禽流感H5N1亚型病毒感染BALB/c小鼠的免疫应答

目的 研究禽流感H5N1病毒感染BALB/c小鼠后对宿主细胞免疫功能和细胞因子水平变化的影响,探讨禽流感H5N1病毒感染哺乳动物的免疫发病机制.方法 选用鹅源禽流感H5N1病毒感染BALB/c小鼠,采用流式细胞仪检测血液和脾脏T淋巴细胞及其亚群的变化,采用ELISA检测血液中细胞岗子(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-18、IL-10、IL-2)及禽流感H5N1病毒特异性抗体的变化.结果 禽流感H5N1病毒感染可引起对宿主短暂的、可恢复的细胞免疫功能损伤:血液CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞数量于染毒后第2～4天下降(第4天为最低值),脾脏T淋巴细胞数最于染毒后第5～8天下降(第6天为最低值),然后均逐渐恢复到正常水平.染毒后血液细胞因子变化表现为:血清IFN-γ、TNF-α水平下降,IL-4、IL-18、IL-10水平上升,IL-2水平无明显变化.从感染第7天开始检测H5N1禽流感特异性抗体为阳性,抗体水平逐渐升高至实验结束的感染第14天.结论 H5N1禽流感病毒感染可引起宿主T细胞免疫功能低下是其主要的免疫病理改变之一,细胞因子表达失平衡或过多的表达都可能对宿主产生免疫病理损伤.

Abstract：

Objective To study the cell immunity and eytokines responses to avian influenza A H5N1 virus infections in a BALB/c model to better understand the pathogenesis of H5N1 avian influenza disease. Methods Two hundred and twenty BALB/c mice of the infected group were inoculated with 0.1 ml (10-4.875 TCID50) of A/Goose/Guangdong/NH/2003 ( H5N1 ) virus intra-nasally. Fifty control mice received noninfectious allantoic fluid and another fifty control mice received normal sodium. Blood and spleen samples were collected from the live mice every 24 h during the 14 d post-infection. The changes of CD3 + T cells , CD4 + T cells, CD8 + T cells for cell immunity in blood circulation and spleen were detected by flow cytometry. And the cytokines and antibody responses in blood circulation were detected by ELISA. Necropsy was performed on mice that died during the experiment and those euthanized at end of study. Results Avian influenza A( H5N1) virus infections can make damages to the cell immune system transiently. The CD3 + T cells, CD4 + T cells, CDS + T cells declined at 24 days post infection in blood circulation and declined at 5-8 days in spleen, then recovered to the normal level gradually. The eytokines responses to the infections can be detected: the level of IFN-γ,TNF-α declined, IL-4, IL-18, IL-10 increased, and IL-2 changed little. The antibody increased rapidly from day 7 post infection until the end of the study (day 14 post infection). Conclusion Collectively, avian influenza A(H5N1) virus can cause cell immunity deficiency and an imbalance in the level of eytokines, which may contribute to the unusual severity of disease caused by the H5N1 avian influenza virus.     

Herbert螺钉治疗非稳定型腕舟骨骨折

稳定的腕舟骨骨折可通过手法复位、石膏外固定等治疗获得愈合,但非稳定型腕舟骨骨折治疗后易发生骨不连,必须进行手术治疗.2005年4月-2008年3月,笔者应用Herbert螺钉治疗非稳定型腕舟骨骨折12例,疗效满意.现报告如下.     

跟骨钢板内固定治疗跟骨粉碎性骨折

我们采用钢板固定20例22足SandersⅢ、Ⅳ型跟骨骨折。随访18例,骨折全部愈合,B hler角平均为32°,Gissane角平均为130°,优良率为86%。认为跟骨钢板固定是一种治疗跟骨粉碎骨折的有效方法。     

杠香生药学鉴别研究

目的研究杠香生药学特征,为杠香质量标准的制定提供依据。方法采用性状鉴定、显微鉴定及理化 鉴定方法进行研究。结果杠香呈长圆柱状、扁块状或不规则块状,其色泽丰富,花纹多样;木质多坚硬致 密,入水沉,具花香、蜜香、降香及椰香等多种香气;味淡微涩、回甘。杠香根部横切面木射线宽多1~2 列 细胞,导管多单个、偶见数个成群,轴向薄壁组织带状,与纤维束相间排列。切向纵切面木射线略叠生,宽多 1~2 列细胞,高多5~24 个细胞;导管为具缘纹孔短节导管;木薄壁细胞长方形或一端尖锐,壁连珠状增厚。 径向纵切面木射线横向带状,为异形细胞射线,与木纤维垂直相交。茎部三切面显微与根部相似。粉末及解离 组织中主含木纤维细胞、具缘纹孔导管、木射线细胞、木薄壁细胞。化学成分预试验结果表明,杠香除含有挥 发油外,尚可能含有糖类、有机酸类、酚类、鞣质类、黄酮类、甾体类、三萜类、强心苷类、生物碱类等成 分。所建立的薄层色谱方法分离度较好,可用于杠香的专属性鉴定。结论对杠香性状、显微特征进行了鉴 别,建立了杠香的薄层色谱鉴别方法,并对其化学成分进行初步研究,可为杠香的专属性鉴定及质量标准研究 提供参考。     

实验室病原菌检测能力的自我评估

目的 通过国际实验动物科学协会(ICLAS)提供的盲样对本实验室微生物检测能力进行自我评估.方法 将ICLAS提供的7个盲样接种到血平板培养并纯化,依次通过革兰染色、氧化酶试验和触酶试验选择相应的梅里埃生化条上机进行鉴定.对于上述方法无法确认的样品则采用PCR和基因测序的方法进一步鉴别.结果 对7个盲样进行分析后,最终确认1号为金黄色葡萄球菌,2号为铜绿假单胞菌,3号为肺炎链球菌,4号为欣氏鲍特菌,5号为粘质沙雷菌,6号为牛棒状杆菌,7号为嗜肺巴斯德杆菌,检测结果与ICLAS提供结果一致.结论 本实验室病原菌检测质量可靠,实验人员的检测水平合格.     

小鼠诺如病毒分离鉴定及病毒衣壳蛋白（VP1）基因测序分析

目的 对来自广东地区感染小鼠诺如病毒（Murine Norovirus,MNV）的小鼠进行病毒分离鉴定,对病毒的衣壳蛋白（VP1）基因进行测序和序列分析,绘制系统发生树,了解广东地区MNV的分子遗传特征和进化来源。方法 采用RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的小鼠样本进行病毒分离,通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验、测序方法对病毒分离株进行鉴定。应用RT-PCR技术针对15株MNV分离株的VP1基因的1626个核苷酸片段进行基因扩增,将扩增产物连接在pMD18-T 载体后转化到大肠杆菌中进行克隆。通过氨苄青霉素平皿筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定及序列分析。将这15 株MNV分离株与从GenBank获得的19株MNV参考株进行序列比较分析,基于VP1基因的1626核苷酸片段构建系统发生进化树,一起进行分子流行病学研究。结果 从80个小鼠样本中分离到了15株MNV病毒,通过细胞病变试验、RT-PCR试验、间接免疫荧光试验和测序分析鉴定确认分离到的病毒为MNV。序列分析结果显示MNV分离株的VP1蛋白基因全长均为1626个核苷酸,广东地区15株MNV分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别在89.7~100%和94.8~100%之间, 15株MNV分离株与其他19株MNV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在87.5~92.9%和92.4~98.2%之间。进化树分析表明来自设施A和设施D的13株病毒之间的亲缘关系较近,同属一个进化分支。来自设施B 的ZD-1毒株和设施C的ZYY-163毒株与来自广东（K162）、日本（S7-P2、S7-PP3）、韩国（K4）和德国（Berlin/04/06/DE、 Berlin/05/06/DE）同属另一个进化分支。结论 成功分离到15株MNV病毒。遗传进化分析表明广东地区的MNV分离株来源并不相同,来自设施B和设施C的MNV分离株与国外分离株的亲缘关系较近,而来自设施A和设施D的13株MNV分离株可能是本地固有的毒株。     

外环境湿度和换气次数对独立通风笼盒微环境湿度和氨浓度的影响

目的：评估在独立通风笼盒（IVC）所处环境不同湿度条件下,IVC 不同换气次数时,大、小鼠 IVC 微环境湿度和氨浓度的变化。方法屏障环境内,以7 d 为换笼周期,分别设定室内环境低湿（40％）、中湿（50％）、高湿（60％）,IVC 换气次数为40次/h、60次/h 时,对3个品牌大、小鼠 IVC 微环境进行测定,观察笼盒内湿度和氨浓度的变化。结果当室内环境为低湿条件,小鼠和大鼠 IVC 换气次数设置为40次/h 时;当室内环境为中湿条件,小鼠换气次数设置为40次/h、大鼠换气次数设置为60次/h 时;当室内环境为高湿条件,小鼠换气次数设置为60次/h 时,笼盒内微环境均基本能够满足 GB14925-2010对湿度和氨浓度的要求。而在高湿情况下,即使大鼠 IVC换气次数置为60次/h 也不能满足要求。结论室内环境湿度和 IVC 换气次数是影响 IVC 微环境的关键指标,只有依据室内环境条件合理设置 IVC 换气次数才能较好地维护 IVC 微环境和达到有效管理的目的。     

ICR小鼠自然感染小鼠肝炎病毒后抗原抗体的变化

目的了解小鼠肝炎病毒(MHV)污染的设施内,ICR小鼠自然感染后MHV抗原抗体存在情况。方法选择50只ICR小鼠,通过更换"脏垫料"的方式进行饲养,分别在实验第2,4,8,14,21,28,35,42,56和84天各剖杀动物5只,采集血清、盲肠内容物、粪便、肝脏以及肺脏检测抗原抗体分布情况。结果实验开始第2天,肺脏中检出小鼠肝炎病毒,检出率为20%(1/5),第4天开始,肝脏、肺部、盲肠以及粪便中均可检出小鼠肝炎病毒;84天后,肺脏、盲肠、粪便和肝脏阳性检出率降为0。实验第8天,血清中抗体检出阳性,阳性率为100%(5/5),直至第84天实验结束,抗体阳性率仍维持在100%(5/5)。结论血清学方法可作为日常监督主要诊断方法,而抗原检测方法只能应用于早期诊断。     

TCRVβ基因谱系分析在AIDS疾病T细胞克隆性研究中的应用

对于T淋巴细胞TCRVB基因家族以及T细胞的克隆性的研究是近年的热点问题.通过对艾滋病人(模型)的TCRVβ基因谱系分析,测定特定CDR3长度及序列出现的频率能反映T细胞克隆扩增的程度和功能状态,进而有助于对MDS的临床诊断、免疫机制、药物或疫苗的治疗效果等的理解.     

禽流感H5N1亚型病毒对小鼠白细胞数值的影响

目的研究BALB/c小鼠经人工感染禽流感H5N1亚型病毒后的白细胞数值的变化。方法以禽流感H5N1亚型病毒通过静脉和鼻腔接种小鼠,分别在接种0～7d和0￣11d取血进行血细胞计数和分类,同时对静脉接种方法进行0～8h的短时间监控。结果静脉接种途径在接种病毒后2h,小鼠的白细胞总数、粒细胞及淋巴细胞数就显著降低,白细胞总数及淋巴细胞数在接种第3天、粒细胞数在第2天恢复正常而后均显著升高;而鼻腔接种仅在1～3d淋巴细胞数有所降低,而后恢复正常;1～6d白细胞总数及粒细胞数显著升高,而后恢复正常。结论人工接种禽流感H5N1亚型病毒对小鼠的白细胞数值影响明显,静脉接种比鼻腔接种影响更大。