比较全血DNA提取法适用单核苷酸多态性分析

目的 比较两种提取冰冻全血基因组DNA的方法，即分离白细胞法和裂解红细胞法所获得基因组DNA的质量。方法 分别测定所获DNA的效率和纯度，同时，笔者用PCR／SNP敏感性分子开关技术。对两种方法获得的模板DNA进行单核苷酸多态性（single—nucleotide polymorphism，SNP）分析。结果 结果显示分离白细胞法DNA产量与纯度均高，裂解红细胞法获得的DNA产量、纯度相对较低；PCR／SNP敏感性分子开关检测表明：分离白细胞法和裂解红细胞法制备的DNA模板，均可在体外进行有效的PCR扩增。但分离白细胞法获得的目的DNA带特异性凸显，而裂解红细胞法获得的目的带特异性相对较差。结论 预先分离纯化白细胞是从冰冻全血中获得较高纯度DNA和有效提高DNA产量的重要操作步骤。     

高效提取血细胞DNA的体会

随着分子生物学技术的迅速发展,实验方法也在逐步提高。基因组DNA的提取是分子生物学实验的最基本技术,DNA产量与纯度的高低可直接影响以后的实验结果。在提取DNA的过程中掌握住几个重要环节,可以得到纯度很高的DNA。血细胞提取DNA的主要步骤分为溶解红细胞裂解白细胞,释放DNA氯仿抽提乙醇漂洗DNA存放。在上速提取过程中,经过我们的实践摸索,需要注意以下几个问题:(1)溶血必须彻底,第一次离心后,沉淀物中还存有红细胞,一定重复使用溶血剂,再离心,直到沉淀物发灰白色为止。(2)蛋白酶消化时间要足,使白细胞全部裂解,有时因DNA释放,…     

改良盐析法提取全血基因组DNA的影响因素研究

目的 观察红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间对改良盐析法提取全血基因组DNA的影响.方法 改良盐析法提取全血基因组DNA时,分别采用不同的红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间.使用流式细胞术检测红细胞裂解后的细胞总数及死细胞比例,紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物.结果 红细胞裂解时间从10 min延长至120 min,死细胞比例随时间延长而增加,但细胞总数、DNA产量与纯度无明显变化;采用异丙醇沉淀法纯化DNA得到的DNA产量与纯度均显著高于使用DNA分离柱纯化的DNA; DNA干燥时间从120 min缩短至30 min,既不影响DNA的产量与纯度,也不影响后续PCR扩增实验.结论 改良盐析法提取全血基因组DNA时,红细胞裂解时间可延长至120 min,DNA干燥时间可缩短至30 min,异丙醇沉淀法优于DNA分离柱纯化的DNA.     

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

DNA提取方法的比较及改良

用于处理DNA检材以分离和提取DNA的方法很多。不同的方法有不同的优缺点,其适用的分析技术也不同。在法医检案的实际应用过程中经常会遇到不少的问题,如微量检材的DNA提取,既要纯度高,又要回收率高;常用的几种方法单独进行时则很难达到这样的要求。本文就几种常用的方法进行了改良及它们效果比较。     

直接扩增技术在接触性检材 DNA检验中的应用

目的：将DNA直接扩增技术引入案件现场不同的接触性检材的检验中,构建有效的接触性DNA的生物检材的检验方法。方法采用剪取、擦拭等方法对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶、吸管及残缺指纹等检材进行取样,采用DNA直接扩增技术获得短串联康复序列（short tandem repeat ,STR）分型。结果 DNA直接扩增技术在5种不同检材中检出的基因型均为单一个体来源,其对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶和吸管、残缺指纹检材的成功率分别为90％、100％、70％、90％和60％,平均成功率在70％以上。分别对5种检材多处取点样品进行平行扩增,手套、烟蒂检材3个点位成功率均在90％以上;饮料瓶、吸管3个点位的成功率达80％～90％;衣服3个点位的成功率在60％～70％;残缺指纹3个点位的成功率在50％～60％。结论 DNA直接扩增技术对接触性DNA检材检验具有较高的有效应,其结果可靠,重复性强。     

现场DNA物证证据的提取、保存及检验应用进展

目的为了给刑事案件诉讼提供准确可靠的证据,在办理凶杀、强奸等多种刑事案件时,经常需要对各种来源于人体的生物检材进行个人同一认定检验。方法利用法医DNA技术对现场提取的血液(斑)、精液(斑)、唾液(斑)、人体组织、骨骼等检材进行检验,为案件侦破提供科学依据或线索;利用DNA数据库技术更大的发挥法医DNA技术在许多案件侦破中的应用,还可以利用法医DNA技术对灾难性事件(案件)中确定死亡人数、对受害者的身源进行鉴别。结果结论利用DNA物证可以为案件侦查和诉讼提供更多证据     

外周血细胞DNA、RNA及血红蛋白同时提取法

采用淋巴细胞分离液分离外周血中的有核细胞。经细胞裂解液处理，上清提取RNA，沉淀提取DNA，用分离液分离所得红细胞沉淀制备血红蛋白溶液，经对抽提物质量进行评价，发现3种提取物质量均高，本法能从少量外周血中同时分离DNA、RNA及血红蛋白，高效易操作，值得推广。     

犯罪现场中生物检材的发现和提取与案件侦破

随着DNA检验技术的发展，对微量生物检材的检验越来越成为可能。同样，随着犯罪手段的日益智能化，微量生物检材在重大案件中的作用愈来愈重要，甚至对整个重大案件起着决定性作用。因此，如何有效地发现和提取生物检材特别是微量的生物检材显得愈为重要。     

用Chelex-100方法提取肋软骨DNA105例

目的研究尸体所处环境、死亡时间的条件下,用Chelex-100方法提取肋软骨DNA。方法对案件中不同条件腐败尸体，采用Chelex-100方法提取肋软骨DNA，进行PCR扩增及STR分型。结果提取肋软骨均可获得STR分型。结论肋软骨是法医检案中的一类具有实用价值的检材。     

非人类DNA在法庭科学中的应用

随着法庭科学的发展,来自于动植物的非人类DNA逐渐应用于民事或刑事案件的调查中。动物DNA检验主要包括犯罪现场生物检材的种属鉴定和个体识别,动物之间的亲子鉴定,走失宠物的认领,肉类的检验检疫等。植物DNA检验用于联系嫌疑人与犯罪现场,寻找毒源等。由于动植物DNA检材常见且不易被发现、清除,因此不仅可为案件的侦破提供线索,有时甚至成为关键证据。但非人类DNA的检验在国内尚未普遍开展,应引起法医学者的重视。     

口腔粘膜脱落细胞DNA多态性分型检测在法医学应用的初步研究

目的研究各类口腔粘膜脱落细胞的微量生物性捡材中DNA提取和检验的方法,初步论证牙刷等载体作为法医物证检材的可能性。方法分别采用Chelex-100法、有机萃取法、联合抽提法三种方法提取口腔粘膜脱落细胞载体的样本DNA,进行CTTv四个STR位点单步复合扩增和两步级联扩增两种STR-PCR方式的扩增及各位点的等位基因检测。结果实验样本中,除了1例牙刷和2例牙签未能STR位点的正确分型外,其余各无关个体口腔粘膜脱落细胞载体均可以得到与标准血痕阳性相同的STR基因型。结论根据检材的PCR相对模板DNA量,选择适宜的DNA多态性检测分型方法,各类常见的含有口腔粘膜脱落细胞检材可以进行DNA检测分型,这类检材在法医检案中具有应用价值。     

全血基因组DNA的快速纯化

目的探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法微量全血通过红细胞裂解后，得到白细胞。再通过白细胞裂解，高盐离子去除蛋白，异丙醇沉淀即可得到高纯完整的全血基因组DNA。结果该方法简单快速，得到的产品产率高(6.94μg／300μl全血)，纯高度(A260/A280=1．82，A206/A230=2．08)，完整性好(单一条带)。结论该方法快速、高效。不仅缩短了实验时间，而且还提高了产品质量，可完全满足实验室快速分析的要求。     

乳糜血清对聚合酶链反应DNA模板制备的影响

目的探讨乳糜血清对聚合酶链反应DNA模板制各的影响。方法对29例具有乳糜血清的慢性乙型肝炎患血清，分别进行两种方法处理。A法按照常规试剂集盒方法裂解提取DNA，B法在提取DNA前用异丙醇抽提甘油三酯，弃去抽提液加裂解液100pl，沉淀用70％的乙醇100μl漂洗两次。结果A法裂解提取DNA后发现10例HBVDNA阳性。B法提取DNA后发现26例HBVDNA阳性。结论乳糜血清可能会影响HBVDNA模板的制备。在模板制备前抽提甘油三酯，并用乙醇多次洗涤模板DNA可避免从乳糜血清中检测HBVDNA造成的假阴性．     

全血基因组DNA的提取和纯化方法比较

目的探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法分别采用表面活性剂裂解法、传统酚抽提法、加热法分别制备DNA，分析各种方法提取DNA的产量、纯度，以及方法本身的优缺点、费用等，同时我们进行RAPD标记实验以比较纯化的DNA在PCR上应用的效果。结果表面活性剂裂解法简单快速，其制备的DNA产率、纯度明显高于传统酚抽提法，但其完整性不如后者。加热法快速制备的全血基因组DNA作为模板虽然纯度差，但仍可用于PCR，并得到满意的检测结果。同一份标本采用不同方法提取的DNA作为模板进行的RAPD标记实验，其多重PCR产物进行分离产生的DNA图谱基本一致。结论3种全血DNA纯化方法均可满足不同的实验要求。     

3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较

目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法．方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增．结果（1）商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性目的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段;（2）碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段．结论碱液加热裂解法是3种方法中最简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取．     

一种快速高效提取全血基因组DNA的实验方法

目的 建立一种快速的从少量全血中高效提取基因组DNA的实验方法 .方法 首先低渗处理红细胞,收集白细胞,然后裂解白细胞释放核蛋白,在去污剂及乙酸钾的作用下使核酸与蛋白分离,最后沉淀、纯化DNA.扩增管家基因(β-globin)观察提取效果.结果 该法收集的DNA纯度(OD360/OD280)为(1.82±0.4);每毫升外用血可得DNA19.0～37.0μg,片段大小10～13kb;β-giobin基因扩增电泳带清晰.结论 该法提取DNA简便、高效和经济,易于各级分子生物学实验室使用.     

微型磁笔提取DNA的应用

目的探索用微型磁笔进行DNA快速提取以及电泳鉴定的研究。方法取人血0.1ml或菜叶0.1g，磁珠悬液0．25ml，选择性结合DNA、洗涤、洗脱、电泳即得。不需离心，不用大量检材，用微型磁笔在离心管中微量操作，分离纯化DNA只需30min，电泳只需50min。结果可以观察到清楚明亮的DNA条带，使大、中学师生同时掌握了正规DNA提取和琼脂糖电泳两项技能。结论本方法是对细胞生物学、医学遗传学实验的一大改进，对于DNA的提取是一大进步，它操作筒捷直观、速度及准确率大为提高。     

轮叶党参中的齐墩果酸对紫外线照射所诱发DNA损伤的保护作用

[目的]探讨轮叶党参中分离到的齐墩果酸(OA)对紫外线照射所诱发DNA损伤的保护作用.[方法]取大鼠采用给脾细胞行紫外线照射的方法制作DNA损伤模型,分别给予10,20,40,80mg/L的OA;给DNA损伤大鼠脾细胞加入40mg/L齐墩果酸,培养30,60,90,120min,用荧光分光光度法检测DNA裂解率.[结果]给大鼠脾细胞行紫外线照射后,DNA裂解率明显增高(P<0.01),当OA终质量浓度分别为10,20,40,80mg/L时,紫外线照射之前用OA预处理2h可降低紫外线照射所致的DNA裂解率,DNA裂解率随OA加入量的增加而逐渐降低,当OA剂量超过20mg/L后DNA裂解率下降缓慢.单纯紫外线照射组和加入OA组的DNA裂解率均随着培养时间的延长而逐渐下降,当培养时间达到60min后,两组DNA裂解率间差异有统计学意义,加入OA组的DNA裂解率明显低于单纯紫外线照射组.[结论]齐墩果酸可保护紫外线照射所诱发的DNA损伤,且促进断裂DNA的修复过程.     

磁珠法和Chelex法在微量或腐败检材DNA检验中的效果对比及探讨

在日常的法医物证工作中,常规检材,如血样、口腔拭子等我们用Chelex法提取DNA能够得到比较理想且完整的实验结果,而像牙刷、饮水瓶等微量检材和腐败的尸体检材,如腐败尸体指甲等亦十分常见,为使法医物证工作能顺利展开,一般可以使用ML-超微量磁珠法DNA提取试剂盒提高DNA检验水平,本次实验主要探讨磁珠法和Chelex在微量或腐败检材DNA检验中的效果差异。