异香豆素对老年痴呆小鼠β淀粉样蛋白的影响

目的 建立老年痴呆(AD)小鼠模型,探讨异香豆素对AD小鼠的治疗作用及其机制.方法 将50只昆明小鼠分为:对照组、模型对照组、低剂量异香豆素治疗组、中剂量异香豆素治疗组和高剂量异香豆素治疗组,每组各10只;水迷宫实验检测各组小鼠的逃避潜伏时间和平台跨越次数;放射免疫法测定细胞培养上清Aβ含量.结果 老年痴呆小鼠模型组与对照组对照比较,逃避潜伏时间出现显著性的延长(P<0.01),平台跨越次数显著性的减少(P<0.01).异香豆素治疗后老年痴呆小鼠的逃避潜伏时间和平台跨越次数得到显著性的改善(P<0.05).对照组、模型对照组、低剂量异香豆素治疗组、中剂量异香豆素治疗组、高剂量异香豆素治疗组脑组织Aβ的表达水平分别为(1.01±0.44)pg/ml、(12.89±3.21)pg/ml、(10.45±2.06)pg/ml、(7.18±1.92)pg/ml、(4.07±1.24)pg/ml,各组之间具有统计学差异(P<0.01).结论 异香豆素具有抗AD小鼠痴呆的活性,减少AD小鼠脑组织Aβ的生成是其主要的作用机制.     

慢性脑缺血对APP/PS1双转基因小鼠行为学及脑组织形态学的影响

目的:探讨慢性脑缺血对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠的行为学以及脑组织形态学的影响。方法:将20只3月龄APP/PS1 AD模型小鼠随机分成2组,每组10只,对其中一组采用改良的双侧颈总动脉狭窄术,另一组双侧颈总动脉未结扎小鼠为假手术对照组。术后1个月分别采用Morris水迷宫、组织学和免疫组化染色,检测模型组和假手术组小鼠行为学的改变、海马区神经细胞形态学的改变、海马区神经细胞内Neu N和APP及Aβ的表达变化。结果:行为学实验结果:(1)可视平台下,2组小鼠找到平台的时间(t=1.31,P=0.19)及搜索的平均路程(t=0.04,P=0.97)无显著差异;(2)隐蔽平台下,脑缺血模型组小鼠(26.39±1.37)找到平台的时间较假手术对照组(20.19±1.19)明显延长(t=3.44,P=0.00);(3)空间探索实验中,经过平台的次数,脑缺血模型组小鼠(3.11±0.37)较对照组(4.25±0.34)明显减少(t=2.24,P=0.03)。HE染色:脑缺血模型组小鼠海马内神经细胞明显肿胀、细胞排列紊乱。免疫组化结果:脑缺血模型组小鼠海马内Neu N阳性神经元数量(93.40±10.44)较对照组(156.20±24.16)显著减少(t=2.39,P=0.04);而APP-阳性神经元(t=2.35,P=0.047)、Aβ40-阳性神经元(t=2.54,P=0.04)以及Aβ42-阳性神经元(t=2.476,P=0.04)较假手术组明显增加。结论:本实验新建立的改良双侧颈总动脉狭窄术能导致小鼠慢性脑缺血;慢性脑缺血可加速APP/PS1双转基因AD模型小鼠的病理进程。     

姜黄素对APPswe/PS1△9转基因小鼠空间学习与海马HSP70蛋白表达的影响

目的 探讨姜黄素对APPswe/PS1△9转基因小鼠海马热休克蛋白70(HSP70)表达及对APPswe/PS1 A9转基因小鼠空间学习能力的影响,为AD治疗提供新的理论依据.方法 实验动物分为野生小鼠组、APP/PS1转基因小鼠组、姜黄素干预组、槲皮素(HSPs抑制剂)和姜黄素共同干预组.5月龄转基因小鼠腹腔注射姜黄素150 mg·kg-1·d-1,连续4周,槲皮素和姜黄素共同干预组采用给予150mg· kg-1·d-1姜黄素腹腔注射,同时给予槲皮素50mg· kg-1 ·d-1腹腔注射,连续4周.Western blot测定APP/PS1小鼠海马区HSP70蛋白的表达,Morris水迷宫测试APP/PS1小鼠学习记忆能力,主要观察指标为小鼠找到平台的潜伏期和穿越平台次数.结果 Western blot结果显示,APP/PS1转基因小鼠海马中HSP70蛋白的表达与WT小鼠相比明显降低(OD值:APPswe/PS1△9:0.31±0.14;WT:1.14±0.51,P＜0.01).小鼠腹腔注射给予姜黄素后HSP70的表达较APP/PS1转基因鼠明显升高(OD值:姜黄素:0.91±0.20,P＜0.05).腹腔注射姜黄素或同时给予槲皮素,连续4周后,Morris水迷宫测试结果显示,与WT小鼠相比,APP/PS1小鼠找到平台的潜伏期明显延长[APPswe/PS1 △9:(82.3±6.8)s;WT:(29.5±4.4)s]、穿越平台的次数显著降低[APPswe/PS1 △9:(2.7±1.1)次;WT:(5.2±2.1)次].姜黄素给药后小鼠找到平台的潜伏期较APP/PS1小鼠明显缩短[(47.7±7.6)s],穿越平台的次数增多[(4.5±1.9)次],而小鼠同时给予姜黄素和HSPs抑制剂槲皮素后,找到平台的潜伏期较姜黄素单独给药明显延长[(69.7±9.1)s],穿越平台的次数减少[(3.2±1.6)次].结论 姜黄素可促进APP/PS1转基因小鼠海马HSP70蛋白的表达,同时可提高APP/PS1转基因小鼠的空间学习能力,这可能与姜黄素提高HSP70表达有关,结果提示姜黄素对于AD可能具有潜在的治疗价值.     

丙戊酸钠对雌雄APP/PS1双重转基因小鼠行为学及老年斑的影响

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)对不同性别APP/PS1双重转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的空间学习记忆能力及脑内老年斑(SP)的沉积的影响.方法 3月龄APP/PS1双重转基因AD模型小鼠20只,雌雄各半,随机分为VPA治疗组和生理盐水对照组(每组10只).VPA(30mg·kg-1·d-1)腹腔注射4周后进行Morris水迷宫实验,以检测各组小鼠的空间学习记忆能力;行为学实验结束后,取脑组织进行免疫组化染色以观察老年斑的沉积.结果 行为学实验结果显示:可视平台下,两组小鼠找到平台的时间、搜索的平均路程以及雌雄小鼠的游泳速度均差异无显著性(P＞0.05);隐蔽平台下,VPA治疗组小鼠找到平台的时间及搜索的平均路程较对照组明显缩短(P＜0.01),雄性AD模型鼠无论是治疗组还是对照组找到平台时间和路径均短于雌鼠(P＜0.05);免疫组化结果显示,VPA治疗组雄性小鼠大脑皮质及海马区域的老年斑数量[(11.23±3.78)个]较同性别对照组[(28.17±3.46)个]明显减少(t=14.67,P＜0.01),且比雌性VPA治疗组老年斑[(20.36±4.21)个]也有明显减少(P＜0.05).结论 VPA能显著改善雌性和雄性AD模型小鼠空间学习记忆障碍,减少脑内老年斑的沉积,该改变具有性别差异.

Abstract：

Objective To investigate whether valproic acid (VPA) affect spatial learning memory and senile plaques in the APP/PS1 double transgenic AD mouse model of different gender. Methods Twenty 3-month old APP/PS1 double transgenic AD mice,male and female mouse evenly,were randomly divided into VPA-treated and saline-treated groups ( 10 for each group). 30 mg· kg-1 · d-1 of VPA and the same amount of saline were peritoneally injected into mice for 4 weeks. Morris water maze was conducted to check the effect of VPA on the capability of spatial learning and memory of AD mouse model. Immunohistochemical staining was used to examine the effect of VPA on the morphological changes in the brains of mice. Results Visible platform test showed that VPA-treated and saline-treated mice had similar escape latency (P＞0.05) and path length (P＞0.05) ,the swimming speed between male and female mice had no difference (P＞0.05). Hidden platform test showed that VPA treated mice had a significantly shorter latency (P＜0.01) and path length (P＜0.01) to reach the platform compared with saline-treated mice. Meanwhile, both in VPA-treated and control groups, the male mice had a shorter correlation escape latency and path-length than female mice had(P＜0.05 ). Immuohistochemical staining showed that the number (11.23±3.78) of senile plaques (SP) in the cerebral cortex and hippocampus of VPA-treated male mice were notably decreased than that(28.17 ±3.46) in the control group ( t= 14.67, P＜0.01 ),furthermore,the number of SP in the cerebral cortex and hippocampus of VPA-treated male mice was significantly reduced,as compared with which (20.36 ±4.21)in the VPA-treated female mice(P＜0.05). Conclusion VPA can significantly lower formation of SP, and remarkably improve the capability of spatial learning and memory of APP/PS1 transgenic mice,which have gender difference.     

锌指蛋白A20对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用研究

目的 探讨锌指蛋白A20对小鼠实验性内毒素性肝损伤的保护作用.方法 以内毒素血症小鼠为动物模型,采用尾静脉注射A20表达质粒的方法 ,观察A20转基因处理对内毒素血症小鼠肝组织内TNF-α、IL-1β水平以及肝脏病理损伤的保护.结果 A20组LPS注射24h后肝组织匀浆TNF-α表达水平为(923.2±11.97)pg/ml、IL-1β为(996.43±15.32)pg/ml,与LPS对照组比较,t检验显示P值均＜0.05,A20组与LPS对照组之间TNF-α和IL-1β水平差异有统计学意义.病理分析提示A20组24h后小鼠肝脏病理损伤明显较LPS对照组轻.结论 A20能够明显抑制内毒素血症小鼠肝组织的炎症反应,减轻肝组织炎症损伤.     

CAP患者CURB-65评分与临床指标、IL-1β、IL-4的相关性研究

目的分析社区获得性肺炎(CAP)患者CURB-65评分与其临床指标、IL-1β、IL-4之间的相关性。方法研究中共收入80例研究对象,其中21例健康志愿者作为对照组;CAP病例共59例,其中轻症CAP25例,重症CAP34例。所有患者入院后采用CURB-65进行评分,常规行动脉血气分析,计算氧合指数,同时采用ELISA检测降钙素原(PCT)、IL-1β、IL-4。结果轻症肺炎组与健康对照组比较,其PaO2[(99.5±13.4)mmHgvs(105.1±9.4)mmHg]及PCT水平[(1.62±1.65)pg/mlvs(0.04±0.01)pg/ml]差异均无统计学意义(P0.05);轻症肺炎组患者CURB-65评分(0.9±0.8vs0)、FiO2[(26.6±7.8)%vs21%、IL-1β[(118.79±32.29)pg/mlvs(9.33±2.51)pg/ml]、IL-4[(41.24±6.52)pg/mlvs(18.46±4.05)pg/ml]高于健康对照组,氧合指数(406.59±126.03vs500.45±44.82)则低于健康对照组(P0.05);重症肺炎组CURB-65评分(3.5±0.7vs0.9±0.80)、FiO2[(41.9±12.0)%vs(26.6±7.8)%21%)、PCT[(11.96±7.59)pg/mlvs(1.62±1.65)pg/ml(0.04±0.01)pg/ml]、IL-1β[(200.13±48.27)pg/mlvs(118.79±32.29)pg/ml(9.33±2.51)pg/ml]、IL-4[(55.41±13.71)pg/mlvs(41.24±6.52)pg/ml(18.46±4.05)pg/ml]明显高于轻症肺炎组及健康对照组,而PaO2[(74.4±13.1)mmHgvs(99.5±13.4)mmHg(105.1±9.4)mmHg]及氧合指数(204.14±110.10vs406.59±126.03500.45±44.82)则明显低于轻症肺炎组及健康对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。CURB-65评分与氧合指数呈负相关(r=-0.833,P0.05),而与PCT(r=0.900)、IL-1β(r=0.893)、IL-4(r=0.838)均呈正相关(P均0.05)。结论 CAP患者的CURB-65评分与患者氧合指数、炎症反应指标呈明显相关性,可以作为评估重症肺炎的一种简易手段。     

烟碱对AD大鼠星形胶质细胞活性变化的影响

目的 探讨烟碱对Alzheimer病(AD)的防治作用及机制.方法 将Aβ25-35注射于大鼠海马部位建立AD和烟碱AD动物模型,通过Morris水迷宫试验评定大鼠学习记忆功能,采用免疫组化、ELISA方法,分别检测大鼠海马部位GFAP免疫染色阳性星形胶质细胞形态和细胞因子IL-1β含量变化.结果 在平台定位航行试验中,正常对照组、烟碱AD组潜伏期随训练天数的增加而逐渐缩短,而AD组潜伏期无明显缩短的变化趋势.正常对照组在平台象限的游泳时间百分比和游泳距离百分比分别为64.94%、52.36%,烟碱AD组分别为54.67%、50.41%,AD组分别为22.34%、26.92%,烟碱AD组与AD组相比差异显著.AD组大鼠海马部位GFAP免疫染色阳性星形胶质细胞数较烟碱AD组大鼠明显增多.注射Aβ25-35后第1天、第7天、第15天,AD组大鼠海马IL-1β含量为(84.98±15.47)pg/mg、(92.58±17.01)pg/mg、(77.14±18.81)pg/mg;烟碱AD组海马IL-1β含量为(49.74±15.56)pg/mg、(41.46±12.37)pg/mg、(32.96±9.68)pg/mg.AD组海马IL-1β含量较烟碱AD组大鼠明显升高,差异显著.结论 烟碱具有抑制Aβ对星形胶质细胞的激活,使星形胶质细胞分泌炎性细胞因子IL-1β减少,改善AD大鼠认知功能的作用.     

淫羊藿黄酮对阿尔茨海默病小鼠模型学习记忆能力的影响

目的 观察淫羊藿黄酮对β-淀粉样肽(Aβ)拟阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力的影响.方法 将ICR小鼠随机分为正常组、假手术组、模型组,淫羊藿黄酮小剂量(0.03 g/kg)、中剂量(0.1 g/kg)、大剂量(0.3 g/kg)组.灌胃给药14d后,行右侧脑室注射Aβ1-40造模,继续给药7 d,进行Morris水迷宫、避暗实验和自主活动实验,观察小鼠学习记忆能力.结果 Aβ1-40侧脑室注射模型小鼠出现学习记忆障碍.淫羊藿黄酮中、大剂量组在Moms水迷宫实验中逃避潜伏期[(40.12±4.15)s.(34.99±5.49)s]和游泳距离[(648.36±88.42)cm,(781.57±104.41)cm]明显缩短.与模型组逃避潜伏期(65.45±5.15)s,游泳距离(1142.66±96.80)em比较,差异具有显著性(P<0.01),在避暗实验中可延长模型小鼠的潜伏期[(255.40±11.00)s,(257.46±19.50)s]并降低其错误次数[(0.80±0.14)次,(0.77±0.17)次],与模型组潜伏期[(196.27±25.47)s],错误次数[(1.47±0.31)次]比较,差异有显著性(P<0.05).在自主活动实验中,各组之间差异无显著性(P>0.05).结论 淫羊藿黄酮能明显提高Aβ脑室注射致AD小鼠模型的学习记忆能力.     

高强度聚焦超声联合单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷自杀基因治疗对VX2荷瘤兔免疫力的影响

目的探讨高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIUF)联合单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)治疗对VX2荷瘤兔的肿瘤免疫耐受和特异性抗肿瘤免疫的影响。方法将40只实验兔按随机数字表法分为对照组、肿瘤组、HIFU组和联合治疗组,每组10只,其中HIFU组给予HIFU单独治疗,联合组给予HIFU和HSV-tk/GCV联合治疗。于治疗后第13天流式细胞术检测各组兔外周血CD4+CD25+Treg(Treg)细胞的数量变化情况,ELISA法检测外周血血浆IL-10,TGF-β的浓度,MTT法检测兔脾淋巴细胞对VX2肿瘤细胞的体外杀伤活性。结果肿瘤组外周血Treg细胞数量[(8.30±0.69)%]、IL-10水平[(67.82±4.52)pg/ml]和TGF-β水平[(6.55±0.45)μg/ml]相对于对照组[(5.30±0.45)%、(54.58±3.53)pg/ml、(5.51±0.27)μg/ml]均显著升高(P<0.01);HIFU组Treg细胞数量[(7.00±0.56)%]、IL-10水平[(60.32±4.70)pg/ml]、TGF-β水平[(6.22±0.19)μg/ml]明显低于肿瘤组(P<0.01,P<0.05);联合治疗组Treg细胞数量[(6.40±0.72)%]和TGF-β水平[(5.86±0.31)μg/ml]低于HIFU组(P<0.05),而IL-10水平[(58.79±4.42)pg/ml]变化则无统计学意义(P>0.05)。杀伤实验显示HIFU组和联合治疗组脾淋巴细胞对VX2肿瘤细胞的杀伤活性分别为(31.62±3.09)%、(29.48±2.68)%,明显高于对照组[(13.94±2.45)%]和肿瘤组[(12.00±2.96)%](P<0.01),但联合治疗组和HIFU组的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HIFU联合HSV-tk/GCV治疗后,宿主肿瘤免疫耐受情况得到改善,特异性抗肿瘤免疫力增强。     

α7-N型乙酰胆碱受体激动剂对Aβ诱导痴呆小鼠学习记忆的影响

目的 观察给予N型乙酰胆碱受体α7亚型激动剂DMXB对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默(AD)小鼠学习记忆的影响.方法 模型组和治疗组小鼠采用侧脑室立体定位注射Aβ25-35的方法 诱导AD模型,治疗组小鼠同时连续11d腹腔注射N型乙酰胆碱受体α7亚型激动剂DMXB,术后第5天开始Morris水迷宫行为学检测,术后1个月病理学甲苯胺蓝染色检查海马区神经元的形态学变化.结果 与对照组相比,模型组动物表现为海马CA1区神经元丢失明显,Morris水迷宫实验中模型组动物的逃逸潜伏期[(55.07±17.86)s]比对照组[(34.88±10.40)s]显著延长(P<0.05),穿过原平台位置次数[(1.80±1.93)次],NE象限探索距离百分比[(25.16±8.56)%]和时间百分比[(24.66±5.94)%]显著低于对照组([(5.10±3.54)次],[(43.30±5.11)%].[(36.89±7.61)%])(P<0.05);治疗组海马CA1区神经元丢失减少,行为学各项指标(逃逸潜伏期[(30.38±12.46)s],穿过原平台位置次数[(3.30±1.49)次],NE象限探索距离百分比[(48.84±8.56)%]和时间百分比[(41.61±9.25)%])均较模型组显著地改善(P<0.05).结论 Aβ25-35能诱导AD小鼠模型的建立,腹腔注射DBMX可改善此模型小鼠的空间学习记忆能力.     

慢病毒介导APP695基因RNAi对体外培养的APP695转基因小鼠皮质神经元β淀粉样蛋白分泌的影响

目的 探讨慢病毒介导RNA干扰(RNAi)抑制APP695基因表达对体外培养的APP695转基因小鼠皮质神经元细胞分泌β淀粉样蛋白(Aβ)的影响.方法 构建靶向APP695基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒表达质粒(pFU-GW-iRNA),进行酶切和测序鉴定.慢病毒表达质粒与包装质粒(pHelper 1.0和Helper 2.0)共转染293T细胞,获得病毒浓缩液并测定滴度.使用APP695-shRNA慢病毒载体感染体外培养的APP695转基因小鼠皮质神经元,设定为慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组,另设阴性对照病毒感染(NC)组、未经病毒感染(CON)组.采用实时荧光定量PCR检测APP695基因mRNA的表达,Western印迹检测APP695蛋白的表达,采用Elisa检测Aβ40和Aβ42的生成.结果 PCR扩增和测序结果证实,APP695 shRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为5×108 TU/ml.使用慢病毒载体感染体外培养的APP695转基因小鼠皮质神经元,实时荧光定量PCR检测APP695-RNAi组APP695基因mRNA的抑制率为76.70%,与NC组和CON组相比差异有统计学意义(P＜0.001).Western印迹结果显示蛋白水平表达下降与定量PCR一致.Elisa检测干扰72 h后APP695-RNAi组、NC组、CON组Aβ40的分泌分别为(184±15)ng/L、(647±30)ng/L、(656±40)ng/L.APP695-RNAi组与NC组和CON比较差异均有统计学意义(均为P＜0.001);APP695-RNAi组、NC组、CON组Aβ42的分泌分别为(19.2±1.9)ng/L、(67.6±6.0)ng/L、(68.6±7.0)ng/L.APP695-RNAi组与NC组和CON比较差异均有统计学意义(均为P＜0.001).结论 慢病毒载体介导的APP695基因RNA干扰可以有效抑制痴呆小鼠皮质神经元细胞Aβ40和Aβ42的分泌.     

中药活性成分复方对AD转基因模型小鼠海马Aβ的影响

目的：：观察淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病（AD）APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠模型海马β淀粉样蛋白（Aβ）表达的影响。方法：6月龄雄性APPswe/PS1ΔE9双转基小鼠20只,随机分为模型组和复方组,6月龄雄性C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组。用药三个月后,采用免疫组化法检测各组小鼠海马Aβ的表达情况。结果：与正常对照组相比,模型组Aβ蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与模型组相比,复方组Aβ蛋白表达明显降低（P＜0.05）。结论：应用淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以降低AD模型小鼠海马Aβ的表达,从而缓解AD中枢神经系统功能衰退。     

白介素-1β对原代培养海马神经元毒性的研究

目的 探讨IL-β对体外培养的海马神经元活性及合成和分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的影响.方法 采用SD新生鼠进行海马神经元原代培养.培养7d的细胞以细胞免疫化学法枪测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,计算阳性细胞率.实验分IL-β为0ng/ml的正常组和IL-β为5 ng/ml、10ng/ml、20ng/ml 3个实验组,进行海马神经元无血清培养48 h.采用甲基噻唑基四唑(MTT)试验检测细胞活性,ELISA法检测培养上清BDNF的含量.结果 NSE细胞免疫化学鉴定显示阳性细胞达到90%以上;IL-1β降低体外培养的海马神经元活性,各剂量组按浓度在590nm波长处检测OD值为(0.5585±0.2407; 0.4295±0.1401; 0.4191±0.1050),与正常组(0.9462±0.2972)比较,差异具有显著性(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.01 ANOVA);IL-1β降低体外培养的海马神经元合成和分泌BDNF水平,各剂量组显著BDNF含量分别是[(8.65±0.71)pg/ml,(8.90±0.35)pg/ml,(7.90±0.35)pg/ml],与正常组(12.40±1.77)pg/ml比较差异具有显著性(均P<0.05 ANOVA).结论 IL-1β可导致体外培养海马原代神经元的损伤,其机制可能与海马神经元合成和分泌BDNF的减少有关.     

异氟醚对缺锌APP/PS1转基因阿尔茨海默病模型小鼠海马神经元凋亡的影响

目的：研究吸入麻醉药异氟醚对缺锌APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡的影响,探讨其相关作用机制。方法：8和9月龄APP/PS1转基因小鼠随机分为常锌组、常锌+异氟醚组、缺锌组和缺锌+异氟醚组,每组24只。常锌组小鼠给予正常锌含量饮食2个月;常锌+异氟醚组小鼠给予正常锌含量饮食2个月后接受1.4%异氟醚麻醉2 h;缺锌组小鼠给予低锌饮食1个月;缺锌+异氟醚组小鼠给予低锌饮食1个月后接受1.4%异氟醚麻醉2 h。分别在麻醉后6和24 h杀鼠取海马组织,采用免疫荧光双染法检测海马神经元凋亡率,Western blotting法检测海马β淀粉样蛋白（Aβ）、活化型半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶3（Cleaved caspase-3）表达水平和Bax/Bcl-2比值。结果：与常锌组比较,常锌+异氟醚组小鼠麻醉后6 h海马神经元凋亡率、Cleaved caspase-3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05或P<0.01）,麻醉后24 h海马神经元凋亡率总Aβ、Aβ40和Aβ42表达水平无明显改变（P>0.05）;缺锌组和缺锌+异氟醚组小鼠麻醉后6和24 h海马神经元凋亡率、Aβ42表达水平、Cleaved caspase-3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05或P<0.01）。与缺锌组比较,缺锌+异氟醚组小鼠麻醉后6和24 h海马神经元凋亡率、Aβ42和Cleaved caspase-3表达水平及Bax/Bcl-2比值进一步升高（P<0.05或P<0.01）。结论：10月龄常锌APP/PS1转基因小鼠给予1.4%异氟醚麻醉2 h能够短暂加重其海马神经元凋亡;1.4%异氟醚麻醉2 h能够明显加重缺锌APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡,其作用机制可能与促进海马Aβ42聚集、增强Bax表达、抑制Bcl-2表达和激活Caspase-3有关。     

雌激素缺失及17β-estradiol替代治疗对大鼠海马β淀粉样蛋白含量的影响

目的 观察雌激素缺失及雌二醇(17β-estradiol)替代治疗对大鼠海马β淀粉样蛋白(Aβ)含量的影响及其可能机制.方法 切除大鼠双侧卵巢制作雌激素缺失模型(Ovx),然后给予17β-estradiol补充治疗.ELISA检测海马AB含量,荧光法测定α和β分泌酶活性,Western印迹检测β分泌酶(BACEl)和中性内肽酶(NEP)的表达.结果 Ovx大鼠雌激素水平[(11±4)pg/ml,P＜0.01]明显低于对照组[(21±8)pg/ml],而给予17β-estradiol替代治疗后雌激素水平上升[(63±13)pg/ml,P＜0.01];Ovx大鼠海马组织Aβ40[(28.5±4.5)ng/ml,P＜0.01]和Aβ42含量[(4.6±1.2)ng/ml,P＜0.01]均显著高于对照组的Aβ40[(14.4±2.4)ng/ml]和Aβ42[(2.8±0.4)ng/ml];而17β-estradiol替代治疗可以使Aβ40[(20.3±3.2)ng/ml,P＜0.01]和Aβ42[(3.8±0.5)ng/ml,P＜0.01]降低;Ovx大鼠α仅分泌酶活性降低(67.5%,P＜0.01)而β分泌酶活性增加(145.8%,P＜0.01),17β-estradiol替代治疗后部分逆转了上述现象;Ovx大鼠BACE1的表达增加(135.4%,P＜0.01)而NEP表达降低(40.8%,P＜0.01),而补充17β-estradiol后可以部分拮抗上述作用.结论 雌激素缺失可以增加去势大鼠海马AB含量,这可能与α分泌酶活性下降、BACE1活性增加和(或)NEP活性下降有关,而补充17β-estradiol可以降低Aβ含量;这可能是绝经后妇女雌激素替代治疗降低阿尔茨海默病发病危险性的原因之一.     

Huannao Yicong Formula (还脑益聪方) regulates γ-secretase activity through APH-1 and PEN-2 gene ragulation pathways in hippocampus of APP/PS1 double transgenic mice

Objective: To observe the effects of Huannao Yicong Formula (还脑益聪方, HYF) on learning and memory and it's regulating effect on γ-secretase related anterior pharynx defective 1 (APH-1), presenilin enhancer-2 (PEN-2) signaling pathway, so as to discuss and further clarify the mechanism of HYF on Alzheimer's disease. Methods: Sixty APP/PS1 transgenic mice, randomly allocated into 4 groups, the model group, the donepezil group (0.65 mg/kg), HYF low-dose group (HYF-L, 5.46 g/kg) and HYF high-dose group (HYF-H, 10.92 g/kg), 15 for each group. Another 15 C57BL/6J mice with the same age and same genetic background were allocated into the control group, proper dosage of drugs or distilled water were given by intragastric administration once daily for 12 weeks. After 12 weeks of administration, the learning and memory abilities of mice in each group was evaluated by the morris water maze test, amyloid precursor protein (APP), Aβ1-40 and Aβ1-42 levels in hippocampus were detected by enzyme-linked immunosorbent assay, γ-secretase was detected by dual luciferase assaying, the levels of APH-1a, hypoxia-inducible factor 1α (HIF-1α), cAMP response element-binding protein (CREB) and PEN-2 and their mRNA expression was measured by Western blot and real-time polymerase chain reaction. Results: HYF can ameliorate learning and memory deficits in APP/PS1 transgenic mice by decreasing the escape latency, improving the number of platform crossing and swimming speed (P<0.01, P<0.05). HYF can decrease the levels of APP, Aβ1-40 , Aβ1-42 and the activity of γ-secretase in hippocampus of Alzheimer's disease model mice. HYF can down-regulate the levels of CREB and PEN-2 and the expression of their mRNA. Conclusion: HYF can improve the learning and memory ability by inhibiting the activity of γ-secretase through the CREB/PEN-2 signaling pathway, and this may be one of the therapeutic mechanisms of HYF in Alzheimer's disease.     

丙戊酸钠对APP/PS1双重转基因小鼠脑组织Tau蛋白的影响

目的探讨丙戊酸钠(valproic acid,VPA)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠丝氨酸262位点Tau蛋白过度磷酸化(p-Tau-ser262)及神经细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)的影响。方法 3月龄APP/PS1双重转基因AD模型小鼠20只,均分为VPA治疗组和生理盐水对照组(每组10只)。腹腔注射VPA和等量生理盐水4周后取材,应用免疫组化方法检测各组AD模型鼠脑内p-Tau-ser262阳性细胞表达,HE染色显示NFTs的数量及分布变化;Western blot分析各组AD模型鼠脑内糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase3β,GSK-3β)ser9位点磷酸化水平。结果免疫组化结果显示,VPA治疗组AD模型小鼠p-Tau-ser262阳性细胞数皮质(5.01±0.71)、海马(5.29±1.32)、嗅球(10.06±3.36)、小脑(13.54±1.51),与生理盐水对照组[分别为(8.60±1.82)、(9.00±1.87)、(56.00±6.67)、(22.02±1.98)]相比明显减少(P<0.05,P<0.01);HE染色结果显示:VPA治疗组小鼠海马(1.33±0.71)和大脑皮质区内(1.90±0.88)NFTs数量与生理盐水对照组[分别为(5.89±0.92)、(6.08±1.61)]相比明显减少(P<0.01);Western blot检测结果显示:VPA治疗组AD模型鼠脑内GSK-3β蛋白ser9磷酸化水平(126.88±5.61)明显高于生理盐水对照组(73.34±3.61)(P<0.01)。结论 VPA可明显减少AD模型小鼠脑内Tau蛋白的过度磷酸化及NFTs的形成;VPA发挥保护作用的机制可能与下调GSK-3β活性有关。     

Comparison of β-Amyloid Plaque Labeling Methods: Antibody Staining,Gallyas Silver Staining,and Thioflavin-S Staining

Objective To evaluate senile plaque formation and compare the sensitivity of three different β-amyloid (Aβ) labeling methods (antibody staining, Gallyas silver staining, and thioflavin-S staining) to detect Aβ deposition.Methods APPswe/PSEN1dE9 transgenic mice (APP/PS1) of different ages were used to examine spatiotemporal changes in Aβ plaque deposition. Antibody staining, Gallyas silver staining, and thioflavin-S staining were used to detect Aβ plaque deposition in the same brain region of adjacent slices from model mice, and the results were compared.Results With aging, Aβ plaques first appeared in the cortex and then the deposition increased throughout the whole brain. Significantly greater plaque deposition was detected by 6E10 antibody than that analyzed with Gallyas silver staining or thioflavin-S staining (P<0.05). Plaque deposition did not show significant difference between the APP/PS1 mice brains assayed with Gallyas silver staining and ones with thioflavin-S staining (P=0.0033).Conclusions The APP/PS1 mouse model of Alzheimer’s disease could mimick the progress of Aβ plaques occurred in patients with Alzheimer’s disease. Antibody detection of Aβ deposition may be more sensitive than chemical staining methods.     

血中转化生长因子β与糖尿病肾病相关性的研究

目的探讨细胞转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGF-β)在糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）发病机制和发展过程中的作用。方法采用双抗体夹心酶联免疫法（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测患者血清中活性TGF-β的含量。结果单纯糖尿病组患者血清中的TGF-β含量(12.7±5.0)pg/ml与健康对照组(12.6±4.4)pg/ml相比无明显差异,P>0.05。DN组微量白蛋白尿组血清TGF-β含量(65.3±13.0)pg/ml明显高于单纯糖尿病组,P<0.01。DN组临床蛋白尿期患者血清TGF-β含量（136.4±21.4）pg/ml明显高于微量白蛋白尿期患者血清中的含量（65.3±13.0）pg/ml,P<0.01。而且DN患者血清TGF-β含量与尿白蛋白排泄率成正相关（r=0.64,P<0.05）。结论在糖尿病肾病早期,患者血中TGF-β含量就已开始增多,而且随着糖尿病肾病的进展,患者血中TGF-β含量明显增加,同时血清TGF-β含量的变化与尿白蛋白排泄率成正相关。本实验说明TGF-β在糖尿病肾病的发病及发展中起着重要作用,可把血中TGF-β含量变化做为糖尿病肾病早期诊断的指标。