结肠腺瘤癌变过程中PI3K/AKT/mTOR信号通路表达谱的改变

目的探讨结肠腺瘤恶性转化过程中PI3K/AKT/mTOR信号通路分子表达谱的改变。方法采用表达谱PCR芯片技术对PI3K/AKT/mTOR信号通路的主要分子进行实时荧光PCR检测,分析其在结肠低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及腺癌中的表达。结果 PI3K/AKT/mTOR信号通路在大肠腺瘤恶性转化中发生多位点基因mRNA表达改变,以3条子通路PI3K亚基P85与细胞迁徙调节因子、AKT/PI3K家族及调节因子、mTOR信号途径多基因表达改变为主。其中结肠癌变过程c-FOS和PTEN可能为PI3K/AKT/mTOR通路中关键基因改变,在癌变过程中发挥重要作用。结论 PI3K/AKT/mTOR信号通路分子在大肠腺瘤癌变过程中基因表达谱异常,该通路关键基因可望成为临床治疗的分子靶点。     

蚕梅方提取物对AOM/DSS诱发腺瘤性息肉小鼠的防治作用

目的:探讨蚕梅方(由僵蚕、乌梅组成)提取物对AOM/DSS诱发小鼠腺瘤性肠息肉的防治作用。方法:以C57BL/6小鼠为研究对象,随机分为正常组、模型组、阳性对照组(阿司匹林组)、蚕梅低剂量组(0.65 g/ml)、蚕梅高剂量组(2.6 g/ml)。除正常组外,其余各种采用AOM/DSS诱发小鼠结直肠腺瘤性息肉模型,并于造模过程中各药物组予相应的药物灌胃干预。实验结束,比较各组结直肠腺瘤个数及抑瘤率,并以免疫组化法检测结肠黏膜细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平;应用ELISA检测小鼠血浆白介素-6(IL-6)表达水平。结果:经93 d灌胃给药,阳性对照组、蚕梅高剂量组、蚕梅低剂量组腺瘤抑制率分别为14.49%、70.45%、8.78%,与阳性对照组比较蚕梅高剂量组有显著抑制腺瘤作用(P0.05),且蚕梅高剂量组能显著降低Cyclin D1阳性发生率(P0.05);与正常组比较,模型组和阳性对照组IL-6高表达,蚕梅方低剂量组和高剂量组可显著下调IL-6表达(P0.05)。结论:蚕梅方提取物能显著降低AOM/DSS小鼠腺瘤性息肉的发生率,且有明显的量效关系;其作用机制可能与抑制Cyclin D1、显著下调IL-6表达有关。     

清肠解毒汤对溃疡性结肠炎相关癌变的治疗作用及PI3K/Akt/m TOR通路调控机制

目的 观察清肠解毒汤对溃疡性结肠炎相关癌变的治疗作用,并探讨通过PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控机制。方法 取50只SPF级大鼠,随机分为5组,模型组、低、中、高剂量组采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠（AOM/DSS）复合法建立溃疡性结肠炎相关癌变模型,对照组饮用水不变,生理盐水替换二甲肼（DMH）;低、中、高剂量组灌胃4.5、9、1.8 g/kg的清肠解毒汤,模型组和对照组灌胃生理盐水,持续8周。观察各组大鼠一般情况,并对比灌胃1 d、2周、4周时疾病活动指数评分（DAI）,大肠前、中、后段典型增生/癌变数,结肠黏膜组织病理学变化,PI3K、AKT、m TOR mRNA表达情况及AKT/p AKT差异。结果 模型组大鼠精神萎靡,伴血便、腹泻,3剂量组给药后精神状态逐渐好转,高剂量组好转最为明显。干预期间对照组DAI评分均为0分,DAI组间、时间、交互比较（P<0.05）。对照组大鼠无溃疡性结肠炎相关癌变,其余4组结肠前段、中段及后段不典型增生/癌变数组间比较（P<0.05）。组织病理学观察发现,模型组结肠黏膜上皮细胞脱落,部分可见低度不典型增生、癌变,固有腺体萎缩,...     

新风胶囊通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制骨关节炎CD4+T与软骨细胞共培养的免疫炎症

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清通过调控miR-23a-3p /PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎（OA）CD4+T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法 选取30例OA患者（OA组）及30例正常人（NC组）检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,观察临床指标：红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IgA、IgG、IgM、补体 C3、补体C4的表达,并观察通路与临床指标的相关性。观察 30 例 OA 患者经 XFC 治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取 OA-CD4 +T 细胞,transwell小室培养OA-CD4+T细胞与OA-CH,SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清;采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系;RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA 的表达;采用 ELISA 法检测 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;Western blotting 检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与NC组相比,OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调,而PTEN、IL-10表达显著下调（P<0.01）;相关性分析表明：miR-23a-3p与IL-6呈正相关（P<0.01）,PI3K与IL-10呈正相关,mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关（P<0.01或P<0.05）;加入XFC含药血清,miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制,L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高（P<0.01）;Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高,PTEN、IL-10表达水平降低（P<0.01）;miR-23a-3p经过表达后,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,PTEN、IL-10表达水平显著降低（P<0.01或P<0.05）;XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调,PTEN表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论 XFC可通过下调miR-23a-3p的表达,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化,改善IL-1β、IL-6,IL-10和TNF-α的表达,降低OA患者炎症反应。     

南方红豆杉水提物通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控HER2阳性胃癌移植瘤生长实验研究

目的：初步探讨南方红豆杉水提物抑制磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide-3 kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,又称AKT） /雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路上相关靶点蛋白调控裸鼠人类表皮生长因子受体2（HER2）阳性胃癌移植瘤生长及其机制。方法：建立荷瘤裸鼠模型,将80只BALB/c裸鼠接种人HER2阳性胃癌NCI-N87细胞株并随机分组给药及取瘤,采用Western blot法检测PI3K、pAKT、mTOR蛋白表达情况,实时荧光定量PCR法检测PI3K、AKT1、mTOR mRNA表达水平。结果 ：Western blot法检测PI3K、pAKT、mTOR蛋白,红豆杉中、低剂量组下调PI3K蛋白表达更显著[（0.9123±0.0480、1.1440±0.1663）比1.4160±0.0730,P<0.01],红豆杉各剂量联合赫赛汀后明显下调pAKT蛋白表达（P<0.05）,红豆杉组均明显下调mTOR蛋白表达（P<0.01）,联合赫赛汀后下调更显著。2、实时荧光定量PCR法检测PI3K、AKT1、mTOR mRNA,红豆杉低剂量组PI3K mRNA表达降低[（0.6906±0.0710）比（0.9018±0.0696）,P<0.05],红豆杉各剂量组联合赫赛汀后明显下调AKT1 mRNA表达,红豆杉中、低剂量组mTOR mRNA表达显著降低[（0.8183±0.0664、0.7917±0.0699）比（1.0004±0.1182）,P<0.05）]。结论：南方红豆杉水提物可部分下调PI3K、pAKT、mTOR蛋白及PI3K、AKT1、mTOR mRNA表达水平,联合赫赛汀可增强其抑制作用。     

柚皮素对溃疡性结肠炎小鼠肠组织中miR-30a-3p/PTEN信号轴表达的影响

目的 探讨柚皮素对溃疡性结肠炎小鼠肠组织中miR-30a-3p/PTEN信号轴表达的影响。方法 选取60只健康雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法均分为阴性对照组、模型组、阳性对照组、柚皮素低剂量组、柚皮素中剂量组和柚皮素高剂量组,每组各10只。用DSS灌胃法制备BALB/c小鼠溃疡性结肠炎模型,阴性对照组和模型组灌胃给予生理盐水（0.2 mL/10g）,阳性对照组灌胃给予泼尼松龙（2 mg/kg）,柚皮素低、中、高剂量组分别灌胃给予柚皮素（剂量依次为50、100、200 mg/kg）,持续给予7 d。计算疾病活动度评分（DAI）,对BALB/c小鼠肠组织进行形态学检查,同时采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肠组织中白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,实时荧光定量PCR（RT-PCR）法及Elisa法分别检测肠组织miR-30a-3p、PTEN、PI3K、Akt和Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果 模型组小鼠结肠有部分肠壁凹陷,形成溃疡,周围组织水肿明显,部分细胞坏死、脱落,炎性细胞浸润;与模型组比较,阳性对照组和各柚皮素剂量组小鼠结肠组织病理损伤明显改善。与阴性对照组比较,其余各组小鼠肠组织DAI、IL-4、TNF-α、PTEN和Caspase-3 mRNA及蛋白升高,IL-10、miR-30a-3p、PI3K和Akt mRNA及蛋白降低（均P＜0.05）;与模型组比较,阳性对照组和各柚皮素剂量组小鼠肠组织DAI、IL-4、TNF-α、PTEN和Caspase-3 mRNA及蛋白降低,IL-10、miR-30a-3p、PI3K和Akt mRNA及蛋白升高,各柚皮素剂量组效应呈剂量反应关系（均P＜0.05）;柚皮素高剂量组与阳性对照组各指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 柚皮素可以降低溃疡性结肠炎小鼠的结肠炎性,减轻病理损伤,其机制可能与调控miR-30a-3p/PTEN信号轴有关。     

温肾养血方对高龄雌鼠卵泡发育的作用及其对PI3K-AKT-FOXO3a通路影响的研究

目的 探讨温肾养血方促进高龄雌鼠卵泡发育的作用及机制。方法 采用数字表法将8月龄ICR小鼠随机分为A：空白组、B：控制性超排卵组（controlled ovarian hyperstimulation，COH）组、C：温肾养血方低剂量组、D：温肾养血方中剂量组、E：温肾养血方高剂量组，连续每日定时（下午6时）灌胃给药10 d，第11天对B、C、D、E组雌鼠同时腹腔注射孕马血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotropin，PMSG）10 IU/只，A、B组雌鼠同时注射等量0.9%（质量分数）氯化钠注射液，48 h后，腹腔注射人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）10 IU/只，14 h后，剖腹取出小鼠卵巢及输卵管，观察用药后各组小鼠取卵数及优质卵泡数，qRT-PCR、Western blotting法和免疫组织化学法检测PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、FOXO3a、P-FOXO3a的表达情况。每组记录4只雌鼠与雄鼠交配后的生育数量。结果 温肾养血方能够增加小鼠排卵数、优质卵泡数和生育数；与空白组比较，温肾养血方中剂量组小鼠卵巢PI3K mRNA表达下降，温肾养血方高、低剂量组表达升高，差异有统计学意义（P<0.05）；低剂量组AKT mRNA的表达升高，差异有统计学意义（P<0.05）；低剂量、中剂量和高剂量组的FOXO3a mRNA表达均升高，差异有统计学意义（P<0.05），随着中药浓度升高，FOXO3a mRNA表达的含量逐渐下降。结论 温肾养血方可促进高龄ICR小鼠卵泡发育，增加排卵数、优质卵泡数及生育数量，其机制可能与调节PI3K，AKT和FOXO3a的表达有关。温肾养血方低剂量和中剂量效果最好，高剂量次之。     

重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽协同5-氟尿嘧啶对小鼠H22肝癌的抑制作用

目的：探讨重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽（recombinant analgesic-antitumor peptide,rAGAP）增强5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对肝癌H22细胞的抑制作用及机制。方法：SPF级雄性小鼠120只,采用接种H22肝癌小鼠腹水方法建立模型,随机分为4组：rAGAP组（予rAGAP 0.03 mg/kg）、5-FU组（予5-FU 10 mg/kg）、联合组（予rAGAP 0.03 mg/kg, 5-FU 10 mg/kg）,模型组（予等体积生理盐水）,每4 d腹腔注射1次,用药持续24 d。用药结束后取出肿瘤组织标本,检测各组瘤体组织重量和抑瘤率,Western blot方法检测PI3K、AKT、PTEN蛋白表达。结果：与模型组相比,其他各组小鼠瘤体组织重量均明显降低（P＜0.05）;联合组抑瘤率明显高于rAGAP组和5-FU组（P＜0.05）。与模型组相比,其他各组PI3K、p-Akt表达均明显减弱,PTEN表达明显增强（P＜0.05）;与5-FU组、rAGAP组相比,联合组PI3K、p-Akt表达均明显减弱,PTEN表达明显增强（P＜0.05）。结论：rAGAP能增强5-FU对肝癌组织的抑制作用,其机制可能与影响PI3K/AKT/PTEN信号通路,进而抑制肝癌细胞的增殖有关。     

党参远志散微乳调节PI3K/Akt/mTOR通路对皮质性痴呆小鼠神经元凋亡的影响

目的 基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,研究党参远志散微乳对D-半乳糖联合亚硝酸钠所致皮质性痴呆小鼠海马神经元凋亡的影响及作用机制。方法 将60只小鼠随机分为6组,空白组、模型组、空白微乳组、脑复康组、党参远志散微乳低剂量组、党参远志散微乳高剂量组,每组10只。除空白组外,其余组均 ip D-半乳糖和NaNO₂制备皮质性痴呆小鼠模型,分别 ig 蒸馏水、空白微乳、脑复康、党参远志散微乳低剂量和党参远志散微乳高剂量6周。Morris水迷宫实验进行行为学考察；HE染色观察海马皮质病理形态学改变；Nissl染色观察海马皮质神经元尼氏小体变化；免疫组织化学染色观察海马皮质PI3K、AKT、mTOR蛋白表达情况；利用DCX抗体特异性标记新生神经元胞质及突起,免疫荧光观察海马皮质DCX表达情况。结果 与模型组比较党参远志散微乳低、高剂量可以显著改善皮质性痴呆小鼠学习记忆能力,海马皮质病理形态明显改善,神经元胞体圆整密集,神经元尼氏小体含量丰富,海马皮质PI3K、AKT、mTOR蛋白表达明显降低,DCX蛋白表达明显增高,新生神经元显著增加,分布密集,胞体伸出突触增多,细胞多形性增加。结论 党参远志散微乳低、高剂量可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,诱导自噬,减轻神经元损伤,诱导神经元新生,改善D-半乳糖和亚硝酸钠所致的皮质性痴呆模型小鼠的学习记忆能力。权衡效毒,选择使用党参远志散微乳低剂量,即临床等效剂量。     

丹参素经PI3K/AKT信号通路改善血管性痴呆小鼠认知功能的机制研究

目的：基于磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路探讨丹参素对血管性痴呆小鼠认知功能的改善情况。方法：将60只昆明种小鼠按随机数字表法分为6组：正常对照组、模型组、阳性对照组（尼莫地平注射液,2 mg·kg-1）、丹参素低（10 mg·kg -1）、中（20 mg·kg -1）、高（30 mg·kg -1）剂量组,每组10只。模型组、阳性对照组、丹参素低、中、高剂量组小鼠构建血管性痴呆模型。建模成功后,从第1天开始丹参素各剂量组和阳性对照组腹腔注射相应的药物,正常对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,持续28d。给药结束后对小鼠进行水迷宫实验,检测小鼠脑损伤相关因子血清星形胶质源性蛋白（S-100β）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量,苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠脑组织结构,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测小鼠脑组织中PI3K、AKT蛋白水平。结果：正常对照组小鼠脑组织结构正常,细胞排列整齐,无明显空泡结构;模型组可见明显的脑白质受损,细胞排列紊乱,视野中大量空泡结构;在给予丹参素干预后,随着丹参素给药剂量的增加,可见脑组织细胞排列逐渐变整齐,空泡结构逐渐减少。与正常对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量显著升高,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;与模型组比较,丹参素低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量显著降低,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;随着丹参素给药剂量的增加,小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量逐渐降低,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平逐渐升高,具有量-效关系（P<0.05）;丹参素高剂量组和阳性对照组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：丹参素可通过调节PI3K/AKT信号通路及相关细胞因子,改善血管性痴呆小鼠的认知功能障碍。     

miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移：通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路

目的 探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。 方法 qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系;Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC（miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照）、miR-inhibitor（miR-372-5p抑制剂）、miR-mimics（miR-372-5p类似物）以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN（PTEN干扰）、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响;Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12（CXCL12干扰）以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果 结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高,相对于NCM460,HCT116较SW620中miR-372-5p表达上调更显著（P<0.01）;双荧光素酶实验证实PTEN是miR-372-5p的潜在靶基因（P<0.05）。相较于NC组,miR-mimics可降低PTEN蛋白表达水平,增加CXCL12蛋白表达水平和AKT磷酸化水平,提高HCT116迁移能力;而miR-inhibitor则导致相反的结果（P<0.05）,si-PTEN可中和miR-inhibitor的作用（P<0.01）;PI3K抑制剂可降低CXCL12的蛋白表达水平,并抑制HCT116迁移能力（P<0.05）,而miR-mimics可中和这一作用（P<0.01）;miR-mimics转染HCT116的条件培养基可提高NCM460的迁移能力（P<0.01）,联合si-CXCL12可逆转miR-mimics对HCT116转移的促进作用（P<0.01）。结论 miR-372-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路,上调CXCL12的表达,从而促进结直肠癌细胞的迁移能力。     

PI3K/AKT/mTOR途径在慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌萎缩中的作用

目的研究PI3K/AKT/mTOR信号通路在慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）大鼠骨骼肌萎缩中的作用。方法采用单纯熏香烟法复制慢阻肺大鼠动物模型。采用Western blot技术检测慢阻肺大鼠趾长伸肌中PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、总的及磷酸化的mTOR（t-mTOR,p-mTOR）、总的及磷酸化的GSK-3β（t-GSK-3β,p-GSK-3β）、总的及磷酸化的4E-BP1（t-4E-BP1,p-4E-BP1）、总的及磷酸化的p70S6K1（t-p70S6K1,p-p70S6K1）蛋白表达变化。结果 Western blot分析结果显示,大鼠趾长伸肌组织中PI3K的蛋白表达在两组间差异不显著（P〉0.05）;t-mTOR、p-mTOR、t-GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白表达慢阻肺组显著高于对照组（P〈0.05,其中p-GSK-3β两组对照P〈0.01）;t-4E-BP1和t-p70S6K1的蛋白表达在两组间差异不显著（P〉0.05）,p-4E-BP1和p-p70S6K1的蛋白表达慢阻肺组显著高于对照组（P〈0.05）。结论慢阻肺大鼠趾长伸肌组织内PI3K/AKT/mTOR信号通路被激活,可能是骨骼肌萎缩的代偿机制之一。     

miR-20a靶向PTEN调控垂体腺瘤细胞的增殖与侵袭

目的探讨miR-20a对垂体腺瘤细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。 方法培养垂体腺瘤细胞系GH3、HP75,采用RT-qPCR、Western blotting、双荧光素酶报告基因检测等方法,分析垂体腺瘤细胞系中miR-20a和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的表达相关性以及相互作用情况;采用CCK8和Transwell等方法检测miR-20a对垂体腺瘤细胞增殖和侵袭能力的影响,进一步考察对PTEN下游PI3K/AKT信号通路的影响。 结果 miR-20a负调控PTEN的表达。体外细胞实验显示,与miR-20a类似物对照组相比,类似物组在垂体腺瘤细胞系GH3和HP75中细胞迁移细胞数量、细胞增殖相关蛋白PI3K、AKT、MAPK和侵袭相关蛋白E-cadherin、MMP2和MMP9的表达量均增高,差异均有统计学意义(P < 0.01);与抑制物对照组相比,miR-20a抑制物组在GH3和HP75中细胞迁移细胞数量和各蛋白表达量均下降,差异均有统计学意义(P < 0.01);双荧光素酶报告基因分析发现与miR-20a类似物对照组比较,类似物组PTEN-WT的活性降低(P < 0.01)。 结论miR-20a在调节细胞的增殖和侵袭的过程中扮演非常重要的作用,因而影响了垂体腺瘤细胞的增殖和侵袭。它可能通过靶向PTEN,影响PI3K/AKT信号通路,参与垂体腺瘤的进程中。     

重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽协同5-氟尿嘧啶对小鼠H22肝癌抑制作用的研究*

【】 目的：探讨重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(rAGAP)增强5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌H22细胞的抑制作用及机制。方法：采用接种H22肝癌小鼠腹水方法建立模型,随机分为4组。rAGAP组予rAGAP 0.03mg/kg ip,5-FU组予5-FU 10mg/kg ip,联合组予rAGAP 0.03mg/kg, 5-FU 10mg/kg ip,模型组予等体积生理盐水ip。用药持续3周。用药结束后取出肿瘤组织标本,检测各组肿瘤质量和抑瘤率,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,Westernblot方法检测PI3K、AKT、PTEN蛋白表达。结果：与模型组相比,其他各组小鼠肿瘤质量均明显降低(P＜0.5);联合组抑瘤率明显高于rAGAP组和5-FU组(P＜0.5)。与模型组相比,其他各组PI3K、P-Akt表达均明显减弱,PTEN表达明显增强(P＜0.5);与5-FU组、rAGAP组相比,联合组PI3K、P-Akt表达均明显减弱,PTEN表达明显增强(P＜0.5)。结论：rAGAP能增强5-FU对肝癌组织的抑制作用,其机制可能与影响PI3K/ AKT/PTEN信号通路,进而抑制肝癌细胞的增殖有关。     

补肾安胎冲剂调节TGF-β1及其下游PI3K/AKT信号通路改善复发性流产小鼠母胎界面血管生成

目的研究补肾安胎冲剂对复发性流产(RSA)小鼠蜕膜组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)相关蛋白的影响,探讨其降低胚胎流产率的作用机制。方法以CBA/J×Balb/c小鼠合笼建立正常妊娠小鼠模型。以DBA/2×CBA小鼠合笼建立RSA小鼠模型,将其随机分为模型组,黄体酮组,补肾安胎冲剂高、中、低剂量组。每组每日以相应药物灌胃,连续干预15 d后处死小鼠,收集样本,肉眼观察各组孕鼠胚胎丢失情况;HE染色法观察每组小鼠蜕膜组织病理形态学改变;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组小鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、TGF-β1、PI3K、AKT的含量;采用免疫组化法及蛋白质印迹(Western blot)法检测各组小鼠蜕膜组织中TGF-β1、PI3K、AKT的蛋白表达。结果与正常组相比,模型组小鼠胚胎丢失率升高(P<0.01),血清中E2、P、TGF-β1、PI3K、AKT的含量均下降(P<0.01),蜕膜组织中TGF-β1、PI3K、AKT蛋白表达均下降(P<0.01)。与模型组相比,经药物干预后的小鼠胚胎丢失率均降低(P<0.01),血清中E2、P、TGF-β1、PI3K、AKT的含量均增加(P<0.01),蜕膜组织中TGF-β1、PI3K、AKT的蛋白表达水平均升高(P<0.01),其中补肾安胎冲剂高剂量组更为显著。结论补肾安胎冲剂能降低RSA小鼠流产率,其机制可能是通过上调TGF-β1/PI3K/AKT信号通路,促进RSA小鼠母胎界面血管生成,从而发挥保胎作用。     

六味地黄方通过上调肠道雌激素受体改善绝经后ApoE-/-小鼠脂代谢异常研究

目的?应用双侧卵巢去势的ApoE-/-小鼠建立绝经后脂代谢异常模型,探究六味地黄方(LW)能否通过调节肠道雌激素受体改善绝经后脂代谢异常。方法?正常饮食的C57/B6小鼠为对照组(n=6),高脂饮食并接受假手术的ApoE-/-小鼠为假手术对照组(n=6),高脂饮食并接受双侧卵巢去势的的ApoE-/-小鼠为模型组(n=6),模型小鼠接受4.5?g/kg (n=6)或9.0?g/kg (n=6)的六味地黄方治疗90?d。生化法检测小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酸酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）水平,HE染色检测小鼠肝脏脂质损伤,油红染色检测小鼠肝脏脂质堆积,免疫荧光染色检测小鼠空肠雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、ABCG5、ABCG8、PI3K p110β及p-AKT的表达水平,免疫化学染色检测小鼠空肠NPC1L1的表达水平,Western blot法检测小鼠空肠NPC1L1、ABCG5及ABCG8的表达水平。结果?六味地黄方可降低模型小鼠血清TC、TG及LDL-C水平,升高HDL-C水平（P<0.05~0.01）;同时,六味地黄方可显著降低模型小鼠的肝脏脂质损伤和脂肪堆积（P<0.05~0.01）。六味地黄方显著增加模型小鼠空肠内降低的ERα和ERβ水平（P<0.05~0.01）。六味地黄方显著降低模型小鼠空肠中NPC1L1的表达水平（P<0.05）,并上调ABCG5和ABCG8的表达水平（P<0.01）。六味地黄方显著增加模型小鼠空肠内PI3K p110β及p-AKT的表达水平（P<0.05~0.01）。结论?六味地黄方可以显著改善绝经后ApoE-/-小鼠脂代谢异常,其机制与六味地黄方调节肠道胆固醇的吸收和外排有关。上调肠道雌激素受体表达和肠道PI3K/AKT信号可能是六味地黄方调节肠道胆固醇吸收和外排的机制。      

MiRNA-142-5p在大鼠角膜新生血管中的作用及机制研究

目的 观察microRNA-142-5p(miRNA-142-5p)对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CorNV)的作用及其与VEGF/PI3 K/AKT通路的关联情况.方法 角膜缝线法诱导SD大鼠右眼CorNV作为实验组,左眼作为对照组.取缝线后第7天的角膜进行实时荧光定量聚合酶反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测miRNA-142-5p以及VEGF mRNA的表达水平.将miRNA-142-5pmimic转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),RT-PCR检测miRNA-142-5p的表达量来验证转染是否成功.并通过RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HUVECs中VEGF及PI3 K/AKT mRNA和蛋白的表达量.分别用Transwell、CCK-8法及Matrigel胶管腔形成实验检测HUVECs的迁徙、增殖及管腔形成能力.结果 成功建立CorNV模型.RT-PCR结果显示7d组miRNA-142-5p(6.799±1.683)和VEGF(3.297±0.334)的表达量较正常角膜组(normal)显著升高(P＜0.01).转染miRNA-142-5p mimic后的miRNA-142-5p的表达量显著高于空白对照及阴性对照组(P＜0.01).Transwell、CCK-8及Matrigel胶管腔形成实验结果示miRNA-142-5p提高了HUVECs的迁徙、增殖及管腔形成能力(P＜0.01).转染miRNA-142-5p mimic后HUVECs中VEGF及PI3 K/AKT的mRNA及相应蛋白的表达均明显上升(P＜0.05).结论 CorNV中miRNA-142-5p及VEGF的表达明显上调,过表达miRNA-142-5p可以显著提高HUVECs中VEGF及PI3 K/AKT通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而促进HUVECs的迁徙、增殖及管腔形成能力.表明miRNA-142-5p可通过PI3K/AKT通路参与CorNV的调控.     

原花青素B2对三硝基苯磺酸结肠炎模型小鼠肠炎及肠屏障的保护作用

目的探讨原花青素B2（PCB2）对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的结肠炎小鼠肠炎及肠屏障的保护性作用及可能机制。方 法选取6~8周龄雄性Balb/c小鼠，建立TNBS结肠炎小鼠模型，将造模成功的小鼠随机分为PCB2治疗组（n=10）和对照组（n= 10）。PCB2治疗组小鼠每日给予PCB2灌胃（100 mg/kg，0.2 mL），对照组每日给予0.2 mL生理盐水灌胃。4周后处死小鼠，采 用H&E、免疫荧光及免疫印迹法等评估疾病症状、肠道炎症、肠粘膜细胞屏障功能和结构及PI3K/AKT信号改变情况。结果 PCB2治疗组小鼠疾病活动指数在干预第3周和第4周均低于对照组小鼠（P<0.05），而平均体质量在干预第3周和第4周均高于 对照组小鼠（P<0.05）。PCB2 治疗组小鼠结肠炎症评分及肠粘膜炎症介质白介素-1β及肿瘤坏死因子-α水平低于对照组（P< 0.05），而白介素-10高于TNBS组（P<0.05）。PCB2治疗组小鼠肠粘膜对硫氰酸荧光素-葡聚糖通透性及肠系膜淋巴结细菌移位阳 性率均低于对照组（P<0.05）。Western blot检测及半定量分析显示PCB2治疗提高了TNBS模型小鼠claudin-1及ZO-1的表达水 平（P<0.05）。同时，PCB2治疗组小鼠肠粘膜p-PI3K及p-AKT表达水平低于对照组，差异具有统计学意义（P>0.05）。结论PCB2 可能通过抑制肠道PI3K/AKT信号途径发挥抗炎及肠粘膜功能和结构保护作用，可能会成为克罗恩病治疗新的药物选择。