负压屏障设施动物饲养笼具的选择及其感染风险的识别

目的生物安全实验室的感染性动物实验大部分经空气传播的致病因子可利用安全隔离装置有效控制,啮齿类动物饲养笼具作为一种常用设备对其要求仍不明确。本研究将测试本实验室(负压屏障设施)模拟感染动物实验在使用开放和密闭2种啮齿类动物笼具的病原暴露风险,并评价本设施的硬件条件和管理措施对于风险控制的水平。方法使用具有卡那霉素抗性的大肠杆菌(Kan~+,E.coli,DH5α)作为指示微生物,测试开放笼盒饲养、密闭笼盒(与外界无压力梯度)饲养、生物安全柜动物换笼等操作的暴露风险,并对负压设施内外的指示微生物进行监测。结果动物在负压屏障设施中使用开放笼具饲养存在病原暴露风险,负压屏障设施一定程度上可以控制病原的播散;动物在无压力梯度的密闭笼盒的饲养环节未能检测到指示菌;密闭笼盒使用生物安全柜设备进行换笼操作可有效控制病原暴露风险。结论在负压屏障设施内使用密闭笼盒,在笼盒与外界无压力梯度的情况下亦可保障生物安全风险的有效控制。     

广东省屏障设施小鼠群中小鼠肝炎病毒感染情况

目的了解我省屏障设施小鼠群中小鼠肝炎病毒（MHV）感染情况。方法收集2003-2007年实验动物小鼠血清样品的监测数据,并对MHV感染情况有关数据进行分析。结果在6个屏障设施内抽检小鼠,5个屏障设施内抽检的样品检出MHV毒抗体阳性,检出率分别为1.4%,2.4%,2.8%,2.6%,13.2%。品系方面主要分布在BALB/c,BALB/c-nu/nu,NIH三个品系,检出率分别为3.6%,14%,7.1%。结论屏障设施小鼠群中小鼠肝炎病毒感染较为普遍。     

利用微生物气溶胶发生器评估较低压差状态下独立通风笼盒（IVC）内微生物污染情况

目的 利用微生物气溶胶发生器制造微生物感染环境,评估在低压差条件下独立通风笼盒（IVC）内微生物的污染情况.方法 IVC压差分别设定为3 Pa和10 Pa,放置于负压屏障环境内.分别在笼架外四角、中间的笼盒盖上以及对应的笼盒内放置培养皿,细菌培养皿为血平皿,病毒培养皿为内置直径2 cm吸附滤纸的玻璃平皿.将微生物气溶胶发生器放置于距离笼架 2 m处,间隔48 h分别雾化5 ml的1.9×108个/ml的金黄色葡萄球菌和2.4×10-4 TCID50的小鼠脑脊髓炎病毒,雾化停止后30 min、60 min,用培养法及荧光定量PCR法检测预先放置的平皿内病原.结果 大、小鼠IVC在设定为10 Pa及3 Pa时,实际测定压差分别为2.2 Pa和7.8 Pa,经培养法及荧光定量PCR法检测,金黄色葡萄球菌培养数量在30 min检测最低值为222个/平皿,60 min检测均大于500个/平皿,而放置于笼盒内的平皿未见生长;小鼠脑脊髓炎病毒拷贝数在30 min检测最低为1.23×102,60 min最低为1.61 × 104,而放置于笼盒内的平皿未能检出.结论 IVC笼盒在最小压差为2.2 Pa时也能够防止外来病原的进入.     

独立通风笼(IVC)的物理指标研究初探

目的 检测国内外独立通风笼（IVC）部分物理指标，为今后制定国家及行业标准提供参考。方法 依据GB 14925—2001实验动物环境及设施、90／219／EEC及98／81／EC等标准，对IVC产品部分指标进行检测。结果 与屏障级动物实验设施相比，IVC系统噪声指标普遍过高；压差、洁净度等指标各厂家依据标准不同，浮动范围极大。结论 IVC设备由于自身特点，物理标准不能完全照搬屏障级动物实验设施要求。     

应用IVC笼具进行清洁小鼠繁育生产及动物实验探讨

目的:探讨独立通气笼盒(IVC设施)进行清洁小鼠的繁殖生产及动物实验的效果。方法:应用IVC笼具进行清洁小鼠繁育生产及动物实验并通过严格的软件管理。结果:小鼠繁殖生长良好,微生物质控指标达到清洁小鼠标准要求,科研动物实验结果稳定、可靠。结论:说明IVC笼具可以生产清洁级小鼠及进行动物实验,本试验的成功对于推动基层科研动实验条件的提高具有现实的意义。     

实验动物微生物、寄生虫抽样调查及分析

目的 监控实验动物微生物、寄生虫质量.方法 细菌检测:常规培养、生化鉴定,免疫荧光试验(IFA)查抗体.病毒检测:酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫酶试验(IEA)、免疫荧光试验(IFA)、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HAI)方法检测抗体.真菌检测:常规培养、镜检.寄生虫检测:涂片镜检、间接血凝试验(IHA)方法查抗体.结果 五年来,SPF级动物检出了绿脓杆菌、嗜肺巴斯德菌、金黄色葡萄球菌、鞭毛虫,另外,泰泽病原体、小鼠细小病毒(MVM),小鼠仙台病毒(M-SC)抗体阳性.清洁级动物检出了蠕虫,且泰泽病原体、大鼠仙台病毒(R-SC)、小鼠仙台病毒(M-SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)抗体阳性.普通级动物检出了志贺菌、皮肤病原真菌、体外寄生虫、弓形虫,同时检出兔出血症病毒(RHDV)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬肝炎病毒(ICHV)未达抗体保护效价,犬布鲁杆菌、猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)抗体阳性.不同生产企业动物质量差异很大,有的动物合格率达100%,有的则同一动物有多种病原感染.结论 实验动物微生物、寄生虫质量控制有待加强.     

医学实验动物屏障环境内独立通气笼具的安放

目的探讨屏障系统内安放独立通气笼盒（Individually Ventilated Cages，IVC）双保险模式饲养实验啮齿类动物，力求动物饲养、实验的全过程达到SPF级；降低动物实验室硬件建造费和维持费（节能）。方法通过改建一间屏障环境动物实验室，对空气洁净度等相关项目数据按GB14925-2001方法检定，并在该实验室内安放SPC级IVC饲养动物；在超净工作台内做打针投药等动物实验。结果改建的屏障环境动物实验室和IVC，各项检测数据均达到新国标要求。结论医学实验动物屏障环境内安放IVC饲养啮齿类动物、做动物实验，这种双保险模式能全过程达到SPF级要求；饲养、实验人员操作较简便，节能。     

小鼠肝炎病毒检测方法研究进展

小鼠肝炎病毒（Murine Hepatitis Virus, MHV）是一种冠状RNA病毒,常呈潜伏性感染,影响实验动物的质量和动物实验的结果。及时的检测出MHV可控制其流行范围和预防其对动物实验结果的影响。本文就近年来对MHV的检测与诊断方法做出综述,分析了MHV感染对实验动物及动物实验的影响,分析了现有MHV检测方法的优劣,为进一步研究MHV提供理论依据。     

屏障内独立通风笼与敞口笼饲养雄性Balb/c小鼠的比较

目的：采用独立通风笼（individually ventilated cage, IVC）饲养实验小鼠,积累运行经验和背景数据。方法80只5周龄 SPF 级雄性 Balb/c 小鼠,在屏障内同室分别饲养在换气参数为70、50和30次/h 的 IVC 系统及敞口笼内8周,各设置5只/笼和10只/笼2种饲养密度;每周逐只称重、第8周进行大体剖检,主要脏器称重;以Excel 软件绘制体重曲线,以 SPSS 软件统计各饲养组两两间差异。结果①5只/笼饲养的动物体重曲线优于10只/笼;②与设置为30和70次/h 换气的 IVC 相比,无论是5只/笼或10只/笼饲养,换气50次/h 的 IVC 饲养动物体重曲线平滑度及趋势均更加接近5只/笼传统敞口饲养;③组间体重未因饲养设施或密度因素造成显著差异（P＞0.05）;④IVC 在30次/h 换气5只/笼饲养比敞口10只/笼饲养时的肝脏系数显著高（P ＜0.05）,该参数的其它组间、及其它脏器系数值均未见组间差异显著（P ＞0.05）。结论根据实验结果,推荐该型号 IVC 换气次数设置为50次/h,饲养 Balb/c 小鼠密度5只/笼为佳。     

ICR小鼠自然感染小鼠肝炎病毒后抗原抗体的变化

目的了解小鼠肝炎病毒(MHV)污染的设施内,ICR小鼠自然感染后MHV抗原抗体存在情况。方法选择50只ICR小鼠,通过更换"脏垫料"的方式进行饲养,分别在实验第2,4,8,14,21,28,35,42,56和84天各剖杀动物5只,采集血清、盲肠内容物、粪便、肝脏以及肺脏检测抗原抗体分布情况。结果实验开始第2天,肺脏中检出小鼠肝炎病毒,检出率为20%(1/5),第4天开始,肝脏、肺部、盲肠以及粪便中均可检出小鼠肝炎病毒;84天后,肺脏、盲肠、粪便和肝脏阳性检出率降为0。实验第8天,血清中抗体检出阳性,阳性率为100%(5/5),直至第84天实验结束,抗体阳性率仍维持在100%(5/5)。结论血清学方法可作为日常监督主要诊断方法,而抗原检测方法只能应用于早期诊断。     

ICR小鼠自然感染小鼠肝炎病毒后的抗原抗体变化

【摘要】 目的 了解小鼠肝炎病毒(MHV)污染的设施内,ICR小鼠自然感染后MHV抗原抗体存在情况。方法 选择50只ICR小鼠,通过更换“脏垫料”的方式进行饲养,分别在实验第2,4,8,14,21,28,35,42,56和84天各剖杀动物5只,采集血清、盲肠内容物、粪便、肝脏以及肺脏检测抗原抗体分布情况。结果 实验开始第2天,肺脏中检出小鼠肝炎病毒,检出率为20%（1/5）,第4天开始,肝脏、肺部、盲肠以及粪便中均可检出小鼠肝炎病毒; 84天后,肺脏、盲肠、粪便和肝脏阳性检出率降为0。实验第8天,血清中抗体检出阳性,阳性率为100%（5/5）,直至第84天实验结束,抗体阳性率仍维持在100%（5/5）。结论 血清学方法可作为日常监督主要诊断方法,而抗原检测方法只能应用于早期诊断。 【关键词】小鼠肝炎病毒 自然感染 抗原抗体     

广州市药检所实验动物屏障设施的运行和管理

广州市药品检验所在加强实验动物屏障设施硬件建设的同时，狠抓管理制度和操作规程等“软件”建设。实验动物屏障设施标准操作规程（sop)的制定，既加强了设施的管理，使其保持良好运行状态，又规范了设施内作业人员的操作程序，保证进入了屏障内的所有物品得到有效的灭菌处理。清洁级动物饲养管理工艺的完善使得实验小鼠的数量和质量都能满足药品检定的需要，有力地促进了药品检验和新药开发研究的进行。     

独立通风笼盒内换气次数与压差差异性分析

目的评估独立通风笼盒(IVC)使用过程中,在设定参数下,同一笼架内各个笼盒换气次数及内外压差之间的差异。方法屏障环境内,以单面IVC为检测对象,设备参数设置:换气次数50次/h、40次/h,压差+20 Pa、+10 Pa,检测笼盒送风口的风速及笼盒内外压差。结果设定换气次数与实测笼盒内换气次数存在差异,实测值在设定值的±30次/h范围内波动,并且同一笼架上笼盒与笼盒之间的换气次数实测值差异较大,在30次/h~60次/h;不同位置笼盒间内外压差的差异较小,实测值均在设定值的±10 Pa范围内波动。结论为保证笼盒内微环境的一致性,减少环境差异对实验结果的影响,需进一步研究如何将同一架IVC笼盒之间的换气次数和内外压差波动控制在较低范围。     

北京地区2011-2012年度实验小鼠POLY病毒感染情况调查与分析

目的使用血清学方法和PCR方法对北京地区实验小鼠多瘤病毒（POLY）感染情况进行初步调查和评估分析。方法对2011-2012年度我中心收检的不同实验动物生产设施的SPF级、清洁级小鼠血清130份、不同实验动物使用机构实验小鼠血清67份,共197份样品进行POLY病毒血清学检测;根据多瘤病毒保守序列设计引物,应用PCR方法检测不同动物生产设施的SPF级、清洁级小鼠的80份肠内容物样品是否存在POLY病毒。结果抽检的2011-2012年度实验动物生产设施的SPF级、清洁级小鼠血清130份未检出POLY病毒抗体;实验动物使用机构实验小鼠血清样品检出POLY病毒抗体7/67阳性。使用的PCR方法检测实验动物生产设施不同级别的80份小鼠肠内容物未检出POLY病毒核酸。结论北京地区实验动物饲养机构的实验动物基本排除POLY病毒的潜在污染,实验动物使用机构中实验用动物仍然存POLY病毒的潜在污染。实验动物生产设施对各级别实验动物应每年度至少进行一次全项病毒检测,以便更客观的了解实验动物质量;实验动物使用机构应对如何加强实验中动物的质量控制问题加以关注。     

实验小鼠和大鼠的病毒学监测(1984～1989)

1984～1989年连续地观察了本所饲养场的一、三级实验大、小鼠共1685只,其监测13种病毒的血清学流行情况,发现一级大、小鼠流行最广者为仙台病毒、冠状病毒(MHV和RCV/SDAV)和细小病毒(RV,H-1刊MVM);小鼠病毒的感染其次为PVM,GD_7,Polyoma,EDIM,Reo-3;LCM,Ect,MAd,KV偶有低检出率。大鼠病毒的感染,86年Reo-3检出阳性,LCM,EHF和MAd未检出阳性;三级小鼠只曾检出仙台病毒和鼠肝炎病毒阳性,其他均阴性,三级人鼠未检出有阳性例。     

湖南省2004～2006年实验动物病毒学质量监测结果分析

目的了解湖南省实验动物病毒学质量。方法按GB14922.2-2001和GB14926-2001进行,在相关单位生产繁殖群以单纯随机抽样原则采样检测。结果实验小鼠MHV和Sendai病毒出现抗体阳性并出现疫情;普通级兔出血症项目不合格;实验大鼠未检出相关病毒。结论实验动物病毒学质量存在较大问题,应加强监测。     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-3/mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法

目的 建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法 根据已发表的小鼠肝炎病毒（MHV）S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果 建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1pg/μl,可检测病毒最小滴度为10-3.ml-1。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与GenBank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论 建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

实验动物大、小鼠冠状病毒的血清学调查与分析

实验动物是冠状病毒的重要自然宿主,具有较高的感染率。它可以引起小鼠的病毒性肝炎(MHV),大鼠冠状病毒病(RCV)感染,大鼠涎泪腺炎,猫传染性腹膜炎,还能引起犬和兔的感染。因此,调查目前实验动物的冠状病毒感染情况,对探究SARS病的起源和开展SARS病的防治以及模型研究是十分必要的。1　材料和方法11　大小鼠血清的采集　用摘眼球采血方法对各有关单位的实验大、小鼠进行采血,分离血清并置-20℃以下冰箱保存待检。12　MHV和RCV抗体ELISA检测试剂盒　购自中国药品生物制品鉴定所,该试剂盒由抗原包被板、稀释液、阴性血清对照、阳性血…     

三种小鼠肠道病毒核酸检测技术在小鼠健康监测中的应用

目的应用核酸检测技术检测小鼠盲肠内容物中MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒,并与血清学检测结果相比较,分析核酸检测在小鼠健康监测中的适用性。方法随机选取本实验室接收的小鼠盲肠内容物样品,提取核酸,应用荧光定量PCR技术检测MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒;并与其血清学抗体检测结果做关联分析。结果在272份样品中,MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒检出率分别为17.3%,18.8%,16.9%;MHV、Reo-3核酸检出量多呈低拷贝状态;与血清学抗体检测结果的关联分析表明3种病毒的核酸检测结果与抗体检测结果不完全相关。结论实验动物小鼠群体中存在携带MHV,Reo-3,MNV三种病毒的可能,作为血清学抗体检测技术的补充,核酸检测可作为高敏感性的方法应用于实验动物群体的健康监测。