呼吸道合胞病毒对致敏小鼠气道反应性的影响及机制探讨

目的：探讨呼吸道合胞病毒（RSV）对致敏小鼠气道反应性的影响。方法：Balb／C小鼠30只，随机分成3组，分别为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组，鸡卵白蛋白（OVA）组和OVA／RSV组。应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化吸人结合RSV滴鼻激发复制哮喘模型，支气管肺泡灌洗液（BALF）作细胞分类计数，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BALF上清中白细胞介素（IL）-4、IL-5、干扰素（IFN）-γ含量，肺组织切片行苏木精-伊红（HE）染色观察病理变化，动物体描箱法测定气道反应性（以肺阻力RL表示）。结果：与OVA组比较．OVA／RSV组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均明显增加（P均〈0．01），BALF上清中IFN-γ、IL-4、IL-5含量均明显升高（P〈0．01）；与OVA组比较，OVA/RSV组支气管黏膜增厚．管腔收缩、狭窄，上皮破坏，支气管周围炎症细胞浸润加重．气道反应性亦明显升高（P〈0．01）。结论：OVA致敏小鼠RSV感染后可导致气道反应性明显增加．并和OVA致敏哮喘气道反应性增高具有不同的病理生理特征。     

聚肌胞对RSV感染哮喘加重小鼠气道分泌TSLP和炎症的影响

目的探讨聚肌胞(poly I:C)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘加重小鼠气道分泌胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)和气道炎症的影响。方法雌性BALB/c小鼠32只,随机分成4组:分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、OVA/RSV组、OVA/RSV/polyI:C组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘,聚肌胞1mg/kg肌肉注射;无创肺功能检测各组小鼠气道反应性;ELISA法检测小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平;ELISA法检测气管灌洗液(BALF)中TSLP含量;BALF行细胞分类计数;病理观察小鼠肺组织炎症反应,免疫组化观察小鼠气道上皮细胞TSLP表达水平。结果无创肺功能检测显示聚肌胞抑制RSV感染哮喘加重小鼠气道反应性的增高,OVA/RSV/polyI:C组小鼠Penh值明显低于OVA/RSV组(P<0.01);OVA/RSV/polyI:C组小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13和BALF中TSLP浓度均明显低于OVA/RSV组(P<0.05);OVA/RSV/poly I:C组小鼠BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞数及淋巴细胞数明显少于OVA/RSV组(P<0.05);病理观察显示聚肌胞减轻RSV感染哮喘小鼠气道炎症细胞浸润;免疫组化染色证实聚肌胞抑制RSV感染哮喘小鼠气道上皮细胞TSLP表达。结论聚肌胞前期注射减少RSV感染哮喘加重小鼠气道上皮细胞表达TSLP,抑制哮喘小鼠气道炎症反应。     

呼吸道合胞病毒感染加重哮喘模型小鼠气道炎症及气道阻力的观察

【】 目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染加重哮喘模型小鼠气道炎症及气道阻力变化的影响。方法 6～8周龄雄性BalB/c小鼠30只,每组10只,随机分为空白组、OVA组(哮喘模型组)、OVA/RSV组(RSV+哮喘模型组)3组。OVA组用卵清蛋白(OVA)致敏和激发;OVA/RSV组在OVA 致敏后,隔日用RSV滴鼻,连续3次,复制急性病毒感染哮喘模型;空白组予等量PBS。末次激发24h后,用小鼠动物呼吸机(Buxco RC系统)检测小鼠气道反应性;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学分析;留取肺组织,进行HE染色、PAS染色、VG染色,观察肺组织炎症反应。结果 OVA组肺功能和BALF嗜酸粒细胞比例(EOS％)与正常组相比差异有显著性 (P<0.05);OVA/RSV组肺功能和BALF中嗜酸粒细胞比例(EOS％) 与正常组相比有极显著性差异(P<0.01);OVA/RSV组气道反应性及BALF中嗜酸粒细胞比例(EOS％)与哮喘组相比差异有显著性 (P<0.05)。OVA组小鼠肺组织有炎性细胞浸润,气道可见粘液分泌物,气道周围可见胶原增生。OVA/RSV组小鼠肺组织有明显炎性细胞浸润,肺泡腔明显狭窄,毛细血管扩张充血,气道可见明显粘液分泌物,气道周围胶原增生明显。结论 呼吸道合胞病毒感染能明显增加重哮喘模型小鼠肺部组织炎症反应同时气道阻力明显增高。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂在RSV感染诱发哮喘中的作用

目的 本研究通过观察RSV感染致敏小鼠MMP-9和TIMP-1的表达与肺组织病理的变化,探讨RSV感染诱发哮喘发作的发病机制.方法 分3组,分别是安慰剂（生理盐水）对照组、RSV感染小鼠模型组、OVA致敏小鼠模型组,分别作免疫组织化学染色（SP法）和HE,染色观察肺组织病理变化观测MMP-9 mRNA、TIMP-1mRNA的表达.结果 本实验观察到RSV感染小鼠模型组呼吸道组织MMP-9高表达,TIMP-1亦随之有所升高,以MMP-9的表达升高为主,两者比值较安慰剂对照组升高.病理上表现为炎症细胞的浸润为主.而OVA致敏组则表现为TIMP-1过度表达,两者比值较安慰剂对照组降低,病理上出现气道基质增生,纤毛上皮剥落,气道壁纤维化.免疫组化结果显示RSV感染致敏组MMP-9为13312.3±4462.5,TIMP-1为4481.8±2320.3,OVA致敏组MMP-9为4590.8±2320.3,TIMP-1为7477.5-2205.8,两者差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 MMP-9和TIMP-1两者的平衡是气道黏膜生理中的关键因素,当RSV感染导致气道炎症时,MMP-9和TIMP-1两者的平衡被打破,MMP-9高表达,而此后机体对MMP-9和TIMP-1平衡的调节导致TIMP-1随之持续升高最终使气道黏膜高反应性甚至气道黏膜重塑,这可能就是RSV感染诱导哮喘发生发展的重要疾病机制.     

肥大细胞对慢性实验性哮喘小鼠气道反应性和气道炎症的影响

目的 研究肥大细胞在慢性实验性哮喘小鼠气道病理改变过程中的作用.方法 遗传性肥大细胞缺失W/Wv小鼠、正常 / 小鼠和培养骨髓肥大细胞重建的W/Wv小鼠分设对照组和实验组.实验组小鼠用10μg OVA 2次致敏,17 d后用1% OVA气道激发,每周1次,共7周,检测其肺组织中肥大细胞数量、气道反应性和肺组织的病理改变.结果 OVA致敏和激发可引起 / 和肥大细胞重建的W/W'小鼠肺组织中肥大细胞数量明显增加,气道反应性增强,肺组织炎性病理改变明显;而OVA致敏和激发的W/W'小鼠的上述指标改变不明显.结论 肥大细胞参与了OVA诱导的小鼠气道高反应性、肺组织炎症细胞浸润过程.     

RSV感染哮喘小鼠气道炎症及重构与激素抵抗性的研究

目的观察小鼠哮喘模型感染呼吸道合胞病毒（respiratary syncytial virus，RSV）气道炎症及重构与哮喘治疗激素敏感性之间的联系。方法50只BALB/c小鼠随机分对照组，单纯卵蛋白 (OVA)致敏哮喘组（A组）、OVA致敏哮喘+地塞米松（DEX）组（B组）、OVA致敏哮喘+RSV感染组（C组）、OVA致敏哮喘+RSV感染+ DEX组（D组），每组10只；酶联免疫吸附法（ELISA）检测白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）、转化生长因子β₁（TGF-β₁）及γ干扰素（IFN-γ）浓度;病理切片行HE染色、Van Gieson 氏染色，显微镜下观察气管外周炎性分级和气道胶原沉积情况。结果A、C、D组与对照组比较IL-4、IL-5及TGF-β₁浓度升高，气道胶原沉积、炎症浸润加重，差异有统计学意义（P＜0.05）；D组与C组比较，C组与A组比较，TGF-β₁浓度升高，差异有统计学意义（P＜0.05），气道炎症及气道胶原沉积加重。结论RSV感染哮喘小鼠可引起明显的Th2细胞炎性反应及气道重构；应用激素干预治疗后，气道炎症及重构进一步加重，表明RSV感染哮喘小鼠对激素治疗敏感性差。     

呼吸道合胞病毒感染促进哮喘小鼠气道分泌TSLP和Th2炎症反应

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)对哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)分泌的影响,以探索RSV对哮喘小鼠Th1/Th2免疫反应的调节作用.方法 雌性BALB/c小鼠32只.随机分成4组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、RSV组、OVA/RSV组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘;无创肺功能检测小鼠气道反应性,ELISA法检测小鼠血清IL-4、IFN-γ、IL-5、IL-13水平;ELISA法检测气管灌洗液(BALF)TSLP含量并进行细胞分类计数;小鼠肺组织病理观察炎症反应,免疫组化观察小鼠气管上皮细胞TSLP表达水平.结果 RSV感染促进哮喘小鼠呼吸道分泌TSLP增加,OVA/RSV组小鼠TSLP浓度达(2.13±0.05)ng/ml,高于其他组(P<0.01);同时促进IL-4、IL-5、IL-13等Th2型细胞因子的分泌,并增加IFN-γ分泌;0VA/RSV组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数与其他各组比较均明显增加;无创肺功能检测显示OVA/RSV组小鼠气道反应性明显增高,乙酰甲胆碱浓度达6.25 mg/ml时,Penh值(318.66±50.87)明显增加,与其他各组比较具有统计学意义(P<0.01);病理观察显示RSV感染明显加重哮喘小鼠气道炎症细胞浸润;免疫组化染色证实RSV/OVA组小鼠气道上皮细胞TSLP表达量较高.结论 RSV感染可以增加小鼠气道上皮细胞表达TSLP,促进Th2细胞因子的表达,加重哮喘小鼠肺部Th2炎症反应.     

肥大细胞在实验性哮喘小鼠气道高反应性中的作用

目的:研究肥大细胞在实验性哮喘小鼠气道病理生理改变过程中的作用。方法:遗传性肥大细胞缺失W/Wv小鼠、正常同源基因+/+小鼠和培养骨髓肥大细胞重建的W/Wv小鼠分设对照组和实验组;实验组小鼠用10μgOVA两次致敏,17d后用1%OVA气道激发,隔天1次,共3次;第22天时检测其气道反应性,后取材观察其肺组织中肥大细胞数量、和肺组织的病理改变。结果:OVA致敏和激发可引起+/+小鼠和肥大细胞重建的W/Wv小鼠气道反应性增强,肺组织中肥大细胞数量明显增加,肺组织炎性病理改变明显;而OVA致敏和激发的W/Wv小鼠的上述指标改变不明显。结论:肥大细胞参与了OVA诱导的小鼠气道高反应性、肺组织炎症细胞浸润过程。     

建立小鼠哮喘模型两种不同方法的比较

目的 比较两种小鼠哮喘模型建立方法的优缺点。方法 30只BALB/c小鼠随机正常对照组、OVA组、OVA/RSV组分为3组：采用卵白蛋白和氢氧化铝混悬液致敏,予以卵白蛋白持续雾化以及RSV多次滴鼻激发分别建立OVA组及OVA/RSV组哮喘小鼠模型,对照组采用无菌注射用水致敏和雾化激发。末次激发24h后,测定肺功能,行支气管肺泡灌洗液中细胞分类计数,HE染色观察其肺组织病理改变。结果 各模型组与对照组相比较,均有明显的哮喘症状,病理学结果显示气道壁增厚明显,管腔可见狭窄,管壁及其周围大量炎性细胞浸润,而且OVA/RSV组小鼠肺组织病理损害较OVA组明显加重。增强呼气间歇（Penh）值OVA/RSV组小鼠较OVA组小鼠明显升高（P<0.05）,其支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞计数、单核细胞、淋巴细胞及嗜酸性粒细胞计数显著高于OVA组（P<0.05）。结论 通过OVA致敏并予以RSV诱导建立哮喘小鼠模型,是一种更好地模拟人类哮喘发病机制的建模方法。     

RSV感染哮喘小鼠气道炎症及重构与激素抵抗的研究

目的 观察小鼠哮喘模型感染呼吸道合胞病毒(respiratary syncytial virus,RSV)气道炎症及重构与哮喘治疗激素敏感性之间的联系.方法 50只BALB/c小鼠随机分对照组,单纯卵蛋白(OVA)致敏哮喘组(A组)、OVA致敏哮喘+地塞米松(DEX)组(B组)、OVA致敏哮喘+RSV感染组(C组)、OVA致敏哮喘+RSV感染+DEX组(D组),每组10只;酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、转化生长因子β1(TGF-β1)及γ干扰素(IFN-γ)浓度;病理切片行HE染色、Van Gieson 氏染色,显微镜下观察气管外周炎性分级和气道胶原沉积情况.结果 A、C、D组与对照组比较IL-4、IL-5及TGF-β1浓度升高,气道胶原沉积、炎症浸润加重,差异有统计学意义(P＜0.05);D组与C组比较,C组与A组比较,TGF-β1浓度升高,差异有统计学意义(P＜0.05),气道炎症及气道胶原沉积加重.结论 RSV感染哮喘小鼠可引起明显的Th2细胞炎性反应及气道重构;应用激素干预治疗后,气道炎症及重构进一步加重,表明RSV感染哮喘小鼠对激素治疗敏感性差.     

无气道高反应性的嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型的建立

目的应用不同大小的变应原颗粒雾化小鼠,尝试建立具有明显的嗜酸粒细胞（EOS）气道炎症、但无气道高反应性的BALB／c小鼠模型。方法BALB／c雌性小鼠,分为3组,每组6—8只：大颗粒变应原雾化激发组（实验组）、小颗粒变应原雾化激发组（哮喘组）、生理盐水对照组（对照组）。予卵蛋白（OVA）致敏后,实验组和哮喘组第28、29、30天分别用PARI TIA喷雾器和PARI LC STAR喷雾器雾化l％ OVA 15 min激发;xff照组致敏、激发采用生理盐水。测定动物的气道反应性,观察气道炎症程度。结果哮喘组的气道反应性高于实验组和对照组,实验组与对照组的气道反应性比较差异无统计学意义（P＞0．05）。实验组肺泡灌洗液中EOS百分率高于对照组,但低于哮喘组。实验组出现支气管周围EOS等炎症细胞浸润,程度轻于哮喘组。结论采用大颗粒变应原进行雾化激发初步成功建立了具有明显的EOS气道炎症、但无气道高反应性的BALB／c小鼠模型,为进一步研究气道高反应性的发生机制奠定了基础。     

VEGF Ang-1与支气管哮喘气道重塑的关系

目的制备慢性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠模型以观察VEGF、Ang-1的改变及其与气道血管生成的关系,初步探讨气道血管生成机制及在气道重塑中的意义。方法BALB-c小鼠随机数字表分为正常对照组（A组）、慢性哮喘组（B组）、地塞米松治疗组（C组）,每组10只,采用腹腔注射OVA致敏,长期吸入OVA悬液激发制备模型。A组以生理盐水代替OVA,C组每次激发前地塞米松腹腔注射干预。末次激发后24h内处死,随即行右肺盥洗留取BALF,左肺及气管固定、包埋制备病理切片,行HE染色和抗VEGF、Ang-1免疫组化染色,观察气道形态学改变。ELISA法检测BALF中VEGF的浓度。结果气道血管密度、WAt/Pbm、BALF中VEGF浓度B组明显高于A组（P均〈0.01）,C组低于B组（P均〈0.01）,高于A组（P均〈0.05）;气道血管密度与WAt/Pbm、VEGF的浓度呈正相关。结论慢性哮喘小鼠模型气道血管生长在气道重塑中具有重要意义,气道血管生长可能与气道血管生长因子失调有关,糖皮质激素能部分抑制气道血管生长,进而改善慢性哮喘气道结构的重塑。     

CpG ODN对小鼠哮喘模型气道高反应性及炎症影响的研究

目的探讨免疫刺激序列CpG寡聚脱氧核苷酸（ODN）对小鼠哮喘模型气道高反应性（AHR）及炎症过程的影响。方法雌性C57BL／6J小鼠30只,随机分为正常对照组（A组）、模型组（B组）、CpGODN预防组（C组）、CpGODN治疗组（D组）及布地奈德治疗组（E组）,建立小鼠哮喘模型。采用有创体积描记法对小鼠进行肺功能及AHR检测;采集血、肺组织及支气管肺泡灌洗液（BALF）标本,对BALF行细胞总数计数及嗜酸粒细胞（EOS）绝对值计数,ELISA法测定血清和BALF中细胞因子IL一4、IFN—γ水平。结果B组BALF中细胞总数、EOS绝对值计数和EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均显著高于A组（均P〈001）,C、D、E组均显著低于B组（均P〈0．01）,但仍显著高于A组（P〈0．05或0．01）。B组气道阻力增加幅度（Raw％）和肺顺应性下降幅度（Cdyn％）均显著高于A组（P〈0．01）;C、D、E组较B组显著降低（均P〈0．01）;C、D、E组肺组织炎症程度改变不一,明显比B组减轻。B组血清和BALF中IL-4的水平显著高于A组（P〈0．01）,而BALF中IFN—γ的水平显著低于A组（P〈0．01）。结论CpGODN在致敏阶段及致敏后均能明显改善哮喘肺组织炎症,降低BALF中细胞总数及EOS％;降低AHR;调节Th1/Th2细胞因子的平衡。致敏后CpGODN干预优于致敏阶段的干预。     

Inhibitory effects of sunitinib on ovalbumin-induced chronic experimental asthma in mice

Background Tyrosine kinase signaling cascades play a critical role in the pathogenesis of allergic airway inflammation. Sunitinib, a multitargeted receptor tyrosine kinase inhibitor, has been reported to exert potent immunoregulatory, anti-inflammatory and anti-fibrosis effects. We investigated whether sunitinib could suppress the progression of airway inflammation, airway hyperresponsiveness （AHR）, and airway remodeling in a murine model of chronic asthma.
Methods Ovalbumin （OVA）-sensitized mice were chronically challenged with aerosolized OVA for 8 weeks. Some mice were intragastrically administered with sunitinib （40 mg/kg） daily during the period of OVA challenge. Twelve hours after the last OVA challenge, mice were evaluated for the development of airway inflammation, AHR and airway remodeling. The levels of total serum immunoglobulin E （IgE） and Th2 cytokines （interleukin （IL）-4 and IL-13） in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） were measured by ELISA. The expression of phosphorylated c-kit protein in the lungs was detected by immunoprecipitation/Western blotting （IP/WB） analysis.
Results Sunitinib significantly inhibited eosinophilic airway inflammation, persistent AHR and airway remodeling in chronic experimental asthma. It reduced levels of total serum IgE and BALF Th2 cytokines and also lowered the expression of phosphorylated c-kit protein in remodelled airways.
Conclusions Sunitinib may inhibit the development of airway inflammation, AHR and airway remodeling. It is potentially beneficial to the prevention or treatment of asthma.     

Investigation of the measurement of murine airway hyperres-ponsiveness and the therapeutic effects of budesonide on ovalbumin sensitized and challenged mice

Background Airway hyperresponsiveness (AHR) is one of the most important characteristics of asthma. This study investigated the parameters, by which assess the airway responsiveness under tidal ventilation.Methods Female BALB/c mice were sensitized and challenged with ovalbumin (OVA) (group A), and part of them were treated with budesonide aerosol (group B). All the mice were anaesthetized and mechanically ventilated. The values of tidal volume (Vt), airway pressure (PA), airway flow (F), expiratory lung resistance (RL) and dynamic compliance of the thorax and lung (CT-L) were recorded by the AniRes2003 animal lung function system. In addition, the expiratory volume in the first 0.1 second after the start of expiration (EV0.1) was obtained according to the flow-volume (F-V) curve. The maximal or minimal values of EV0.1, RL and CT-L were documented after each dose of methacholine (MCH) and compared with values from negative control group (group C).Results (1) When the dose of MCH reached 100 ng/g or 200 ng/g, the decrease of Vt in group A was much more significant than group C (P=0.001, &lt;0.001 respectively), but not so between groups B and group C (P=0.974, 0.362 respectively). (2) With the dose of 25, 50, 100 or 200 ng/g MCH, the decrease in percentage of EV0.1 in group A was much higher than group C (P=0.012, 0.025, 0.001, 0.003 respectively), while that in group B showed no significant difference as compared with group C (P=0.507,0.896,0.972,0.785). (3) RL and CT-L： with the dose of 200 ng/g MCH, there was a statistically significant increase of RL in group A compared to group B or group C (P&lt;0.001, &lt; 0.001 respectively), but no significant difference between groups B and C (P=0.266). With doses of 100 ng/g and 200 ng/g MCH, there was a statistically significant decrease of CT-L in group A compared to group B (P=0.001,= 0.001) and group C (P&lt;0.001,&lt; 0.001 respectively), but no significant difference between groups B and C (P=0.775, 0.310). (4) Histopathology: there were eosinophilic predominant peribronchial and perivascular inflammatory influx in murine lungs after OVA sensitizing and challenging, which could be counteracted by inhalation of budesonide in group B.Conclusions The decline in EV0.1 in response to MCH challenge correlated with simultaneous changes in Vt, RL and CT-L, but more sensitively than all the other parameters. The decline in EV0.1 and inflammation in murine lung could be significantly alleviated by inhalation of nebulized budesonide solution, which indicated that EV0.1 to MCH is a valid measure of AHR in mice. Chin Med J 2005; 118(23):1959-1964     

布地奈德对哮喘小鼠TNOS、cNOS、iNOS及内皮素的影响

目的观察吸入布地奈德（budesonide，BUD）对小鼠哮喘模型哮喘发作、血清及支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中总的一氧化氮合酶（total nitric oxide synthase，TNOS）、结构型一氧化氮合酶（constitutive nitric oxide synthase，cNOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、内皮素（andothelin，ET）的影响，探讨BUD防治哮喘的机制。方法30只BALB／c小鼠随机分为3组：哮喘模型组（A组，n=10）、BUD治疗组（B组，n=10）、正常对照组（C组，n=10）。以卵蛋白（ovalbumin，OVA）致敏及激发建立小鼠哮喘模型，观察哮喘发作及肺组织病理情况。采用放射免疫法测定3组小鼠血清及BALF中TNOS、iNOS、cNOS的活性及ET-1的水平。结果B、C2组血清及BALF中TNOS、cNOS、iNOS活性及ET-1的水平均明显低于A组（P均〈0．01），B组TNOS、iNOS、cNOS的活性与C组比较差异均无统计学意义（P均〉O．05），而B组ET-1水平明显高于C组（P〈0．05），B、C2组BALF中WBC总数均明显低于A组（P均〈0．01），血清中iNOS活性与ET-1水平呈正相关（r=0．827，P〈0．01），BALF中iNOS活性与ET-1水平呈正相关（r=0．776，P〈0．01）。结论吸入布地奈德防治哮喘的机制可能与抑制哮喘小鼠BALF、血清中TNOS、iNOS、cNOS活性及ET-1水平有关。但并不完全，气道炎症一旦形成，可能需要较长时间来控制。