益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

臭牡丹总黄酮通过调控Wnt/β-catenin通路影响A549细胞上皮间质转化研究

目的探讨臭牡丹总黄酮对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法将pcDNA3.1+空载体与S45位点突变的β-链蛋白(S45A-β-catenin)真核过表达载体转染A549细胞,给予臭牡丹总黄酮干预。MTT法检测细胞的相对存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转录因子Snail 2(Slug)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β的表达水平。结果转染S45A-β-catenin质粒后,A549细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显增强,β-catenin、vimentin蛋白表达水平显著上调,E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白的表达水平显著下调。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭能力,对转染S45A-β-catenin质粒组的细胞作用尤为明显。对转染空载质粒的A549细胞,可上调E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β表达,下调β-catenin、vimentin表达;对转染S45A-β-catenin质粒的A549细胞,可下调β-catenin、vimentin表达。结论抑制细胞中β-catenin的高表达并调控下游的一系列因子,从而影响Wnt/β-catenin通路诱导的上皮间质转化(EMT)现象可能是臭牡丹总黄酮抑制肺癌侵袭、转移的重要作用机制之一。     

姜黄素抑制库普夫细胞活化作用的机制研究

目的:通过分析姜黄素对库普夫细胞(kupffer cells,KCs)促炎因子和趋化因子分泌功能的抑制情况,阐述姜黄素对急性肝损伤的治疗作用。方法:通过原位灌注和梯度离心的方法提取小鼠肝脏中原代KCs细胞,予以不同浓度的姜黄素预处理后,加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后培养24 h。实时定量PCR法检测KCs中促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)mRNA的表达及趋化因子CXC家族趋化因子配体1(C-X-C Motif Chemokine Ligand 1,CXCL1)、趋化因子CXC家族趋化因子配体2(C-X-C Motif Chemokine Ligand 2,CXCL2)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、单核细胞趋化蛋白2(monocyte chemotactic protein 2,MCP-2)和MCP-1的mRNA表达;利用WB检测ERK1/2、P38和JNK细胞通路的变化。结果:予以LPS刺激后,KCs表达的促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL1、CXCL2和MCP-1表达明显升高,予以不同浓度的姜黄素预处理后,TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL1、CXCL2和MCP-1表达均明显降低,且呈剂量依赖性,不同组别之间差异有统计学意义(P0.05)。WB结果显示姜黄素可以缓解LPS诱导的ERK1/2、P38和JNK蛋白磷酸化水平(P0.05)。结论:姜黄素可能是通过抑制KCs活化来减少促炎因子和趋化因子分泌,进而缓解急性肝损伤。     

肺岩宁下调转录因子Snail表达抑制人肺腺癌A549细胞EMT发生及侵袭转移

目的 研究肺岩宁抑制人肺腺癌A549细胞侵袭转移的分子机制。方法 体外培养A549细胞,细胞计数试剂盒（Cell counting kit 8,CCK-8）检测不同浓度的肺岩宁对A549细胞生长增殖的影响;细胞形态学观察和免疫印迹实验（Western blot）检测转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)对A549细胞上皮间质转化（Epithelial mesenchymal transformation,EMT）发生的影响;Western blot、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）实验检测TGF-β1诱导前后,肺岩宁对A549细胞EMT标志蛋白及mRNA表达变化;划痕实验、Transwell实验检测TGF-β1诱导前后,肺岩宁对A549细胞侵袭和迁移能力的影响变化;构建稳定过表达Snail的A549细胞株,Western blot、RT-qPCR实验检测稳定过表达锌指转录因子（Snail）后,肺岩宁对A549细胞EMT标志蛋...     

黄芩苷对人肺腺癌LTEP-A2细胞的抑制作用及机制研究

目的:研究观察黄芩苷对人肺腺癌LTEP-A2细胞株体外的抑制作用及相关机制。方法:采用不同浓度的黄芩苷干预人肺腺癌LTEP-A2细胞株,用CCK-8方法检测不同时间点不同浓度的黄芩苷对肺癌细胞增殖的抑制程度,接着用细胞划痕试验和Transwell小室侵袭试验观察黄芩苷对肺癌细胞体外迁移、侵袭能力的影响;用Western blot进一步检测黄芩苷干预后肺癌细胞MMP-2、MMP-9、TGF-β的表达的变化。结果:黄芩苷能明显抑制肺癌细胞增殖;能不同程度降低肺癌细胞的迁移、侵袭、体外划痕愈合能力,呈浓度依赖性;黄芩苷能不同程度下调MMP-2、MMP-9表达,其中以高浓度效果明显,中浓度居中,低浓度作用稍弱,与空白对照组比较,组间差异有统计学意义,P0.05;对肺癌细胞TGF-β的表达没有显著影响,与对照组比较,P0.05。结论:黄芩苷能不同程度地降低肺癌增殖迁移侵袭的能力,其机制可能是通过下调MMP-2、MMP-9的表达从而对肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭发挥抑制作用。     

β-羟基异戊酰紫草素对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的通过体外实验研究β-羟基异戊酰紫草素(β-HIVS)对人肺腺癌A549细胞生长的抑制作用,并对其机制进行初步探讨。方法体外培养A549细胞,分为对照组和不同浓度的β-HIVS组。采用CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室法检测β-HIVS对A549细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移的影响;实时荧光定量PCR技术和Western blotting法检测β-HIVS处理后A549细胞p53、Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况。结果β-HIVS能抑制A549细胞的增殖;诱导A549细胞凋亡;阻滞细胞由G_0/G_1期向S期的发展;抑制细胞侵袭和迁移;呈浓度依赖性地上调p53蛋白和mRNA的表达,下调Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结论β-HIVS可显著抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调p53的表达和下调Bcl-2的表达有关。     

三痹汤对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜病理改变的影响及其机制研究

目的:观察三痹汤对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜组织内的病理变化及关节滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、调节活化蛋白(RANTES)、转化生长因子-β(TGF-β)、白介素-17(IL-17)表达的影响,探讨其作用机制。方法:采用随机数字表法将所有大鼠分为空白对照组、模型对照组、三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、雷公藤对照组,每组12只,除空白对照组外余4组均用弗式完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型。造模后8d开始灌胃给予相应药物或生理盐水,连续给药21d。于实验期间每周对各组大鼠进行关节炎症评分;治疗结束后处死大鼠,取双侧膝关节滑膜组织,光镜下观察关节滑膜病理变化,免疫组化检测关节滑膜TNF-α、MCP-1、RANTES、TGF-β、IL-17的表达。结果:与空白对照组比较,造模后各组大鼠关节滑膜组织炎性改变严重,经三痹汤或雷公藤治疗后,病理改变明显改善。与模型对照组比较,三痹汤高剂量组原发足于第3周后、继发足于第2周后关节炎症评分明显减少(P0.05);与雷公藤对照组比较,三痹汤高剂量组于第2周时继发足关节炎症评分明显降低(P0.05)。与空白对照组比较,各组大鼠滑膜TNF-α、MCP-1、RANTES、TGF-β和IL-17表达明显增加(P0.05);与模型对照组比较,三痹汤中、高剂量和雷公藤能下调滑膜组织中TNF-α、MCP-1、RANTES、IL-17表达,上调TGF-β表达,差异均具有统计学意义(P0.05);与雷公藤对照组比较,三痹汤中剂量组MCP-1表达明显增高(P0.05),TGF-β、IL-17表达明显降低(P0.05),三痹汤高剂量组RANTES、IL-17表达明显降低(P0.05)。结论 :三痹汤通过下调关节滑膜TNF-α、MCP-1、RANTES、IL-17表达,上调TGF-β表达,从而抑制细胞炎性因子,减轻关节肿胀及滑膜细胞增生,进而延缓关节损伤。     

盆炎灌肠方对子宫内膜细胞炎症模型抗炎作用的实验研究

[目的]研究盆炎灌肠方对子宫内膜细胞炎症模型的抗炎作用。[方法]运用细菌脂多糖(LPS)诱导人子宫内膜细胞制作炎症模型,分为3组,正常对照组、炎症模型组、实验组,培养72 h,检测各组细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度和细胞因子IL-1β、TNF-αm RNA表达及核转录因子p65(NF-κB p65)蛋白表达。[结果]盆炎灌肠方可显著降低炎症模型组炎症细胞因子IL-1β、TNF-α的分泌及其m RNA的表达,明显抑制炎症模型组细胞核中NF-κB p65蛋白表达水平。[结论]盆炎灌肠方对子宫内膜细胞炎症模型具有明显的抗炎作用,且此作用可能与NF-κB途径相关。     

小檗碱对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究小檗碱对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养THP-1细胞并加入小檗碱后,MTT法检测细胞增殖。100 ng/mL PMA和20 ng/mL IL-4将THP-1细胞诱导成M2型肿瘤相关巨噬细胞,小檗碱预给药后,随机分为对照组、模型组、小檗碱组,细胞培养上清与A549细胞共培养。RT-PCR、Western blot、ELISA检测CD206、IL-10、TGF-β表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果小檗碱最佳刺激浓度为20μmol/L。与模型组比较,小檗碱组可显著抑制CD206、IL-10、TGF-β表达(P0.05)。小檗碱可抑制THP-1细胞转化为M2型肿瘤相关巨噬细胞。结论小檗碱可调节A549细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2型巨噬细胞的转化有关。     

电针对气囊炎症模型大鼠前炎症细胞因子诱导COX-2表达的影响

目的:探讨电针对前炎症细胞因子活化COX-2的干预作用.方法:将健康雌性Wistar大鼠背部埋植一个经灭菌的聚四氟乙烯chamber建立大鼠气囊(air pouch)模型,120只合格大鼠分别注入人重组IL-1β或TNF-α,并随机分为IL-1β组、IL-1β+电针组、TNF-α组和TNF-α+电针组;两电针组刺激部位为大鼠双侧曲池穴,时间30分钟.RT-PCR和Western blotting法分别检测注入细胞因子后1、5、24小时囊内液沉淀细胞中COX-2的mRNA和蛋白表达.结果:1小时时,电针明显下调IL-1β、TNF-α诱导的COX-2mRNA和蛋白高表达;5小时时,电针下调TNF-α诱导的COX-2mRNA和蛋白表达,但上调IL-1β诱导的COX-2表达;24小时时,电针下调TNF-α诱导的COX-2mRNA表达但上调其蛋白表达,上调IL-1β诱导的COX-2mRNA表达而轻微下调其蛋白表达.结论:在炎症初期电针可有效干预前炎症细胞因子对COX-2的活化作用,但在不同时段,对不同细胞因子诱导的COX-2mRNA或蛋白表达的干预效应和程度上存在差异.     

百合总皂苷对肺癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移的作用及其初步机制研究

该文探讨百合总皂苷(TSLL)对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的潜在作用及其可能机制。采用CCK-8法、克隆形成实验及Ed U染色检测TSLL对A549细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染法和Hoechst 33342染色法荧光显微镜观察TSLL对细胞凋亡形态的影响,Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测TSLL对细胞迁移、侵袭的影响,Western blot法检测TSLL对肿瘤细胞内相关蛋白的表达变化。结果显示,TSLL干预肺癌A549细胞24,48或72 h均可显著抑制细胞生长,其IC50分别约为229,173,71 mg·L~(-1); TSLL可显著降低A549细胞克隆形成率; TSLL可浓度依赖性地降低A549细胞DNA合成率; TSLL可明显诱导A549细胞凋亡; TSLL可减少A549细胞迁移行为; TSLL可减少A549细胞侵袭人工基底膜;TSLL可显著下调肺癌A549细胞内PCNA蛋白的表达水平以及Bcl-2/Bax蛋白表达水平比值,同时促进procaspase 3的激活,此外TSLL对EMT相关标志蛋白E-cadherin,vimentin的表达均无明显的影响。以上结果表明TSLL对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭具有抑制作用,并且对细胞凋亡具有诱导作用。TSLL可通过下调PCNA的表达抑制肺癌细胞DNA合成,从而抑制细胞增殖。TSLL对肺癌细胞凋亡的诱导作用与其对Bcl-2,Bax蛋白的表达调控有关。此外,TSLL抗肺癌细胞侵袭转移作用与EMT无明显的关联性。     

慢加亚急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症时Th17/Treg表达变化的实验研究

目的:观察Treg/Th17细胞失衡及相关细胞因子在慢加亚急性肝衰竭肠源性内毒素血症(IETM)时的表达变化,进而探讨Treg/Th17细胞对内毒素介导的炎症反应的调控作用。方法:采用牛血清白蛋白致敏建立免疫性肝纤维化大鼠模型,以腹腔注射D-Gal+LPS液(合D-Gal 400mg/kg,LPS 100μg/kg)急性攻击建立肝衰竭IETM大鼠模型。流式细胞术检测不同时间点大鼠外周血中Th17、Treg细胞频数,ELISA法测定不同时间节点大鼠结肠组织IL-10、TNF-α、IL-17A、IL-23、TGF-β水平。结果:与正常组比较,模型组Treg、Th17细胞频数在各时间节点均升高(P 0. 05),Treg、Th17细胞与前一时间节点比较均有上升(P 0. 05);与正常组比较,模型组结肠组织Treg/Th17型细胞因子IL-17A、IL-23、TNF-α、TGF-β、IL-10各时间节点表达均升高(P 0. 05),且各炎症因子与前一时间节点比较均有上升(P 0. 05);正常组大鼠IL-10、TGF-β等抑炎因子水平高于IL-17A、IL-23、TNF-α等促炎因子,模型组Th17比例高于Treg,失衡向Th17方向偏移。结论:肝衰竭IETM发生时Treg/Th17细胞失衡,向Th17方向偏移,相关抑炎、促炎因子均释放增加,加剧IETM程度。     

血满草多糖介导巨噬细胞M1型极化抑制肺癌的作用机制研究

目的：探讨血满草多糖（SPS-1）调控巨噬细胞极化对小鼠肺癌细胞Lewis细胞迁移、侵袭及凋亡的影响。方法：采用Western blot检测SPS-1对IL-4诱导的M2型巨噬细胞RAW264.7膜表面分子CD206、CD86的表达水平，采用RT-qPCR检测RAW264.7细胞炎性因子TNF-α、IL-10、TGF-β及特异性iNOS和Arg-1 mRNA表达水平的影响。共培养条件下，采用Transwell法检测SPS-1对Lewis细胞迁移与侵袭能力的影响，采用ELISA技术检测Lewis细胞中HIF-1α和VEGF的分泌量，采用流式细胞术检测Lewis细胞的凋亡，采用Western blot检测转移相关蛋白N-Cadherin、E-Cadherin和Vimentin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果：SPS-1可显著增加M2型RAW264.7细胞膜表面分子CD86/CD206的比例，TNF-α和iNOS mRNA显著上调，IL-10、TGF-β和Arg-1 mRNA的表达量显著下调。共培养条件下，SPS-1显著抑制Lewis细胞的侵袭和迁移，并降低HIF-1α和VEGF的分泌及N-cadherin和Vimentin的表达，同时显著上调E-Cadherin的表达。凋亡实验结果显示，SPS-1亦可显著促进Lewis细胞的凋亡。结论：SPS-1可通过调控RAW264.7细胞极化抑制Lewis细胞的转移和凋亡。     

臭牡丹总黄酮对A549细胞增殖迁移侵袭力及Wnt通路相关蛋白的影响

目的:观察臭牡丹总黄酮对β-catenin过表达A549细胞增殖、迁移、侵袭力以及Wnt通路相关蛋白的影响。方法:选取构建β-catenin真核过表达载体并转染A549细胞,将其分为6组,分别为未转染细胞、未转染细胞+臭牡丹总黄酮、空载组、空载+臭牡丹总黄酮、β-catenin过表达组、β-catenin过表达+臭牡丹总黄酮。MTT法检测各组细胞的相对存活率,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的侵袭力。Western Blot检测各组Wnt通路相关蛋白β-catenin、GSK-3β、P-GSK-3β、c-myc、CyclinD1的表达。结果:转染β-catenin过表达的A549细胞增殖能力、迁移能力、侵袭力均明显增强(P0.05),并显著上调wnt通路相关因子β-catenin、C-Myc,CyclinD的蛋白表达,下调P-GSK-3β的蛋白表达(P0.05)。采用臭牡丹总黄酮干预后,能明显降低各组细胞的存活率,降低细胞向划痕区域迁移的能力,减少侵袭小室穿过基膜的细胞数(P0.05)。并下调β-catenin、C-Myc、CyclinD1表达(P0.05),上调P-GSK-3β表达(P0.05)。臭牡丹总黄酮的干预作用对转染β-catenin过表达细胞尤为明显。结论:转染β-catenin过表达的A549细胞其增殖、迁移、侵袭力均明显增强,能激活Wnt/β-catenin通路。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭力,其机制可能是通过抑制细胞中β-catenin的高表达从而调控下游的一系列因子而起到抑制Wnt/β-catenin通路的作用。     

壮药扶正方对TAMs与肿瘤细胞共培养体系A549细胞生物学行为的影响

目的:探讨壮药扶正方含药血清对肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）与肺癌A549细胞共培养体系肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为影响及可能的作用机制。方法:采用氟波酯（PMA）联合白细胞介素-4、白细胞介素-13诱导人急性白血病单核细胞株（THP-1）建立TAMs体外模型,实时定量PCR及酶联免疫吸附试验法分析含药血清（低、中、高剂量组)及药物处理后24、48、72 h对TAMs表型调节;采用共培养体系,以肺癌A549细胞为研究对象,分别采用MTT法、实时细胞分析技术（RTCA）、Transwell法检测不同条件下A549细胞增殖、迁移及侵袭情况。结果:壮药扶正方含药血清能显著上调TMAs中M1型标志物白细胞介素-12、诱导型一氧化氮合酶表达水平,下调M2型标志物白细胞介素-10、CD206表达水平;与空白对照组比较,共培养组A549细胞增殖明显增加,细胞迁移及侵袭能力均明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与共培养组比较,壮药扶正方含药血清低、中、高剂量组A549细胞增殖、迁移和侵袭作用受抑制,且呈剂量依赖性（P<0.05）。结论:壮药扶正方含药血清在共培养体系中能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移及侵袭作用,机制可能与其调节肿瘤微环境TAMs表型有关。     

肺岩宁方调控TGF-β介导的骨转移相关PTHrP/RANKL信号通路抗肺癌侵袭转移

目的:探讨肺岩宁方通过调控转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)介导的骨转移相关甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)/NF-κB受体活化因子配体(receptor or activator of NF-κB ligand,RANKL)信号通路抗肺癌细胞侵袭转移的作用机制。方法:体外培养A549肺癌细胞,用不同终浓度肺岩宁方进行处理,未加肺岩宁方为空白组。分别采用cell counting kit-8(CCK-8)检测肺岩宁方对A549细胞增殖抑制作用,计算半数浓度抑制率(IC50);采用转移小室(transwell)侵袭实验、划痕实验检测肺岩宁方对A549细胞体外侵袭及迁移的抑制作用;以及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TGF-β,PTHrP,RANKL蛋白表达。结果:肺岩宁方作用于A549肺癌细胞48 h后,与空白组相比,肺岩宁方(12.5,25,50 mg·L~(-1))组穿膜细胞明显减少(P0.05,P0.01);肺岩宁方(12.5,25,50 mg·L~(-1))组的划痕距离较空白组明显降低(P0.05,P0.01);且肺岩宁方(25,50 mg·L~(-1))组作用于A549细胞后,TGF-β蛋白表达明显下调(P0.05),其对应下游靶基因PTHrP及RANKL蛋白也发生明显表达下调(P0.05)。结论:肺岩宁方可抑制A549肺癌细胞的侵袭迁移能力,直接下调TGF-β基因及其下游靶基因PTHrP,RANKL蛋白表达,且具有浓度相关性。本研究证实了肺岩宁方通过调控TGF-β介导的骨转移相关PTHrP/RANKL信号通路,以达到抗肺癌侵袭转移的作用机制,这为肺癌临床靶向治疗提供了一定的实验依据,也显示了肺岩宁方作为抗肺癌侵袭转移药物广泛的应用前景。     

扶正祛邪方对肺癌A549细胞发生上皮间质转化的抑制作用研究

目的:研究中药复方扶正祛邪方对肺癌A549细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的抑制作用及机制研究。方法:采用MTT方法观察扶正祛邪方对人腺癌A549细胞的抑制作用;Western blot方法观察A549细胞EMT过程中上皮细胞、间质细胞标志物E-cadherin、N-cadherin的表达,以及信号分子P-Smad2/3的表达;RT-PCR检测扶正祛邪方对I型胶原诱导人腺癌A549细胞EMT过程中TGF-β3mRNA的影响。结果:(1)MTT结果显示:扶正祛邪方对人腺癌A549细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖。(2)Western blot结果显示:与模型组相比,扶正祛邪方上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin、P-Smad2/3的蛋白表达(P<0.05);RT-PCR结果显示:扶正祛邪方下调TGF-β3mRNA的表达,呈浓度依赖性。结论:(1)扶正祛邪方对A549细胞有直接的抑制作用;(2)扶正祛邪方对TGF-β1诱导人腺癌A549细胞EMT有抑制作用,其机制与抑制I型胶原诱导TGF-β3mRNA表达,进而抑制Smad2/3的磷酸化,上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin蛋白表达有关。     

用于评价致敏原的IgG-HepG2细胞激活过程中相关炎性因子表达的观察

目的 研究转IgG启动子调控GFP基因表达HepG2细胞激活过程中相关炎性因子表达的变化.方法 采用Elisa法评价葛根素和LPS后诱导IgG启动子转基因细胞分泌IL-1β,IL-8,TNF-α和MCP-1蛋白量,qPCR法评价炎性相关因子和固有免疫相关因子的mRNA转录表达量.结果 和HepG2细胞相比,IgG启动子转基因细胞不增加炎性因子分泌和基因表达量,不激活固有免疫.葛根素不增加转基因细胞炎性因子分泌和基因表达量,不激活固有免疫系统.LPS激活固有免疫系统,显著升高IL-8,TNF-α和MCP-1分泌量.结论 IgG启动子转基因HepG2细胞可以作为评价Ⅱ型变态反应的特异性细胞模型,提示葛根素可以作为特异性激活IgG启动子的阳性对照品.     

黄芩苷、栀子苷及其配伍对小胶质细胞增殖及激活后炎性因子影响

目的研究黄芩苷(BC)、栀子苷(GD)及其配伍对小胶质细胞增殖及对细胞激活后释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)和转化生长因子-β(TGF-β)的影响。方法 MTT检测BC、GD及其配伍对小胶质细胞激活损伤后增殖影响;Griess法检测其对小胶质细胞分泌一氧化氮(NO)的影响;Elisa检测其对抗炎因子TGF-β、IL-10,促炎因子TNF-α、IL-1β的表达。结果 BC、GD及其配伍提升脂多糖刺激后BV2细胞存活率,减少NO分泌,减少细胞IL-lβ、TNF-a的表达;GD增加IL-10释放;BC提高TGF-β的表达;配伍组提高IL-10及TGF-β的水平。结论 BC、GD及其配伍提高小胶质细胞激活损伤后的存活率,升高IL-10、TGF-β的表达,降低IL-1β、TNF-α的表达从而减少细胞损伤。     

六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1蛋白表达的影响

目的:观察六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1表达的影响,探讨六君子汤影响肺癌转移的可能机制。方法:制备六君子汤含药血清,体外培养A549细胞。实验分三组:空白血清组,空白血清+TGF-β1组,六君子汤最佳浓度含药血清+TGF-β1组。普通显微镜下观察TGF-β1对A549细胞的干预程度。细胞划痕实验检测六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞迁移能力的影响。免疫细胞化学法和Western Blot技术检测MMP-9和整合素β1在蛋白表达水平上的变化。结果:TGF-β1能够明显诱导A549细胞发生上皮间质转化。与空白血清组比较,空白血清+TGF-β1组细胞迁移程度明显增加(P0.05),MMP-9和整合素β1的蛋白表达增加(P0.05);与空白血清+TGF-β1组比较,含药血清组细胞迁移程度下降(P0.05),MMP-9和整合素β1的蛋白表达下降(P0.05)。结论:(1)六君子汤含药血清能够减缓TGF-β1介导的A549细胞的迁移能力;(2)六君子汤含药血清能够降低TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1蛋白的表达。