实验室病原菌检测能力的自我评估

目的 通过国际实验动物科学协会(ICLAS)提供的盲样对本实验室微生物检测能力进行自我评估.方法 将ICLAS提供的7个盲样接种到血平板培养并纯化,依次通过革兰染色、氧化酶试验和触酶试验选择相应的梅里埃生化条上机进行鉴定.对于上述方法无法确认的样品则采用PCR和基因测序的方法进一步鉴别.结果 对7个盲样进行分析后,最终确认1号为金黄色葡萄球菌,2号为铜绿假单胞菌,3号为肺炎链球菌,4号为欣氏鲍特菌,5号为粘质沙雷菌,6号为牛棒状杆菌,7号为嗜肺巴斯德杆菌,检测结果与ICLAS提供结果一致.结论 本实验室病原菌检测质量可靠,实验人员的检测水平合格.     

小鼠诺如病毒分离鉴定及病毒衣壳蛋白（VP1）基因测序分析

目的 对来自广东地区感染小鼠诺如病毒（Murine Norovirus,MNV）的小鼠进行病毒分离鉴定,对病毒的衣壳蛋白（VP1）基因进行测序和序列分析,绘制系统发生树,了解广东地区MNV的分子遗传特征和进化来源。方法 采用RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的小鼠样本进行病毒分离,通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验、测序方法对病毒分离株进行鉴定。应用RT-PCR技术针对15株MNV分离株的VP1基因的1626个核苷酸片段进行基因扩增,将扩增产物连接在pMD18-T 载体后转化到大肠杆菌中进行克隆。通过氨苄青霉素平皿筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定及序列分析。将这15 株MNV分离株与从GenBank获得的19株MNV参考株进行序列比较分析,基于VP1基因的1626核苷酸片段构建系统发生进化树,一起进行分子流行病学研究。结果 从80个小鼠样本中分离到了15株MNV病毒,通过细胞病变试验、RT-PCR试验、间接免疫荧光试验和测序分析鉴定确认分离到的病毒为MNV。序列分析结果显示MNV分离株的VP1蛋白基因全长均为1626个核苷酸,广东地区15株MNV分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别在89.7~100%和94.8~100%之间, 15株MNV分离株与其他19株MNV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在87.5~92.9%和92.4~98.2%之间。进化树分析表明来自设施A和设施D的13株病毒之间的亲缘关系较近,同属一个进化分支。来自设施B 的ZD-1毒株和设施C的ZYY-163毒株与来自广东（K162）、日本（S7-P2、S7-PP3）、韩国（K4）和德国（Berlin/04/06/DE、 Berlin/05/06/DE）同属另一个进化分支。结论 成功分离到15株MNV病毒。遗传进化分析表明广东地区的MNV分离株来源并不相同,来自设施B和设施C的MNV分离株与国外分离株的亲缘关系较近,而来自设施A和设施D的13株MNV分离株可能是本地固有的毒株。     

啮齿类动物携带冠状病毒的调查分析

有些国家和地区的专家认为SARS冠状病毒可能来源于动物。动物冠状病毒普遍存在 ,其疫苗使用广泛 ,有可能导致动物冠状病毒变异 ,甚至越过生物种类屏障 ,感染人类并导致发病。啮齿类动物种类繁多、数量庞大 ,并长期和人类接触。而啮齿类动物又是冠状病毒的重要自然宿主 ,具有较高的感染率。它可以引起小鼠的病毒性肝炎 (MHV)、大鼠冠状病毒病 (RCV)、大鼠涎泪腺炎。因此 ,调查目前啮齿类动物的冠状病毒感染情况 ,对探究SARS的起源和开展SARS的防治以及模型研究十分必要 ,为此 ,我们对广东省一些主要啮齿类实验动物生产和使用单位的大…     

实验猕猴主要脏器重量的测定

测定了60只人工饲养实验猕猴主要的脏器重量,并比较了不同性别和不同年龄组之间脏器重量和脏器系数的差异。结果表明,2-5岁组猕猴脏器重量和脏器系数无性别差异;6岁以上组心、脾、脑、胰等脏器重量雄性高于雌性,但脏器系数多数无明显差异,少数雌性略高于雄性。除胸腺外,各脏器重量随年龄增长而增加,特别是心、肝、脾、肺、肾、睾丸、前列腺成年后重量增加显著(P<0.01),而脑、胰、肾上腺、甲状腺、卵巢增加缓慢(P<0.05)。脏器系数随年龄变化不明显,少数呈现较复杂的年龄相关性。     

实验动物大、小鼠冠状病毒的血清学调查与分析

实验动物是冠状病毒的重要自然宿主,具有较高的感染率。它可以引起小鼠的病毒性肝炎(MHV),大鼠冠状病毒病(RCV)感染,大鼠涎泪腺炎,猫传染性腹膜炎,还能引起犬和兔的感染。因此,调查目前实验动物的冠状病毒感染情况,对探究SARS病的起源和开展SARS病的防治以及模型研究是十分必要的。1　材料和方法11　大小鼠血清的采集　用摘眼球采血方法对各有关单位的实验大、小鼠进行采血,分离血清并置-20℃以下冰箱保存待检。12　MHV和RCV抗体ELISA检测试剂盒　购自中国药品生物制品鉴定所,该试剂盒由抗原包被板、稀释液、阴性血清对照、阳性血…     

实验比格犬主要脏器重量测定

测定和比较了不同年龄和性另1人工饲养实验比格犬主要脏器的重量和系数。结果表明：青年组雄性心、肺、肾重量高于雌性;中年组雄性和雌性肺、胸腺、甲状腺重量与青年组相比均有显著性差异。中年组雌性和雄性的肺、胸腺和甲状腺与青年雌性和雄性的对应脏器系数有差异,其中胸腺脏器系数差异极显著。     

遗传工程小鼠的监测体系初探

目的欲建立一套完整的质量检测技术对遗传工程小鼠质量进行控制,以保证作为后续医药或其他生命科学动物实验研究的科学性和严谨性。方法在遗传、微生物、体内外寄生虫、病理、研发及繁育设施环境、饲料营养等常规质量检测的基础上,开展用PCR、Southern-blot检测目的基因;用RT-PCR、ELISA、SDS-PAGE、Western-blot等检测基因表达;用血液常规、血液生化及各器官形态、功能等检测来描述机体表征这三个层次综合描述遗传工程小鼠的特征。结果与结论将建立的技术方法应用于转基因小鼠、基因突变鼠、基因缺失鼠的检测,验证所建立的方法用于遗传工程小鼠质量控制的可行性。     

猕猴胆囊胆汁成分的测定

测定了猕猴胆囊胆汁的成分,并与人和狒狒的资料进行了比较,结果表明,三种胆汁粘稠度,胆固醇含量和PH值无显著性差异;猕猴胆汁总胆红素,间接胆红素,总胆汁酸和镁（Mg2 )浓度与狒狒接近而明显低于人,钙（Ca2 )和磷（P）浓度三种胆汁间差异较大。     

广东省屏障设施小鼠群中小鼠肝炎病毒感染情况

目的了解我省屏障设施小鼠群中小鼠肝炎病毒（MHV）感染情况。方法收集2003-2007年实验动物小鼠血清样品的监测数据,并对MHV感染情况有关数据进行分析。结果在6个屏障设施内抽检小鼠,5个屏障设施内抽检的样品检出MHV毒抗体阳性,检出率分别为1.4%,2.4%,2.8%,2.6%,13.2%。品系方面主要分布在BALB/c,BALB/c-nu/nu,NIH三个品系,检出率分别为3.6%,14%,7.1%。结论屏障设施小鼠群中小鼠肝炎病毒感染较为普遍。     

H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性的研究

目的用一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠,观察其对小鼠的致病性及在小鼠间的传染性。方法将小鼠分为正常组、攻毒组、同居组,攻毒组乙醚麻醉后滴鼻感染AIV,观察各组食欲、反应、呼吸及有无皱毛、弓背、死亡等,测量体温及体重;检测相应抗体水平、小鼠排毒情况及小鼠各器官带毒情况,并观察病理组织学变化。结果攻毒组出现食欲反应下降,呼吸急促,皱毛,死亡;体重、体温下降。同居组未出现感染。攻毒组攻毒后12 h至第9天可从肺组织分离出病毒,第10天始出现相应抗体;感染小鼠的肺、心肌、肝、脾、肾和脑组织都有不同程度的病理改变。结论 AIV对小鼠具有致病性,AIV能跨越种系障碍直接感染哺乳动物, 但在小鼠间无传染性。