芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

β-榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Survivin表达和Caspase酶活性的影响

目的 观察伊榄香烯对人胃癌细胞系SGC-7901凋亡抑制蛋白survivin及caspase酶活性的影响，探讨β-榄香烯诱导SGC-7901凋亡的作用机制。方法 用不同浓度β-榄香烯作用胃癌SGC-7901细胞后，分别采用Northern blot、Western blot检测Survivin mRNA和蛋白水平，用酶标仪比色法检测Caspase酶活性，分别采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果 β-榄香烯能下调Survivin mRNA和蛋白水平，增强Caspase酶活性，并诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡，效果呈浓度和作用时间依赖性。结论 β-榄香烯能诱导人胃癌细胞系SGC-7901凋亡，可能与下调Survivin表达与增强Caspase酶活性有关。     

β—榄香烯对胃癌SGC—7901细胞bcl—2基因表达及端粒酶活性的影响

目的 探讨β－榄香烯对胃癌SGC－7901细胞bcl-2基因表达及端粒酶活性的影响。方法 应用β－榄香烯处理人胃癌细胞系SGC－7901后,采用RT－PCR检测bcl-2基因mRNA的变化,采用流式细胞仪检测bcl-2蛋白表达,用PCR－ELISA法检测端粒酶活性。结果 β－榄香烯可下调bcl-2基因表达及抑制端粒酶活性,并且呈药物浓度及作用时间依赖性。结论 β－榄香烯可抑制胃癌细胞端粒酶活性,可能与下调bcl-2基因表达有关。     

阿司匹林诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:研究非甾体类抗炎药阿司匹林(ASA)对体外诱导人急性白血病细胞的凋亡作用及其相关机制.方法:采用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,通过光镜、流式细胞仪(FCM)、原位末端标记法(TUNEL)观测ASA诱导HL-60细胞凋亡,半定量RT-PCR检测基因表达.结果:浓度为2.5～10mmol/L的ASA能抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;ASA与阿糖胞苷(Ara-c)抗肿瘤作用具有相加效应;ASA可下调HL-60细胞c-myc mRNA水平表达.结论:一定浓度ASA在体外有抑制急性白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与c-myc基因下调有关.     

环孢菌素A诱导人白血病HL-60细胞株凋亡机制的研究

目的:观察环抱菌素A对人白血病HL-60细胞株凋亡的影响及其作用机制。方法:采用瑞氏染色、流式细胞仪、TUNEL法观察环孢菌素A对HL-60细胞株凋亡的影响;采用流式细胞仪检测环孢菌素A影响HL-60细胞凋亡时bcl-2基因表达的改变情况。结果:20mg/L环孢菌素A作用6h可诱导HL-60细胞凋亡,瑞氏染色呈现典型的凋亡形态学改变,流式细胞仪显示凋亡峰。细胞周期分析发现,环孢菌素A可使HL-60细胞生长阻滞于G_0-G_1期。环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组(P<0.01)。环孢菌素A处理组的bcl-2蛋白阳性率低于对照组(P<0.01)。结论:环孢菌素A可诱导HL-60细胞株凋亡,其机制可能是通过下调bcl-2基因表达。     

三七皂苷R1诱导HL-60细胞凋亡中survivin、bcl-2的表达

[目的]探讨三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡作用及其机制。[方法]光镜下观察三七皂苷R1作用下HL-60细胞形态,采用MTT比色法观察三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞增殖的抑制作用。采用流式细胞术检测细胞凋亡改变,并以RT-PCR检测凋亡调节基因survivin、bcl-2mRNA的表达。[结果]三七皂苷R175-1200μg.ml-1可抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性。三七皂苷R1作用后人白血病细胞株HL-60细胞呈现凋亡特征,流式细胞术显示凋亡细胞比例升高,凋亡率随作用剂量的增高而升高。RT-PCR检测可见三七皂苷R1150μg/ml作用下survivin、bcl-2mRNA表达减少。[结论]三七皂苷R1能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡,其作用可能与凋亡调节基因survivin、bcl-2的下调有关。     

β-榄香烯诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的研究

目的:探索榄香烯对体外培养人肝细胞株的作用及其机制.方法:应用MTT方法分析榄香烯对肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响.结果:榄香烯能明显抑制肝癌细胞生长,其半数生长抑制剂量为37.4 μg/ml;流式细胞术证实榄香烯能阻滞肝癌细胞从G0/G1期进入S期,并诱发细胞凋亡;透射电镜超微结构证实榄香烯能诱发肿瘤细胞凋亡的典型形态变化;免疫组化SP法及流式细胞术定量分析榄香烯能使肝癌细胞癌基因bcl-2、c-myc表达降低,抑癌基因p53表达增强.结论:榄香烯能诱导肝癌细胞凋亡,其作用机制可能与癌基因bcl-2、c-myc表达减少、p53表达增加有关.     

131I-GM-CSF诱导HL-60细胞凋亡机制的体外研究

目的:观察131I-GM-CSF诱导HL-60细胞凋亡及其机制,探讨其在急性髓系白血病放射导向治疗中的作用.方法:采用MTT法、TUNEL、透射电子显微镜研究131I-GM-CSF辐射后HL-60细胞的存活率、凋亡率和形态的改变;用流式细胞术和免疫细胞化学方法检测线粒膜电位的改变以及凋亡相关基因的表达.结果:放射性浓度≥18.5×108Bq/L时HL-60细胞存活率显著下降.131I-GM-CSF能致HL-60细胞凋亡、超微结构破坏、线粒体膜电位降低.在诱导细胞凋亡过程中,p53表达上调,bcl-2、bcl-xl表达下调.结论:GM-CSF作为载体携带131I能诱导HL-60细胞凋亡,具有抗白血病的作用.其诱导凋亡的机制与上调p53,下调bcl-2、bcl-xl,开放线粒体膜的通透性转换孔,降低线粒体膜电位有关.     

β-榄香烯诱导结肠癌Lovo细胞凋亡的作用

目的　研究 β 榄香烯诱导结肠癌细胞的凋亡作用 ,探讨其治疗结肠癌的作用机制。 方法　选择 β 榄香烯诱导结肠癌细胞凋亡 ,采用光镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡及细胞周期。Fura 2荧光复合技术测结肠癌细胞内 [Ca2 +]i浓度。结果　β 榄香烯对结肠癌细胞增殖具有很强的抑制作用。β 榄香烯能够诱导结肠癌凋亡。在结肠癌细胞凋亡过程中 ,胞内 [Ca2 +]i明显升高 ,以凋亡早期更为明显。 1h时为 ( 2 5 6.18± 8.85 )nmol/L ,明显高于对照组 ( 12 7.81± 5 .18)nmol/L(P <0 .0 1)。结论　β 榄香烯对结肠癌细胞生长具有很强的抑制作用 ,与诱导凋亡有关。Ca2 +在 β 榄香烯诱导结肠癌细胞凋亡过程中有一定的作用     

榄香烯对人肝癌细胞7402、宫颈癌细胞Hela的凋亡诱导作用及下调Bcl—2蛋白表达

目的 研究中药榄香烯对人肝癌细胞7402、宫颈癌细胞Hela的体外抑瘤效应及其作用机制。方法 应用MTT比色法观察榄香烯对细胞的生长抑制作用;荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡、周期变化及Bcl-2蛋白表达情况。结果 榄香烯对7402和Hela细胞有较强的体外增殖抑制作用。榄香烯能诱导7402和Hela细胞凋亡,同时伴随有Bcl-2蛋白表达下调。结论 榄香烯对7402、Hela细胞有较强的抗瘤效应,其可能与Bcl-2蛋白下调引起的细胞凋亡有关。     

全反式维甲酸与紫杉醇、阿霉素联合诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)分别与紫杉醇(Taxol)、阿霉素(ADR)单独或联合孵育HL-60细胞株能否增强凋亡诱导作用,并进一步研究bcl-2基因及家族bax、bcl-x基因在此过程中的作用。方法:1用台盼兰拒染法观察细胞生长活力;2在光镜和电镜下观察细胞形态变化;3用流式细胞仪(FCM)检测药物孵育前后细胞凋亡率(AP)的变化;4用RT-PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因及其家族bax、bcl-x基因的表达水平。结果:1ATRA能增强Taxol和ADR对HL-60细胞的生长抑制作用;2ATRA能增强HL-60细胞对Taxol和ADR诱导的细胞凋亡;3在ATRA与Taxol、ADR联合诱导的HL-60细胞凋亡中,bcl-2、bcl-xl基因表达下降,bax、bcl-xs基因表达增加。结论:ATRA能增加Taxol和ADR对HL-60细胞的生长抑制作用及凋亡诱导作用,bcl-2基因及家族bax、bcl-x基因参与了ATRA与Taxol、ADR联合诱导细胞凋亡的调控。     

凋亡相关基因survivin、bcl-2和bax的表达在维生素K2诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的探讨维生素K2(VK2)诱导急性早幼粒细胞白血病(AML)细胞株HL-60细胞凋亡的作用机制。方法采用透射电镜技术观察VK2处理后细胞结构变化;流式细胞术Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡;PI染色分析细胞周期变化;RT-PCR技术检测凋亡相关基因survivin、bc l-2和bax的表达。结果40μmol.L-1VK2作用HL-60细胞72 h后,电镜下可见典型细胞凋亡的形态改变;流式细胞术结果显示随着VK2浓度的增加和作用时间的延长细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);同时S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多(P<0.05),细胞被阻滞在G0/G1期;且随着VK2浓度的增加抗凋亡基因survivin、bc l-2表达明显下调(P<0.05),而促凋亡基因bax表达无显著差异(P>0.05)。结论VK2能诱导HL-60细胞发生凋亡,抗凋亡基因survivin和bc l-2 mRNA下调可能是VK2诱导HL-60细胞发生凋亡的机制之一。     

HL-60细胞分化与凋亡关系的初步研究

目的探讨HL-60细胞分化与凋亡的初步关系,指导白血病的联合化疗.方法NBT还原试验检测细胞分化、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及bcl-2、c-myc蛋白的表达,观察分别经ATRA、TPA诱导分化的HL-60细胞对VP-16的凋亡反应.结果与对照组相比,经ATRA、TPA分化的HL-60细胞bcl-2、c-myc蛋白表达都明显降低(P＜0.05),其中以TPA下调c-myc蛋白的幅度最大(76%);对VP-16的诱导反应,经TPA分化的HL-60细胞凋亡率明显减少(P＜0.05),而经ATRA分化的细胞凋亡率则无明显变化(P＞0.05).结论HL-60细胞对VP-16的凋亡诱导反应与bcl-2、c-myc蛋白的下调表达程度有关;分化诱导剂ATRA与低剂量的VP-16联合应用可望改善AML的化疗效果,并且以后者先用效果更好.     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

大蒜素对人白血病HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的: 探讨大蒜素对人白血病HL-60细胞生长抑制和诱导凋亡作用。方法: MTT比色分析法检测大蒜素对HL-60细胞生长的抑制作用,光镜观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞术分析大蒜素对HL-60细胞凋亡的影响。结果: 20mg/L、40mg/L、60mg/L大蒜素均能抑制HL-60细胞生长,其抑制作用呈剂量-效应关系,40mg/L大蒜素能诱导HL-60细胞出现典型凋亡形态学变化。大蒜素诱导HL-60细胞有凋亡现象和阻滞细胞周期于G₂/M期。结论: 大蒜素对人白血病HL-60细胞生长有抑制作用,其抑制作用与诱导HL-60细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

Effect of WT1 gene expression on cell growth and proliferation in myeloid leukemia cell lines

Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒ（ＷＴ１）ｇｅｎｅｉｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎＷｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒｐａｔｉｅｎｔｓＩｔｉｓｌｏｃａｔｅｄｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１１ｐ１３１　ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆＷＴ１ｇｅｎｅｉｓａｂｏｕｔ５０ＫｂＴｈｅｒｅａｒｅ２ｓｐｌｉｃｉｎｇｅｘｏｎｓｏｕｔｏｆｉｔｓ１０ｅｘｏｎｓ：ｅｘｏｎ５（ｓｐｌｉｃｅⅠ）ａｎｄｅｘｏｎ９（ｓｐｌｉｃｅⅡ）Ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｔｗｏａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｐｌｉｃｅｓｒｅｓｕｌｔｓｉｎｆｏ…     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。     

解毒维康片对HL-60细胞体外增殖影响的研究

目的探讨中药复方制剂解毒维康片(JDWKP)对白血病细胞HL-60体外增殖的影响。方法采用血清药理学方法,以大鼠为实验动物,制备出JDWKP的含药血清,再采用噻唑蓝(MTT)比色法观察JDWKP对HL-60细胞增殖的影响。通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测分析JDWKP对细胞凋亡相关基因的影响。通过酶联免疫吸附法(ELISA)法,从抗肿瘤新生血管形成的角度,检测JDWKP对HL-60细胞培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。结果1)解毒维康片能明显抑制HL-60细胞的增殖并呈时间与剂量相关效应。2)解毒维康片在诱导细胞凋亡过程中随药物浓度的增加,凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达逐渐下调,C-myc mRNA表达逐渐增加。3)解毒维康片能明显抑制HL-60细胞VEGF的表达。结论解毒维康片可有效地抑制HL-60细胞的体外增殖,其机制与解毒维康片能诱导细胞凋亡,并下调VEGF的表达水平有关。     

瑞香狼毒诱导HL—60细胞凋亡和调节SGC—7901细胞bcl—2蛋白表达

目的：探索瑞香狼素（SC）抗肿瘤机制。方法：以HL－60和SGC－7901为靶细胞,用MTT比色法测定细胞增殖抑制,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,DNA电泳和流式细胞仪检测DNA断裂,免疫组化检测bcl-2蛋白表达。结果：含SC药物血清处理细胞48h后,HL－60细胞增殖呈剂量依赖性抑制,并表现出典型的凋亡细胞形态学改变及DNA断裂;即染色体聚集,核固缩,断裂及阶梯状DNA电泳条带,G1期前细胞从11．7％增到57．4％;而SGC－7901细胞bcl-2蛋白表达率从78．3％下降到32．9％。结论：SC可诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2蛋白表达。