基于PI3K/Akt信号通路探讨华良姜素抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的 观察华良姜素的体外抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测华良姜素（0、5、10、25、50、100、150、300 μmol·L^-1）对HepG2细胞不同时间（24、48、72 h）的增殖抑制作用；异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）凋亡试剂盒检测华良姜素（0、3、15、75 μmol·L^-1）对HepG2细胞的凋亡作用；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测华良姜素对HepG2细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响；转录组学分析华良姜素（15 μmol·L^-1）对HepG2细胞处理后基因差异表达与信号通路改变情况；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）验证差异基因［TEK、血小板源性生长因子α受体（PDGFRA）、脾酪氨酸激酶（SYK）、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基G肽（PIK3CG）、Janus激酶3（JAK3）、膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2（MAGI2）］mRNA相对表达。结果 与空白组比较，华良姜素组HepG2细胞的增殖降低（P<0.05，P<0.01）；凋亡率升高（P<0.01）；Bax蛋白表达水平升高（P<0.05，P<0.01），Bcl-2的蛋白表达水平降低（P<0.01）；转录测序得到59 000个受调控的表达基因，受调控显著差异表达基因125个，其中表达上调差异基因47个，表达下调差异基因74个，京都基因和基因组数据库（KEGG）分析显示，加华良姜素后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中与凋亡相关的差异基因变化较大。与空白组比较，华良姜素组（15 μmol·L^-1）TEK、PDGFRA、SYK、PIK3CG、JAK3、MAGI2的mRNA 表达水平降低（P<0.01）。结论 采用体外细胞学实验研究华良姜素能抑制HepG2细胞增殖，初步验证其凋亡，可能是影响了PI3K/Akt信号通路中部分差异基因的表达。为后续华良姜素抗肿瘤提供实验基础，同时有助于促进黄酮类化合物的开发利用及潜在的应用价值。     

扩心方通过调节TGF-β1/Smad2通路改善扩张型心肌病大鼠心肌纤维化＊

目的 观察扩心方对阿霉素诱导扩张型心肌病（DCM）大鼠心肌纤维化的改善作用并探究其作用机制。方法 选取Wistar大鼠68只，设8只为空白对照组（Con组），余60只以腹腔注射阿霉素建立DCM模型后随机分为模型组（Dox组），扩心方低（KXF-L组）、扩心方中（KXF-M组）、扩心方高（KXF-H组）剂量组、卡扩普利组（Cap组），每组12只，连续灌胃4周。治疗结束后，行心脏超声检查测左室结构及心功能变化；Masson染色观察心肌组织形态学改变；免疫组化观察心肌组织I型胶原（简称ColI）、III型胶原（简称ColIII）表达；蛋白芯片检测TGF-β1相关通路中各蛋白表达情况；蛋白印迹法（Western blot）测心肌TGF-β1、Smad2蛋白表达。结果 ①心超：与Con组相比，Dox组LVEDD、LVESD明显增加（P<0.01），LVEF、LVFS明显降低（P<0.01），IVS缩小（P<0.05），心肌重塑明显，而经过扩心方干预后，LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS明显改善（P<0.01）。②Masson染色：与Con组相比，Dox组心肌细胞肥大，间质增生，细胞排列紊乱，经扩心方干预后上述病理改变明显改善（P<0.01）。③免疫组化：与Con组相比，Dox组ColI、ColIII表达明显增多（P<0.01）。经扩心方治疗后有明显减少（P<0.05）。④蛋白芯片：与Con组相比，Dox组TGF-β信号传导通路中有3种蛋白表达上调，分别为PP2A-alpha（上调1.42倍）、Smad2（上调1.5倍）、TGFBR2（上调1.44倍），而经扩心方干预后Smad2表达下调0.81倍、TGFBR2表达下调0.77倍，差异有统计学意义（P<0.01）。⑤Western blot：与Con组相比，Dox组Smad2、TGF-β1蛋白表达明显增加（P<0.01），而经扩心方干预后，各剂量组TGF-β1表达均明显降低（P<0.01），KXF-H组Smad2蛋白明显降低（P<0.01）。结论 扩心方可改善阿霉素诱导的DCM大鼠心肌纤维化，其机制可能与抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关。     

参附益心颗粒通过线粒体KATP通道改善缺氧H2C9心肌细胞能量代谢的作用＊

目的 探索参附益心颗粒改善缺氧心肌细胞能量代谢的机制。方法 采用CCK-8法筛选出参附益心颗粒含药血清实验研究的药物浓度。H2C9心肌细胞随机分为正常组，缺氧组，缺氧 + 二氮嗪组，缺氧 + 参附益心颗粒组，缺氧 + 参附益心颗粒 + 5-羟基癸酸组.除正常组外，根据实验分组，缺氧处理前预先对细胞进行二氮嗪、5-羟基癸酸和参附益心颗粒含药血清处理，后将细胞置于缺氧的37℃的细胞培养箱中连续培养6 h。采用荧光素酶发光法检测细胞ATP的浓度，CCK-8检测细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞的凋亡水平，Western blot测定线粒体K_ATP（mitoK_ATP）的蛋白Kir6.2和SUR2A的表达。结果 根据CCK-8实验结果选择250 μM的参附益心颗粒含药血清作为实验药物浓度。与正常组相比，缺氧H2C9心肌细胞ATP水平显著降低，细胞的增殖能力降低，凋亡率增加，mitoK_ATP通道蛋白的Kir6.2和SUR2A的表达水平均显著降低（均P < 0.01）。与缺氧组相比，二氮嗪和参附益心颗粒组的ATP浓度，细胞增殖能力和Kir6.2，SUR2A蛋白表达水平均显著升高，细胞的凋亡率显著下降（均P < 0.01）。而参附益心颗粒经mitoK_ATP阻断剂5-羟基癸酸作用后，细胞的ATP浓度，增殖能力和Kir6.2，SUR2A的表达均显著下降（均P < 0.01），凋亡率明显升高（P < 0.01）。结论 参附益心颗粒可能通过mitoK_ATP通道改善缺氧心肌细胞的能量代谢。     

基于网络药理学及体外实验验证探究丹参治疗膀胱癌的分子机制

目的 基于网络药理学预测丹参治疗膀胱癌（BC）的潜在作用靶点及可能相关的信号通路，并通过体外细胞实验验证其潜在的分子机制。方法 应用中药系统药理数据库（TCMSP）筛选中药丹参活性成分；运用GeneCards和在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）获取BC疾病靶点；通过Venny 2.1工具整合丹参治疗BC的潜在靶点并绘制韦恩图；STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络；DAVID数据库进行基因本体（GO）富集分析及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测丹参酮Ⅱ_A（Tan Ⅱ_A），隐丹参酮（CPT），木犀草素（LUT）分别以不同浓度（0、1、2、4、8、16、32 μmol·L^-1）对膀胱癌T24、5637细胞的增殖抑制活性；碘化吡啶（PI）染色法分析Tan Ⅱ_A、CPT及LUT（0、4、8 μmol·L^-1）诱导5637细胞凋亡；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Tan Ⅱ_A（0、4、8、16 μmol·L^-1）对关键靶点蛋白表达的调控。结果 筛选结果显示丹参65个活性成分，39个丹参-BC共同作用靶点，KEGG通路富集分析主要包含神经元-配体-受体的相互作用、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号传导途径、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂抗性、缺氧诱导因子（HIF）-1信号通路等。CCK-8结果表明，与空白组比较，Tan Ⅱ_A、CPT及LUT均能明显抑制BC细胞T24和5637细胞的增殖（P<0.05），且3个药物均对5637细胞的增殖抑制作用更为显著；同时在5637细胞系中，Tan Ⅱ_A组的半抑制浓度（IC₅₀）明显低于CPT及LUT组（P<0.05）。PI染色结果显示，与空白组比较，Tan Ⅱ_A、CPT及LUT均能诱导5637细胞凋亡，诱导凋亡程度由高到低依次为Tan Ⅱ_A、CPT、LUT（P<0.05）。Western blot实验表明Tan Ⅱ_A作用于5637细胞后能降低表皮生长因子受体（EGFR）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K），磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达水平，且呈浓度依赖性。结论 丹参治疗BC具有多成分、多靶点、多通路的特点，其作用机制可能与下调EGFR、p-PI3K，p-Akt蛋白的表达，进而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。     

活血解毒方对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响＊

目的 研究活血解毒方对缺氧/复氧（H/R）所致的心肌细胞凋亡的影响。方法 体外培养H9C2心肌细胞并分成正常对照组（Control组）、缺氧复氧组（H/R组）、H/R + 活血解毒中药组、LY294002组和活血解毒中药 + LY294002组，其中正常对照组给予DMEM培养基培养，缺氧复氧组给予缺氧4 h、复氧6 h处理，缺氧复氧 + 活血解毒中药组、LY294002组和活血解毒中药 + LY294002组分别给予活血解毒中药、LY294002、活血解毒中药配合LY294002预处理24 h，然后均给予缺氧4 h、复氧6 h处理。采用CCK8检测各组心肌细胞的存活率，流式细胞术检测各组细胞凋亡水平，电镜观察各组心肌细胞中线粒体、自噬体的变化，Western Blot检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase3）、β-连环蛋白（β-Catenin）、p-p65、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白的表达。结果 活血解毒方预处理显著增加H/R诱导的H9C2心肌细胞凋亡，降低凋亡相关蛋白Cleaved caspase3、β-Catenin、p-p65表达，增加Bcl-2表达。结论 活血解毒方可通过抑制细胞凋亡，降低缺氧/复氧所致的心肌细胞损伤，其作用机制可能与PI3K信号通路相关。     

基于网络药理学探讨肉苁蓉-巴戟天药对治疗股骨头坏死的作用机制＊

目的 基于网络药理学方法探讨肉苁蓉-巴戟天药治疗股骨头坏死的作用机制。方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）对肉苁蓉-巴戟天药对中活性成分进行筛选，通过GeneCards、OMIM数据库检索股骨头坏死疾病靶点，取得交集基因后使用Cytoscape 3.7.1建立化合物-疾病-靶点调控网络，基于生物学信息注释数据库（DAVID）对核心靶点进行基因本体（GO）功能富集分析与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果 共得到肉苁蓉-巴戟天药对的21个活性成分和182个潜在靶点，相关的疾病靶点727个，GO富集分析主要包括细胞凋亡、脂质代谢异常、活性氧反应等功能途径；KEGG通路分析主要包括缺氧诱导因子-1信号通路、p53信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等。结论 基于网络药理学初步揭示出肉苁蓉-巴戟天药对治疗股骨头坏死多成分、多靶点、多通路的整体调节作用，其作用机制可能与脂质代谢异常、细胞凋亡、缺氧诱导因子-1信号通路、p53信号通路密切相关。     

β-榄香烯对非小细胞肺癌细胞迁移的影响及其机制研究＊

目的 探究β-榄香烯对非小细胞肺癌细胞迁移的影响及其作用机制。方法 将人非小细胞肺癌A549细胞分为5组：空白对照组、β-榄香烯低、中、高剂量组（10 μg·mL^-1、25 μg·mL^-1、50 μg·mL^-1）、顺铂（Cisplatin，CDDP，20 μmol/L）组。根据分组，分别用对应的药物处理细胞。Hoechst 33258染色观察细胞凋亡；Transwell小室检测细胞迁移；Western blot检测E-钙粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶（Phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase，p-PI3K）与磷酸化蛋白激酶B（Phosphorylated protein kinase B，p-AKT）表达水平。结果 与空白对照组相比，β-榄香烯高剂量组A549细胞出现凋亡现象，各β-榄香烯组的A549细胞迁移数量均显著减少（P < 0.05），β-榄香烯中、高剂量组A549细胞E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P < 0.05），Vimentin、p-PI3K与p-AKT蛋白表达水平明显降低（P < 0.05）。结论 β-榄香烯能诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡，抑制上皮-间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT）过程，进而减弱迁移能力，其作用机制可能与干扰PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

基于转录组测序研究不同海拔生境神农香菊的基因表达差异＊

目的 比较神农香菊不同海拔生境的主要生态环境因子差异和基因表达谱差异，研究神农香菊适应不同海拔生境的分子机制。方法 利用WheatA获得海拔相关的主要生态因子如温度和降水等并进行差异统计分析，利用转录组测序获得黄龙堰与宋洛两个不同海拔生境的神农香菊样本的基因表达谱，并基于GO、KEGG等数据库进行基因注释、功能富集分析，获取样本间的差异基因及其关联的代谢通路。结果 光照和温度是影响神农香菊生长发育的最重要的生态因子。不同海拔种植点样本的差异表达基因主要富集到植物激素信号转导、萜类、苯丙素类、不饱和脂肪酸类等次生代谢生物合成途径。其中，参与萜类生物合成途径的相关基因在不同海拔种植样本间显著上调或下调表达。结论 神农香菊可能通过调控萜类关键表达基因如DXS、DXR、HMGCS等的表达适应生境变化。研究结果为深入研究神农香菊不同海拔适应机制及新品种培育提供数据支撑。     

基于网络药理学的银杏叶提取物防治老年性聋的作用机制研究＊

目的 基于网络药理学研究银杏叶提取物防治老年性聋的的潜在作用机制，并通过动物实验进行初步验证。方法 运用中药系统药理学分析平台（TCMSP）筛选银杏叶的有效成分，GeneCards数据库获得老年性聋相关靶点基因，微生信对基因本体论（GO）、基因组百科全书（KEGG）进行功能富集，Cytoscape3.8.2构建疾病-靶点-通路网络图。采用D-半乳糖诱导SD大鼠制备老年性聋的动物模型，腹腔注射低、中、高剂量（10、20、30 mg·kg^-1）的银杏叶提取物，运用免疫荧光染色耳蜗基底膜铺片观察毛细胞形态变化；透射电子显微镜观察螺旋神经节细胞及线粒体超微结构变化；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清谷胱甘肽S转移酶（GST）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）含量；免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达及Bcl-2/Bax比值变化。结果 GO富集主要涉及细胞衰老、过氧化物酶成分、氧化还原酶的活性等；KEGG富集相关性较高的通路包括细胞凋亡通路和氧化应激相关的谷胱甘肽代谢通路，与凋亡相关的靶点基因包括：Bcl-2、Bax、AKT1、TNF等；与谷胱甘肽代谢相关靶点基因涉及到：GSTP1、GSTM1等。动物实验证实银杏叶提取物可减轻毛细胞丢失，降低螺旋神经节细胞及线粒体损伤，提高GST、T-SOD含量，降低MDA含量，上调Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值，下调Bax表达。结论 银杏叶提取物可能通过Bcl-2/Bax通路减轻耳蜗螺旋神经节细胞和毛细胞的氧化应激和细胞凋亡来延缓老年性聋的进程。     

龙血素B对棕榈酸引起的胰岛β细胞功能损伤的保护作用

目的: 初步探讨龙血素B对棕榈酸引起的胰岛β细胞功能损伤的保护作用及其机制。 方法: 以小鼠胰岛β细胞系NIT-1细胞作为实验细胞。实验分为空白对照组,5,10,20 μmol·L^-1龙血素B对照组,0.5 mmol·L^-1棕榈酸处理组,5,10,20 μmol·L^-1龙血素B干预组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基（ROS）含量和细胞凋亡率,半定量RT-PCR测定葡萄糖转运受体-2（GLUT-2）编码基因表达水平。 结果: 和棕榈酸处理组比较,龙血素B高剂量组可使NIT-1细胞活性存活率显著上升（P<0.05）,能显著降低细胞内ROS水平和细胞早期凋亡率（P<0.05）,可提高GLUT-2编码基因的表达水平（P<0.05）。 结论: 龙血素B对棕榈酸引起的胰岛β细胞功能损伤的保护作用可能是通过降低细胞内ROS含量、显著上调受抑制的GLUT2编码基因表达、降低细胞氧化应激水平、减少游离脂肪酸引起的NIT-1细胞早期凋亡、逆转由氧化应激激活的转录因子叉头框蛋白-1（FOXO1）导致的葡萄糖代谢障碍和其他效应,产生对胰岛β细胞的保护作用。     

珍珠母超微粉蛋白及寡肽对小鼠镇静安眠作用比较

目的比较珍珠母超微粉蛋白、寡肽对小鼠镇静安眠作用。方法利用PCPA制造小鼠失眠模型,观察小鼠的自主活动情况,ELISA法测小鼠血中ATCH含量并计算脑及脑系数。结果阳性对照组、寡肽组小鼠的自主活动次数显著降低,小鼠血中ACTH的含量增加,但脑干系数无影响。结论超微粉寡肽类成分(MCP)镇静安眠活性最强,为镇静安眠主要活性部位,调节ACTH可能是其镇静安眠机制。     

《老老恒言》论老年养生

简要论述了《老老恒言》中有关老年养生的思想和方法 ,认为饮食以调理脾胃为要 ,应注意饮食有节、五味调和、清淡为补 ;起居以养静为要 ,应注意调顺四时、起居有常、静养与导引相结合 ;养性以安命为要 ,应注意清心寡欲、修心养性     

丁香苦苷不同给药途径的药物动力学研究

目的:研究并比较丁香苦苷单体两种给药途径在家兔体内的药物动力学过程,考察丁香苦苷单体口服后的绝对生物利用度。方法:家兔静脉注射丁香苦苷注射液和灌胃给予丁香苦苷水溶液,采集血样,固相萃取小柱活化方法处理血浆后高效液相色谱法测定丁香苦苷血浆浓度,采用药动学软件3P97进行数据处理,确定药动学参数。结果:丁香苦苷静脉给药后在体内符合二室模型分布,其主要药动学参数分别如下:T1/2α为2.41min,T1/2β为15.38min。灌胃给药后丁香苦苷的药动学行为符合一级吸收二室模型,Cmax为17.91min,T1/2(α)为9.642min,T1/2(β)31.748min。绝对生物利用度为35.9%。结论:丁香苦苷单体经口服和静脉两种给药途径给药后,吸收和消除均较快。     

病性变化和转化的哲理数学原理

病性的变化和转化以及疾病的传变是中医病理学的2个核心问题。它们可分别从阴阳五行数学的公理1和公理2、3得到圆满的解释。病性变化,其症结在于主导属性明晰度的大小发生变化;病性转化,其症结则在于主导属性明晰度的正负号发生变化。     

中药产业竞争力提升战略研究

本文运用了竞争力理论与战略理论，分析了中药产业竞争力提升的环境与条件，提出了提升中药产业竞争力的三大战略目标、三大总体战略、四条战略举措及三个实施阶段与重点任务。     

对中医学科建设与学科带头人培养的思考

通过中医学术发展的历史沿革回顾,提出了中医药学科建设的总体构思,指出要发展一个大的一级学科,首先要有教育,这是发展学科的基础;其次是科研来提高教育水平,并指导临床;再次是临床;三者缺一不可。同时提出了学科带头人应具备的条件及如何培养学科带头人。     

胃脘痛证候量化诊断的探讨

目的:探讨胃脘痛证候的量化诊断规律。方法:以因子分析方法对808例胃脘痛患者的临床四诊信息进行分析。结果:因子分析从胃脘痛临床症状中提取12个因子,分别代表脾胃湿热、脾胃虚寒、肝胃气滞、气阴两虚、胃热炽盛、胃阴亏虚、肝胃郁热、脾胃气虚等8个证候,同时对各个证候进行量化。结论:因子分析所得的胃脘痛的常见证候分类及量化诊断为临床辨证提供客观依据。     

中医方剂学考试改革的探索与实践

传统的闭卷考试不能很好地反映方剂学教学的效果,因此,我们试行了以多种形式相结合的考试改革,考试成绩由笔试、机试、平时3个方面组成。结果大大提高了学生分析问题和解决问题的能力,激发了学生学习的兴趣,提高了教师教学水平,带动了教学改革和教学研究的全面进行。     

中国中医科学院西苑医院肿瘤科

本文较详细地介绍了中国中医科学院西苑医院肿瘤科成立以来,确立了以中医综合治疗结、直肠癌为主攻方向,不断探索具体治疗方法和建立系统评价体系的成长历程。他们作为国家中医药管理局"十一五"结直肠癌专病建设组长单位,牵头联合全国26家医院以及挪威国家补充替代医学研究中心,进行的中医结直肠癌的诊疗方案的验证工作,牵头制定《结直肠癌中西医结合诊疗方案》,以及探索建立辐射社区医院的结直肠癌中医三级防治网络等工作,得到国内外医学界的广泛认可,具有典范借鉴意义。     

白花前胡地上部分挥发性成分对比

目的:研究白花前胡地上各部位挥发油的化学成分。方法:采用水蒸汽蒸馏法提取白花前胡新鲜地上部分各部位的挥发油,以气相色谱—质谱联用仪测定其化学组分。结果:花中含量较高的成分为氧化石竹烯(26.590%),2,6,6-三甲基双环[3.1.1]-2-烯(13.605%);果中为石竹烯(34.589%),1R-α-蒎烯(14.444%);叶柄中为(1α,4aα,8aα)-1,2,3,4,4a,5,6,8a-八氢-7-甲基-4-亚甲基-1-(1-异丙基)-萘(33.671%),[s-(E,E)]-1-甲基-5-亚甲基-8-(1-异丙基)-1,6-环己烯(22.474%%),1R-α-蒎烯(11.479%);茎中为1R-α-蒎烯(15.544%),[s-(E,E)]-1-甲基-5-亚甲基-8-(1-异丙基)-1,6-环己烯(14.212%),石竹烯(11.551%)。结论:白花前胡地上部分挥发油中,石竹烯类、1R-α-蒎烯含量较高,茎和叶柄挥发油中萘类成分含量较高,在考虑综合利用的同时,应防止人畜中毒。