RP-HPLC同时测定左金丸中多指标成分含量

目的:建立同时测定左金丸中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的液相色谱法.方法:采用Agilent C18(200 mm ×4.6 mm,5μm)柱,以乙腈-0.3%磷酸三乙胺为流动相进行梯度洗脱,检测波长:225nm.结果:盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为0.063 36～0.316 8、0.012 76～0.102 08、0.012 93～0.064 60、0.012 76～0.102 08和0.001 988～0.009 94μm,平均回收率分别为103.1%、99.8%、99.8%、100.5%、98.9%,RSD分别为1.1%、1.9%、1.4%、1.5%、1.9%.结论:本方法可同时测定左金丸中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,具有快速、简便等特点.     

双波长HPLC同时测定黄连及金芪降糖片中6种生物碱的含量

目的:建立HPLC同时测定黄连及金芪降糖片中木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱6种生物碱含量的方法.方法:Waters Symmetry ShieldTM RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈(0.3％甲酸和0.3％三乙胺)(A)-水(0.3％甲酸和0.3％三乙胺)(B)梯度洗脱,体积流量1.0 mL· min-1,检测波长345,270 nm,柱温25℃.结果:木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀及盐酸小檗碱线性范围分别为0.012 06 ～0.241 2,0.038 24 ～0.7648,0.088 02 ～1.760 4,0.016 55～0.331 0,0.036 08～0.721 6,0.189 41 ～3.788 2μg(r≥0.999 8),平均加样回收率95％～105％.结论:方法专属性强、灵敏度高、重复性好、简便易行,可用于同时测定黄连及金芪降糖片中木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量,可为金芪降糖片的现代制剂研究和质量控制提供依据.     

薄层色谱扫描法测定黄连吴茱萸药对中黄连生物碱的含量

目的:比较黄连中主要生物碱成分在黄连-吴茱萸药对配伍前后的差异.方法:采用TLCS法对黄连单煎液、黄连吴茱萸合煎液、黄连吴茱萸单煎混合液中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量进行测定.结果:黄连与吴茱萸配伍后,盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量均显著降低,以盐酸小檗碱的减少较为明显.结论:两药合用,黄连生物碱含量均有不同程度降低,说明吴茱萸可制约黄连苦寒之性,为临床两药配伍使用提供了实验依据.     

LC-MS/MS同时测定左金丸和香连丸中6种生物碱的含量

目的:建立左金丸(黄连、吴茱萸)和香连丸(黄连(吴茱萸制)、木香)中6种生物碱含量的LC-MS/MS测定方法。方法:色谱条件:Phenomenex Luna C18柱(5μm,250 mm×4.60 mm);乙腈-水(4 mmol/L乙酸铵和0.08%甲酸)为流动相,梯度洗脱;质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测,MRM模式。结果:左金丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的平均回收率分别为101.0%,101.3%、101.2%、100.2%、99.6%、99.7%,RSD分别为1.1%、1.8%、0.98%、1.0%、1.3%、1.3%,香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱和吴茱萸碱的平均回收率分别为101.6%、99.8%、101.9%、101.0%、101.3%,RSD分别为1.0%、1.9%、0.75%、1.1%、1.9%。结论:本方法可同时测定左金丸和香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,具有快速、简便等特点。     

左金丸传统丸剂与免煎配方颗粒剂的UPLC指纹图谱研究

目的:通过指纹图谱比较左金丸传统丸剂与免煎配方颗粒剂主要药效成分的相对含量。方法:采用超高效液相色谱法建立左金丸传统丸剂与免煎配方颗粒剂的指纹图谱,对其主要药效成分的相对含量进行比较。结果:方法学研究表明,所用色谱条件符合定性要求;以"诺得胜"左金丸中盐酸小檗碱为参照物峰,左金丸免煎配方颗粒剂中黄连主要成分(盐酸黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱)的相对含量高于传统丸剂,吴茱萸主要成分(吴茱萸碱、吴茱萸次碱)的相对含量明显低于传统丸剂。结论:左金丸免煎配方颗粒剂与传统丸剂的指纹图谱存在差异;前者黄连主要成分的相对含量较高,吴茱萸主要成分的相对含量明显较低。     

反相高效液相色谱法测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱的含量

 目的建立同时测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱含量的反相离子对液相色谱法。方法采用Agilent ZOR-BAX SB-C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-乙腈-15 mmol·L^-1SDS水溶液(20∶40∶40,pH 7.5)流动相,检测波长343 nm。结果盐酸小檗碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为12～120和0.45～6.81 mg·L^-1,盐酸小檗碱的回收率为99.21%,RSD=1.60%;吴茱萸次碱的回收率为101.40%,RSD=3.32%。结论采用本方法同时测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱含量具有简便、快速、准确等优点。     

不同配伍戊己丸的黄连生物碱在人源肠道菌群中的代谢研究

目的:研究戊己丸配伍方中的小檗碱、巴马汀在人源肠道菌群中的代谢.方法:采用L9(34)正交设计法将黄连、吴茱萸、土炒白芍组成9组戊己丸配伍方和相应剂量的黄连单味药,分别与人的新鲜粪便进行厌氧培养,在培养24h后采用HPLC-UV法同时测定菌液中小檗碱和巴马汀的含量,比较在不同配伍比例下2种成分的代谢.结果:在黄连提取物中,小檗碱的代谢速度与剂量呈正相关,巴马汀的代谢速度与剂量呈负相关.复方配伍加速了低剂量小檗碱的代谢,与吴茱萸和土炒白芍呈正相关;而减慢了高剂量小檗碱的代谢,代谢速度与吴茱萸呈负相关.复方配伍加速了高剂量巴马汀的代谢,减慢了低剂量巴马汀的代谢,并且代谢速度与吴茱萸和±炒白芍的剂量呈负相关.结论:当黄连代表成分在肠道菌群中代谢较快时,戊己丸复方配伍减慢其代谢速度,而当黄连代表成分在肠道菌中代谢缓慢时,戊己丸复方配伍则加快其代谢,从而起到平衡的作用.而且黄连、吴茱萸、土炒白芍比例不同,小檗碱和巴马汀的代谢速度也有一定的差异.     

戊己丸不同配伍对代表成分胆汁排泄的影响

目的:探讨戊己丸不同配伍时,代表成分胆汁排泄的变化.从胆汁排泄的角度解释戊己丸的配伍机制.方法:采用正交设计得到9个戊己丸复方,加上9个单味药,共18个复方.于十二指肠给药后不同时间点取胆汁,用LC-MS测定代表性成分的胆汁浓度,以此计算胆汁排泄率,药-时曲线下面积,并对结果进行方差和极差分析.结果:吴茱萸与小檗碱、巴马汀胆汁排泄呈负相关;白芍与小檗碱、巴马汀胆汁排泄呈正相关;黄连、白芍与吴茱萸碱、吴茱萸次碱胆汁排泄呈负相关;并且得到了针对各代表成分胆汁排泄的最优配伍比例.结论:吴茱萸抑制黄连代表性成分胆汁排泄;白芍促进黄连代表性成分胆汁排泄;黄连、白芍抑制吴茱萸代表性成分胆汁排泄;黄连、吴茱萸抑制白芍代表性成分的胆汁排泄.     

戊己丸不同配伍对小檗碱、巴马汀吸收的影响

目的:应用大鼠原位循环肠肝灌流模型,考察戊己丸不同配伍对戊己丸中黄连代表成分小檗碱、巴马汀的吸收的影响。方法:采用L9(34)正交设计得到戊己丸12个配伍方(3个单味药和9个配伍方),经十二指肠给药,于不同时间(0,1,5,10,15,30,60,90,120 min)采集灌流液,LC-MS检测小檗碱、巴马汀的含量,计算其吸收分数,吸收速率常数(Ka)。结果:吴茱萸与小檗碱、巴马汀的吸收分数,吸收速率常数(Ka)之间呈负相关,并得到了促进小檗碱、巴马汀吸收的最优配伍比例黄连-吴茱萸-白芍3∶1∶3。结论:吴茱萸抑制黄连代表成分的吸收,而且黄连、吴茱萸、白芍配伍比例不同,小檗碱、巴马汀的吸收量、吸收速度也有较大差异。     

高效液相色谱法同时测定左金丸提取物中五种成分的含量

目的:采用高效液相色谱法同时测定左金丸提取物中多种成分的含量,进一步完善左金丸提取物的质量标准。方法:色谱柱:AgilentEclipseXDB-C18(200mm×4.6mm,5μm)柱;流动相A为乙腈,流动相B为0.3%磷酸三乙胺;梯度程序:0～15min,25%A→30%A,1mL/min;15～20min,30%A→55%A,1.0mL/min→0.8mL/min;20～30min,55%A→65%A,0.8mL/min→1.0mL/min;检测波长:225nm;柱温:20℃。结果:左金丸提取物中各成分含量如下:盐酸药根碱41.67mg/g、盐酸巴马汀66.06mg/g、盐酸小檗碱206.9mg/g、吴茱萸碱1.313mg/g,吴茱萸次碱1.128mg/g。结论:本方法简单可行,能够完善左金丸提取物的质量标准。     

Simultaneous Determination of Seven Alkaloids in Fufang Zhenzhu Tiaozhi Capsule by HPLC Coupled with DAD

Objective To establish a reverse-phase liquid chromatography method for the determination of seven alkaloids (magnoflorine, columbamine, jatrorrhizine, epiberberine, coptisine, palmatine, and berberine) in Fufang Zhenzhu Tiaozhi Capsule. Methods Chromatography was performed on a Dionex Acclaim C 18 column (250 mm × 4.6 mm, 5.0 μm) at 30 ℃ .The mobile phase was composed of acetonitrile-potassium dihydrogen phosphate solution (0.015 mol/L, 40:60, including 1.7 g/L sodium dodecyl sulfate and phosphoric acid used to regulate pH value to 3.0), with a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 270 nm. Results The calibration curves of magnoflorine, columbamine, jatrorrhizine, epiberberine, coptisine, palmatine, and berberine were linear in the range of 1.07- 10.65, 0.78-7.55, 0.75-7.50, 1.60-15.95, 2.69-26.85, 2.31-23.10, and 6.04-60.40 mg/mL. The average recoveries of magnoflorine, columbamine, jatrorrhizine, epiberberine, coptisine, palmatine, and berberine were 101.0%, 101.2%, 100.1%, 100.0%, 100.1%, 101.1%, and 99.7%, respectively. Conclusion The method could be used for the quantitative determination of the preparation.     

RP-HPLC同时测定左金丸中盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

目的:建立同时测定左金丸中盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的液相色谱方法。方法:采用Agilent ODS C18柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈-0.3%磷酸-0.3%三乙胺为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0mL.min-1;柱温为40℃;检测波长为225nm。结果:盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在5.00～500.00(R2=0.9992)、1.13～30.00(R2=0.9999)、1.25～50.00(R2=1)μg.mL-1范围内有良好的线性关系,平均回收率分别为105.04%(RSD=3.04%)、92.98%(RSD=1.23%)、97.90%(RSD=1.44%)。结论:本方法准确、可靠、灵敏度高、重复性好,可用于左金丸制剂的质量控制。     

不同微乳配方对药物经皮渗透的影响

目的:考察不同微乳配方对左金微乳凝胶中有效成分经皮渗透的影响。方法:采用改良Franz扩散池,以凝胶中盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱4种生物碱为评价指标,用HPLC方法测定接收液中上述4个成分含量。结果:不同微乳配方的左金凝胶中盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱4种生物碱的经皮渗透速率和24h累积透过率有明显差异。结论:微乳处方的组成对药物的经皮渗透能力有一定的影响。     

Pharmacokinetic studies of multi-bioactive components in rat plasma after oral administration of Xintiantai Ⅰ extract and effects of guide drug borneol on pharmacokinetics

Objective: To investigate the in vivo pharmacokinetic characteristics of 17 bioactive components including ginsenoside Rg1, Rb1, Rd, berberine, epiberberine, jatrorrhizine, palmatine, columbamine, coptisine, evodiamine, dehydroevodiamine, rutaecarpine, limonin, hyperin, curcumin, demethoxycurcumin and bisdemethoxycurcumin in rat plasma after oral administration of Xintiantai Ⅰ extract powder (XⅠ) and Xintiantai Ⅰ without guide drug borneol extract powder (XⅠ without borneol), and study the compatibility effects of guide drug borneol on the pharmacokinetics. Methods: A UHPLC-MS/MS method was established and fully validated for the comparative pharmacokinetics of 17 bioactive components. The pharmacokinetics parameters of 17 bioactive components after oral administration of XⅠand XⅠ without borneol were calculated by the software of DAS 3.0 and intercompared. Results: The specificity, linearity, lower limit of quantification (LLOQ), precision, accuracy, extraction recovery rates, matrix effects, and stability of the UHPLC-MS/MS assay were good within the acceptance criteria from FDA guidelines. Guide drug borneol can significantly increase AUC of G-Rd, palmatine, hyperin, curcumin, demethoxycurcumin, bisdemethoxycurcumin and Cmax of 16 bioactive components except for dehydroevodiamine (P < 0.05), decrease Tmax of G-Rd, berberine, columbamin, coptisine, limonin and MRT of 17 bioactive components in XⅠ group (P < 0.05). Conclusion: Guide drug borneol enhanced the absorption of G-Rd, palmatine, hyperin, curcumin, demethoxycurcumin and bisdemethoxycurcumin.     

左金微乳凝胶与水凝胶体外释放和经皮渗透特性的研究

目的:研究、比较左金微乳凝胶、水凝胶体外释放和经皮渗透特性,探讨微乳凝胶对药物释放及透皮性能的影响。方法:采用改良Franz扩散池,以凝胶中小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等4种生物碱为评价指标,采用HPLC方法测定接收液中上述4个成分含量。结果:吴茱萸次碱的体外释放速率水凝胶高于微乳凝胶,而吴茱萸碱释放速率微乳凝胶高于水凝胶,其余两个成分体外释放无明显差异。微乳凝胶中吴茱萸碱、巴马汀、小檗碱的经皮渗透速率比水凝胶分别提高了10倍、36倍、26倍,提示微乳凝胶具有明显的经皮渗透优势。两种凝胶中四个指标成分的体外释放和经皮渗透行为均符合零级方程。吴茱萸次碱较为特殊,其在水凝胶中透皮速率比微乳凝胶高1.6倍。结论:微乳凝胶能显著增强药物成分的经皮渗透能力。     

高效液相色谱法测定五味黄连丸中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量

目的：建立高效液相色谱法测定五味黄连丸中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量。方法：采用Diamosil C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50）（每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g）;检测波长：345nm;流速：1.0mL/min;柱温：室温。结果：表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱分别在0.489~11.73、0.992~23.81、1.014~24.35、2.017~48.40μg/mL峰面积与浓度之间呈良好线性关系;平均加样回收率分别为100.1%、98.3%、99.4%、99.4%,RSD分别为1.3%、1.7%、1.3%、2.8%。结论：所建立的HPLC法准确、快速、专属性强、灵敏度高,可用于五味黄连丸中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量测定。     

HPLC法测定黄连中主要生物碱的方法学研究

目的建立2010年版《中国药典》黄连项下主要生物碱的含量测定方法。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-50mmol/L磷酸二氢钾溶液（50∶50）（混合液中加15mmol/L十二烷基硫酸钠,再以磷酸调节pH为4.0）;流速0.6ml/min;检测波长345nm;柱温：30℃。结果盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的线性范围依次为0.0113-0.7240μg、0.0218-1.3920μg、0.0148-0.9440μg、0.0719-4.6020μg;加样回收率依次为98.61%、99.70%、98.26%、100.20%,RSD依次为1.4%、1.3%、1.3%、1.5%。结论该方法简便、准确、可靠,可作为2010年版《中国药典》黄连质量标准中的含量测定方法 。     

一测多评法优选黄连最佳提取工艺

目的:优选黄连的最佳提取工艺。方法:应用一测多评法测定黄连中表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的含量,通过正交试验设计,以黄连中表小檗碱、黄连碱、巴马汀及小檗碱含量之和为指标优选黄连最佳提取工艺。结果:最佳工艺条件为10倍量70%乙醇提取3次,每次1.5 h。结论:该提取工艺可以有效提取黄连中小檗碱等多种生物碱。     

基于脑微透析联合LC-MS/MS技术的交泰丸在正常与失眠大鼠的脑内药动学特性比较研究

目的：比较交泰丸口服给药后,其主要活性成分（小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱）在正常和失眠大鼠的脑内药动学特性。 方法：运用液相色谱-串联质谱结合脑微透析方法对五种原小檗碱型生物碱进行测定。于大鼠的大脑海马体内植入脑微透析探针,交泰丸提取物灌胃给药后每30 min 收集一管透析液,持续10 h。采用BDS Hypersil C18色谱柱进行分离,流动相为乙腈-水（含5 mmol 乙酸铵并调pH至5.0）,时长4 min。检测方式为多反应检测模式,MS/MS条件分别为小檗碱m/z 336.0-320.1,巴马汀m/z 352.0-336.1,药根碱m/z 338.0-322.1,表小檗碱m/z 336.0-320.1,黄连碱m/z 320.0-292.1,四氢巴马汀（内标）m/z 356.4-192.1。 结果：建立的LC-MS/MS方法的线性、准确度、精密度、稳定性和基质效应均符合要求,定量下限为0.05 ng•mL-1。五种原小檗碱型生物碱能迅速分布于脑内,其在正常组和模型组的脑内药动学行为具有显著性差异,主要表现在AUC和半衰期。 结论：本实验有效地使用了LC-MS/MS结合脑微透析的方法对交泰丸中的五种原小檗碱型生物碱进行脑内药动学研究。结果显示,这五种原小檗碱型生物碱能直接作用于海马体,且其在失眠大鼠中的吸收显著高于正常大鼠。