低密度脂蛋白受体3′非翻译区单核苷酸多态性对黄连素调节低密度脂蛋白受体表达的影响

目的：中药黄连素具有降低血清中低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的作用,其作用机制是否与低密度脂蛋白受体（LDLR）的单核苷酸多态性（SNP）有关尚不清楚。现探讨LDLR3′非翻译区（LDLR 3-′UTR）的SNP对黄连素调节LDLR表达的影响。方法：收集113例高脂血症合并冠心病患者,提取外周血基因组DNA,检测LDLR 3′-UTR的SNP,分析LDLR 3-′UTR的基因型与中国人群血脂水平的关系。此外,构建了携带不同LDLR 3-′UTR基因型（TypeⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ）的荧光素酶报告基因载体（pLuc）,转染HepG2细胞后采用黄连素（Berberine,BBR）作用12h后观察pLuc的活性变化。结果：中国人群的LDLR 3-′UTR存在着Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ等SNP分布,但这些基因型频率与中国人群的血脂水平无明显相关性,携带有不同SNP基因型的荧光素酶报告基因载体转染HepG2细胞,在BBR作用后LDLR表达上调程度相似。结论：LDLR 3-′UTR的基因型频率及其分布的遗传性变异不能影响BBR对LDLR表达的上调作用,从而可为临床使用黄连素治疗高脂血症提供理论依据。     

COL6A2基因3′-UTR区域功能单核苷酸多态性位点rs1044598参与miR-4252调节中国汉族人群先天性房间隔缺损

目的:探讨COL6A2基因3′非翻译区(3′-UTR)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点对先天性房间隔缺损(congenital atrial septal defect,ASD)发病风险的影响及其可能的作用机制?方法:搜索PubMed及Hapmap数据库获得COL6A2基因3′-UTR区域中国汉族人群最小等位基因频率>0.05的SNP位点,随后通过miRNA-SNP功能网站预测SNP位点的功能情况并与本课题组前期ASD全基因组关联研究数据库比对,研究SNP位点与ASD的发病关联,最后对可能的功能位点进行功能学研究?结果:rs1044598位点AA基因型较野生TT基因型显著减少了36%的患病风险?HEK293T细胞?H9C2细胞以及SD乳鼠原代心肌细胞荧光素酶报告基因转染实验证实,miR-4252与COL6A2基因rs1044598不同基因型表达质粒共转染后,荧光强度在3个细胞系中均有显著差异 (P < 0.05)?结论:COL6A2基因rs1044598位点的变异可能与ASD的发病风险相关?miR-4252可通过与COL6A2的3′-UTR区域发生有效结合而下调基因的表达,而rs1044598位点的变异参与这一机制并减少ASD的发生?     

姜黄素对人肝细胞HepG2中低密度脂蛋白受体基因表达影响的研究

目的 研究不同浓度姜黄素对人肝细胞HepG2中内源低密度脂蛋白受体(LDLR)表达的影响,在受体水平上探讨姜黄素的调脂作用机制.方法 以荧光试剂标记配体法,利用流式细胞仪技术和荧光显微镜技术研究姜黄素时HepG2细胞LDLR表达活性的影响.利用细胞免疫技术、结合荧光显微镜技术流式细胞术研究姜黄素对HepG2细胞LDLR表达数量的影响.结果 姜黄素可显著增加人肝细胞HepG2内源LDLR的表达(P＜0.05).结论姜黄素能够通过增加人肝细胞HepG2 LDLR的表达起到调节血脂和抗动脉粥样硬化的作用.     

miR-1290与RASAL2基因靶向关系的探索

目的通过构建RASAL2 3′-非翻译区(3′-UTR)双荧光素酶报告载体,探索RASAL2与非编码核糖核酸(ncRNA)miR-1290的靶向调控情况。方法借助在线数据库Targetscan预测miR-1290与RASAL2结合位点;利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增RASAL2基因3′-UTR序列,并以GV272为载体将其连接,分别构建野生型GV272-RASAL2-wt 3′-UTR和突变型GV272-RASAL2-mut 3′-UTR荧光素酶报告基因重组质粒;并将miR-1290及相应阴性对照分别与这两种重组质粒共转染到293T细胞中,通过检测各组荧光素酶活性,探索miR-1290与RASAL2基因的结合情况。结果酶切和测序数据表明:野生型GV272-RASAL2-wt 3′-UTR及突变型GV272-RASAL2-mut 3′-UTR双荧光素酶报告载体构建成功;相较于miR-1290与突变型GV272-RASAL2-mut 3′-UTR共转染组,miR-1290与野生型GV272-RASAL2-wt 3′-UTR共转染组的荧光素酶活性无明显变化(P＞0.05)。结论成功构建了RASAL2 3′-UTR的双荧光素酶报告基因载体,但miR-1290不能与RASAL2结合,不能抑制其表达。     

他汀类药物联合黄连素治疗高脂血症的疗效评估

目的:研究辛伐他汀(simvastatin,SIMVA)联合黄连素(berberine,BBR)治疗高脂血症的临床疗效及安全性?方法:99例高脂血症患者随机分为3组:A组(SIMVA组),B组(BBR组),C组(SIMVA+BBR组)连续治疗8周?观察患者治疗前后的血脂?肝肾功能等变化?动物实验研究把高脂大鼠随机分为高脂组(6只,生理盐水),辛伐他汀[SIMVA,9只,6 mg/(kg·d)]组,黄连素[BBR,9只,90 mg/(kg·d)]组,辛伐他汀[SIMVA,6 mg/(kg·d)]+黄连素[BBR,90 mg/(kg·d)]组,辛伐他汀[SIMVA,9只,12 mg/(kg·d)]组,喂养30天,分别检测TC?TG?LDL-C及LDLR-mRNA水平的变化?结果:临床研究发现联合用药组疗效明显优于单用药组,显效病例数是SIMVA组的1倍,有效率达100%;SIMVA组治疗前后TC?LDL-C值差异有统计学意义(P < 0.01),BBR组和BBR+SIMVA组治疗前后比较TC?TG和LDL-C差异显著(P < 0.01);3组间比较,C组降低TC?TG?LDL-C较A组差异有显著性统计学意义(P < 0.01),C组治疗期间未见明显不良反应?同时,动物实验也提示联合治疗在降低血脂和上调低密度脂蛋白受体(LDLR)上有明显的统计学意义(P < 0.01),6 mg/(kg·d) SIMVA联合有效剂量的BBR治疗高脂血症疗效与12 mg/(kg·d) SIMVA相当?结论: 联合治疗比单用SIMVA或BBR更能有效降低LDL-C,增加BBR来治疗高脂血症患者可以减少他汀类药物用量的50%?BBR作为他汀降脂药的理想补充剂给高脂血症患者提供了一种新的治疗方式?     

SARS-CoV 5''''UTR在基因转录中的启动子活性

目的了解SARS-CoV不同毒株5′UTR RNA的构成特点和差异及其空间结构；研究该序列在真核细胞中的启动子活性。方法用软件DNAStar-MegAlign和BLAST分析SARS-CoV5′UTR序列同源性、RNADraw3．0预测二级结构；构建5′-UTR cDNA序列驱动的荧光素酶基因表达质粒pGL3-5′-UTR，转染HepG2细胞，检测萤火虫荧光素酶的表达；构建一套缺失突变质粒，使其分别3′端残留三个、两个、一个和零个（完全缺失）茎环，检测报告基因的表达；采用5′RACE，查找转录起始位点；将pGt3-5′UTR转染A549、HepG2、VeroE6、HeLa和ECV304．检测报告基因的表达差异。结果SARS-CoV5′UTR全长为264nt，18株有缺失突变均位于5′端。101个SARS-CoV 5′UTR序列中．共发现5个点突变位置：SARS-Cov5′UTRRNA可形成稳定的二级结构。Stem-loop-Ⅱ含多个茎环结构，形成复杂的假结；pGL3-5′-UTR有明显的萤火虫荧光素酶表达；当4个茎环都具备时，荧光素酶相对活性是SV40启动子的约43％；失去第一个茎环后。是SV40启动子的约45％；而失去前两个后，则不表达荧光素酶；转录起始位点在SARS-CoV5′UTR的第56位核苷酸；在五种不同细胞中，表达强度由高到低依次是：A549、HepG2、ECV304、HeLa和VeroE6。结论①SARS-CoV5′UTR序列保守，二级结构可形成4个茎环结构域；②SARS-CoV5′UTR有启动子活性；③在二级结构中，与启动子活性有关的结构域在前两个茎环；④SARS-CoV5′UTR在调控基因转录时，第56位核苷酸及其下游的TRS具有重要作用；⑤多种组织或器官都可为SARS-CoV5′UTR发挥启动子功能提供辅助因子，而以肺源性细胞最为适合。     

低密度脂蛋白受体基因PvuⅡ多态性对高糖低脂膳食诱导的健康青年人血脂比值变化的影响

目的 探讨低密度脂蛋白受体基因(LDLR)PvuⅡ多态性对健康青年人血脂比值的影响及在高糖低脂(HC/LF)膳食诱导的血脂比值变化中的作用.方法 56名[(22.89±1.80)岁]健康志愿者,给予7 d平衡膳食和6 d HC/LF膳食.分别于第1 d、第8 d及第14 d取空腹静脉血,测定血脂水平,计算甘油三酯/高密度脂蛋白-胆固醇(TG/HDL-C)、log(TG/HDL-C)、总胆固醇(TC)/HDL-C、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)/HDL-C值.分离基因组DNA,聚合酶链反应-限制性酶切法分析LDLR PvuⅡ位点多态性.分析不同基因型间血脂比值差异.结果 不同基因型受试者血脂比值的基础值无明显差异.HC/LF膳食前后,无论是在受试人群整体还是男女分组分析,不同基因型之间血脂比值均无明显差异.与HC/LF膳食前相比,在受试人群整体,不同基因型受试者LDL-C/HDL-C和TC/HDL-C均降低(P<0.05).男女分组分析发现,与HC/LF膳食前相比,HC/LF膳食后TC/HDL-C在男性和女性均下降(P<0.05),但不受LDLR PvuⅡ多态性影响;TG/HDL-C和log(TG/HDL-C)仅在女性升高(P<0.05),也不受LDLR PvuⅡ多态性影响;而LDL-C/HDL-C在女性P1P1基因型、P2携带者和男性P1P1基因型下降(P<0.05).结论 LDLR PvuⅡ位点多态性在健康男性青年与HC/LF膳食诱导的LDL-C/HDL-C改变可能相关联.     

急性 ST 段抬高心肌梗死患者低密度脂蛋白受体基因启动子的单核苷酸多态性

目的：初步分析急性ST段抬高心肌梗死（ STEMI）患者低密度脂蛋白受体（ LDLR）基因启动子区9个基因位点的单核苷酸多态性（ SNP）。方法选择经急诊确诊的急性STEMI患者24例（病例组）和健康体检者13例（对照组）,抽取静脉血检测血脂和用于DNA提取,以高分辨溶解曲线方法分析技术检测SNP。比较两组三酰甘油（ TG）、总胆固醇（ TC）、高密度脂蛋白（ HDL）和低密度脂蛋白（ LDL）的水平,以及LDLR基因启动子区9个SNP位点基因型和等位基因频率。结果病例组血清LDL高于对照组（ P＜0.05）,而 HDL低于对照组（ P＜0.05）,两组血清TG、TC比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 LDLR启动子区9个SNP位点的基因型和等位基因频率差异无统计学意义（ P＞0.05）,9个SNP位点的HRM曲线变异未出现群组效应,且出现变异的样品号高度一致。结论急性STEMI患者存在血脂的异常,但其LDLR基因启动子区基因位点未发生变异修饰。     

低密度脂蛋白受体基因多态性与高血压关系的研究

目的 探讨低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)基因HincⅡ多态性与高血压的关系.方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法,测定高血压组86例,对照组120例的LDLR基因型.结果 LDLR分CC、CT、TT三种基因型.高血压组CC型、CT型、TT型分别占18.60%、65.12%、16.28%,对照组分别为1.67%、75.83%和22.50%,高血压组CC型较对照组有增高趋势(P＜0.05).高血压组C等位基因频率为26.74%,对照组为12.92%,高血压组C等位基因频率高于对照组(P＜0.05).结论 高血压组C等位基因频率高于对照组,提示低密度脂蛋白受体C等位基因可能在高血压的发病机制中发挥作用.     

miR-372调控血管生成因子AGGF1的表达并抑制血管生成

目的:研究miR-372(miR-372)对新血管生成因子AGGF1基因的表达调控?方法:通过生物信息学预测找到可能靶向调控AGGF1基因的候选miRNA;通过荧光素酶报告基因实验?荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测等实验证实miR-372对AGGF1基因表达的靶向调控;通过体外血管内皮细胞成管实验检测miR-372对血管生成的影响?结果:生物信息学预测显示miR-372靶向AGGF1;荧光素酶报告基因实验证实miR-372可通过结合AGGF1基因3′-非翻译区(3′-untranslational region,3′-UTR)而抑制其表达;qPCR和Western blot实验分别表明miR-372在mRNA水平和蛋白水平下调AGGF1表达;体外血管生成实验表明miR-372所介导的AGGF1表达下调可明显抑制血管生成?结论:miR-372可通过靶向结合AGGF1基因的3′-UTR下调其表达,并抑制内皮细胞血管生成能力?     

骨桥蛋白在肝癌细胞中转录后调控的研究

目的 分离鉴定在肝癌细胞HepG2 和Hep3B中与骨桥蛋白(OPN)5′非翻译区(5′-UTR)结合后在转录后水平调节OPN mRNA的稳定性的mRNA结合蛋白.方法 利用亲和纯化的方法分离和纯化OPN 5′ UTR结合蛋白,质谱分析消化后的片段以鉴定蛋白;Hep3B细胞瞬时转染真核细胞翻译延长因子 1A(EF1A) siRNA抑制EF1A,HepG2细胞瞬时转染(pcDNA 3.1+EF1A)质粒过表达EF1A,Western blot检测OPN蛋白的表达,real-time PCR 检测OPN mRNA半衰期的变化.结果 质谱分析法确认此结合蛋白为EF1A.在HepG2细胞中过表达EF1A能通过加速OPN mRNA的降解而降低OPN表达;在Hep3B细胞中利用siRNA技术下调EF1A的表达能增强OPN mRNA的稳定性,进而增强OPN的表达.结论 EF1A作为一个去稳定因素作用于OPN 5′UTR,至少部分决定了Hep3B和HepG2细胞中OPN的表达.     

血液透析者低密度脂蛋白受体基因多态性及其对血脂的影响

[目的]探讨血液透析患者低密度脂蛋白受体 (LDLR)基因多态性及其对脂代谢的影响.[方法]生化方法检测 112例血液透析血清脂质水平,多聚酶链反应-限制性片段长度法检测 105例血液透析患者 LDLR内含子 4 TaqⅠ位点与 80例血液透析患者外显子 13 AvaⅡ位点基因多态性.[结果]血液透析患者脂代谢紊乱主要表现为血清甘油三酯、载脂蛋白 B水平显著增高.血液透析组与对照组 LDLR内含子 4 TaqⅠ 位点与外显子 13 Ava II 位点基因型及等位基因分布频率无显著差异(P >0.05). LDLR内含子 4 Taq Ⅰ 位点基因多态性对血脂水平的影响表现为,对照组血清总胆固醇水平按 LDLR内含子 4 Taq Ⅰ位点基因型- /-、 /-、 / 的顺序递减(P< 0.01),但均在正常水平,血液透析患者血清总胆固醇不同基因型无显著差异(P >0.05);血液透析组血清甘油三酯水平按上述基因型顺序递减 (P< 0.05),对照组不同基因型的甘油三酯水平无显著差异(P >0.05). LDLR 外显子 13 Ava Ⅱ 位点基因多态性对血脂水平的影响表现为,对照组基因型为 / 者血清甘油三酯水平显著增高(P< 0.05),不同基因型血液透析患者血脂水平无显著影响 (P >0.05).[结论]正常人 LDLR内含子 4 TaqⅠ 位点存在基因多态性,并对脂代谢有显著影响.血液透析患者该基因多态性与正常人无显著差异,但不同基因型患者脂代谢紊乱有不同特点,其机理与不同基因型血液透析患者 LDLR活性的差异有关.     

中国部分汉族人群GH1基因启动子区单核苷酸多态性与正常人群身高的关系

目的 研究中国部分汉族人群GH1基因启动子近侧区域内的单核苷酸多态性(SNP)与人体身高调控的关系.方法 采用直接测序法进行SNP检测,Logistic回归分析筛查可能与身高相关的基因多态性位点.分别构建所发现的GH1基因启动子区的-308T和-57G突变位点的pGL4荧光素酶报告基因载体,转染入GC细胞后进行双荧光素酶检测分析.结果 中国部分汉族人群GH1基因启动子近侧区域中存在12个SNP,有6个位点多态性的发生频率与白种人存在明显差异(P<0.01). 荧光素酶检测结果示野生型荧光表达量高于-57和-308位点突变型,差异有统计学意义(P<0.01).结论 GH1基因启动子邻近区域在中国部分汉族人群中表现出高度多态性,并存在一定的人种差异,其中有两处SNP可能影响到人群的身材高矮.     

中国部分汉族人群GH1基因启动子区单核苷酸多态性与正常人群身高的关系

目的 研究中国部分汉族人群GH1基因启动子近侧区域内的单核苷酸多态性(SNP)与人体身高调控的关系.方法 采用直接测序法进行SNP检测,Logistic回归分析筛查可能与身高相关的基因多态性位点.分别构建所发现的GH1基因启动子区的-308T和-57G突变位点的pGL4荧光素酶报告基因载体,转染入GC细胞后进行双荧光素酶检测分析.结果 中国部分汉族人群GH1基因启动子近侧区域中存在12个SNP,有6个位点多态性的发生频率与白种人存在明显差异(P<0.01). 荧光素酶检测结果示野生型荧光表达量高于-57和-308位点突变型,差异有统计学意义(P<0.01).结论 GH1基因启动子邻近区域在中国部分汉族人群中表现出高度多态性,并存在一定的人种差异,其中有两处SNP可能影响到人群的身材高矮.     

CYP3A4＊1G基因多态性及功能的初步探讨

采用双荧光素酶报告基因系统分析CYP3A4＊ 1G多态性对CYP3A4基因转录活性的影响.构建含CYP3A4＊ 1G突变位点的荧光素酶基因表达载体,用Lipofectamine 2000转染HepG2细胞,化学发光法检测荧光素酶活性. 应用双荧光素酶报告基因系统检测显示,pGL3-promoter-A质粒转染后荧光素酶活性显著高于pGL3-promoter-G（P=0.022＜ 0.05）. CYP3A4＊ 1G能够增强荧光素酶基因的表达,可能增强CYP3 A4基因的转录活性.     

低密度脂蛋白受体LDLR基因在胃癌中的表达及意义

目的 检测低密度脂蛋白受体LDLR在胃癌肿瘤细胞系和组织中基因水平的表达,并探讨其与胃癌的相关性.方法 利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测7株胃癌细胞系及其56对胃癌组织和癌旁配对组织中LDLR基因的mRNA水平表达状况.并对所得数据做相关性研究分析.结果 LDLR在7株胃癌细胞系的mRNA水平均有表达且有差异,其中N87、MKN45表达较高.LDLR在56对胃癌和癌旁配对组织中的mRNA水平表达有差异,肿瘤组织表达水平71.4％ （40/56）,高于癌旁配对组织39.3％ （22/56）,差异有显著性（P＜0.01）.结论 LDLR基因在不同胃癌细胞系和胃癌组织中高表达,且胃癌肿瘤组织表达高于癌旁组织,提示低密度脂蛋白受体LDLR基因表达与胃癌相关.     

microRNA-1271靶向调控白血病细胞CYLD蛋白的表达

目的探讨人白血病细胞中微小RNA(microRNA)-1271对CYLD蛋白表达的调控作用。方法 qRT-PCR检测microRNA-1271在不同的人白血病细胞系、临床初诊未治的几种类型原代白血病细胞、正常人外周血单个核细胞中的表达差异,利用 Targetscan 信息学预测软件预测 microRNA-1271靶向CYLD基因,构建携带靶基因野生型及突变型3’非翻译区(3’UTR)(缺失了整段预测的microRNA-1271结合序列)的双荧光素酶报告基因质粒,采用脂质体 Lipo-fectamine 3000包裹双荧光素酶重组质粒及 microRNA-1271模拟物(mimic)或阴性对照,共转染HEK293A细胞,应用双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定荧光素酶活性。 FAM标记的microRNA-1271抑制物和阴性对照分别核转染至人白血病细胞系K562细胞,Western blot法检测CYLD蛋白水平的表达变化。结果 microRNA-1271在不同人白血病细胞系以及临床初诊未治的原代白血病细胞中的表达均明显高于正常人外周血单个核细胞,双荧光素酶报告基因实验验证CYLD是 microRNA-1271的潜在靶基因;K562细胞中转染microRNA-1271抑制物下调 microRNA-1271后, Western blot法检测结果显示CYLD蛋白水平明显上调。结论人白血病细胞中microRNA-1271的表达上调,下调microRNA-1271后可以促进靶基因CYLD蛋白的表达, microRNA-1271有可能成为白血病治疗的新靶点。     

GPC3启动子报告基因载体构建与转录活性分析

目的 构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)启动子荧光素酶报告基因载体,并验证其转录活性.方法 以人类基因组DNA为模板,PCR扩增GPC3启动子基因片段,克隆到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体上,通过转染HepG2细胞检测荧光素酶活性来验证GPC3启动子的转录活性.结果 GPC3基本启动子和全长启动子分别成功构建到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中,GPC3基本启动子具有很强的转录活性,而全长启动子的转录活性比基本启动子高4倍以上.结论 成功构建了GPC3启动子荧光素酶报告基因载体,为研究GPC3转录调控提供了重要手段.     

miR-132在上皮性卵巢癌中的表达及作用机制研究

目的分析微小RNA-132(miR-132)在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及其对上皮性卵巢癌细胞迁移与侵袭的作用机制。方法收集2018年10月—2020年2月蚌埠医学院第一附属医院妇瘤科手术切除的卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本36份,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢癌组织、癌旁组织中miR-132相对表达水平;体外培养人正常卵巢上皮细胞(IOSE80,正常对照组)和卵巢癌SKOV3细胞,对卵巢癌SKOV3细胞进行转染并分为空白对照组、LV-NC(阴性对照)组和LV-miR-132 mimic(模拟物)组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-132、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA相对表达水平,Transwell法检测各组细胞侵袭率,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,双荧光素酶报告基因检测miR-132与MAPK1靶向关系,蛋白免疫印迹法检测各组细胞MAPK1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白相对表达水平。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中miR-132相对表达水平显著降低(t/P=19.166/0.000)。与正常对照组比较,卵巢癌SKOV3细胞中miR-132相对表达水平显著降低(P<0.05),MAPK1 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞miR-132相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞侵袭率、各时间点迁移率、MAPK1 mRNA和蛋白、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达水平均显著降低(F/P=19.166/0.000,42.795/0.000,64.543/0.000,40.513/0.000,41.805/0.000,32.021/0.000,81.672/0.000,88.132/0.000)。miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组的荧光素酶相对活性低于miR-132 NC+MAPK1-Wt 3′-UTR组,miR-132 mimic+MAPK1-Mut 3′-UTR组的荧光素酶相对活性高于miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组(F/P=17.369/0.000)。结论miR-132在上皮性卵巢癌组织及细胞中均低表达,上调miR-132可能通过靶向下调MAPK1来抑制卵巢癌细胞迁移、侵袭。     

氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖及 circRNA-CER表达的影响

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后环状RNA circRNA-CER(circRNA-100876)的表达及其对HUVEC增殖的影响。方法 分别以不同浓度ox-LDL(40、60、80、100及200 mg/L)刺激HUVEC 24 h,以及以100 mg/L ox-LDL刺激HUVEC 6、12、24及48 h,利用实时荧光定量PCR验证circRNA-CER在细胞中的表达水平;构建circRNA-CER特异性过表达质粒并进行细胞转染,采用CCK8实验研究circRNA-CER在血管内皮细胞增殖中的作用;荧光定量PCR检测circRNA-CER对miR-136表达的影响;Western blot检测过表达circRNA-CER后血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平,荧光素酶报告基因验证circRNA-CER与miR-136、miR-136与VEGF-3′UTR的相互作用。结果 随ox-LDL处理浓度增加,circRNA-CER在HUVEC中的表达量呈下调趋势,并在100 mg/L时差异有统计学意义(P<0.05);在用该浓度ox...