝不相容试验测定Gen对HUVECs的细胞毒性,然后利用Caspase-3活性分析试剂盒测定Caspa...     

TGF-β和EGF对人分泌中期子宫内膜间质细胞MMP-9的影响

目的：观察转化生长因子-β（TGF-β）和表皮生长因子（EGF）对人分泌中期子宫内膜间质细胞（ESC）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法：体外培养ESC,分离、纯化后的ESC以1×105个/孔接种于96孔板,加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液。24h后换无血清的DMEM/F12培养液,每孔200μL,分别加入TGF-β和EGF,终浓度均为2.5、5.0和10.0ng/mL,培养48h后通过ELISA法测培养液中MMP-9的含量。结果：与对照组比较,实验组随着TGF-β浓度的增加,ESC分泌的MMP-9明显下降（P〈0.05,P〈0.01）;而随着EGF浓度的增加,ESC分泌的MMP-9则显著上升（P〈0.05,P〈0.01）,且二者的变化具有剂量依赖性。结论：TGF-β和EGF可能通过调节人子宫内膜间质细胞MMP-9,而参与胚胎植入过程。     

碱性成纤维细胞生长因子及其单克隆抗体对侵袭性垂体腺瘤裸鼠皮下移植瘤的作用

目的 探讨用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及其不同浓度单克隆抗体(bFGF-Mab)的方法对裸鼠入侵袭性垂体腺瘤移植瘤血管生成和肿瘤生长的影响及可能机制.方法 建立50只入侵袭性垂体腺瘤裸鼠皮下移植瘤模型,按区组随机排列方法分成bFGF组,30、20、...