呼吸中枢M受体亚型与细胞内钙

目的探讨呼吸中枢Ｍ受体亚型与细胞内钙的关系。方法采用Ｆｕｒａ－２双波长荧光法测定Ｍ１和Ｍ２受体激动剂和拮抗剂对胎鼠桥脑和延脑神经细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响。结果在静息状态下，其［Ｃａ２＋］ｉ为７２±６ｎｍｏｌ／Ｌ，加入２００μｍｏｌ／ＬＡｃｈ，［Ｃａ２＋］ｉ升高３８％，匹鲁卡品（Ｐｉｌ）０．４～２００μｍｏｌ／Ｌ无明显的升高细胞内钙的作用，而Ｍ２受体激动剂６β－乙酰氧基去甲托烷（６β－ＡＮ）１～１０μｍｏｌ／Ｌ。对神经细胞内的游离钙均无明显影响。Ｍ１－Ｒ拮抗剂哌仑西平（Ｐｉ）６０μｍｏｌ／Ｌ能拮抗Ａｃｈ升高细胞内钙的作用，Ｍ２－Ｒ拮抗剂ＡＦ－ＤＸ１１６２０μｍｏｌ／Ｌ不能拮抗。结论Ｍ１－Ｒ兴奋与细胞内钙升高有关。     

钙拮抗剂TMB-8抑制BHQ,NE和KCl引起的培养乳牛基底动脉单个平滑肌细胞内游离钙的升高

用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统,测量单个细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）,研究８－（Ｎ,Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３,４,５－三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ－８）对培养乳牛基底动脉平滑肌［Ｃａ２＋］ｉ的作用。在细胞外钙浓度为１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时,Ｔ...     

海风藤醇B对PAF诱导的兔血小板钙内流和胞内游离钙浓度升高的抑制作用

应用４５Ｃａ２＋和钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２／ＡＭ进行实验，发现海风藤醇Ｂ（１０、１００μｍｏｌ·Ｌ－１）无论对血小板激活因子（ＰＡＦ）引起的兔洗涤血小板Ｃａ２＋内流还是胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）升高均有抑制作用，且呈良好的剂量相关，最大抑制率分别为３７．２％和５０．８％；但对Ａ２３１８７引起的胞内［Ｃａ２＋］ｉ升高无显著抑制作用。结果表明：海风藤醇Ｂ能选择性拮抗ＰＡＦ诱导的钙内流和［Ｃａ２＋］ｉ的升高。     

Fura－2荷载血小板胞内游离钙浓度的连续测定

以Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２荷载血小板，连续测定血小板胞内游离Ｃａ２＋（［Ｃａ２＋］ｉ）浓度动态变化。在生理胞外Ｃａ２＋浓度时。正常成人血小板［Ｃａ２＋］ｉ静息水平为１０８．３±３．６ｎｍｏｌ／Ｌ（－ｘ±ｓ－ｘｎ＝１５，下同），以凝血酶０．２Ｕ／ｍｌ作诱导，［Ｃａ２＋］ｉ迅速升至峰值７７０．３±２７．３ｎｍｏｌ／Ｌ，其下降幅度在４ｍｉｎ时为４０．９％±１．８％；以ＴＭＢ８４００μｍｏｌ／Ｌ阻滞胞内Ｃａ２＋释放，［Ｃａ２＋］ｉ的峰值（４４３．７±２７．７ｎｍｏｌ／Ｌ）明显下降（Ｐ＜０．００１），而４ｍｉｎ的下降幅度（４７．７％±３．８％）则无明显差异（Ｐ＞０．０５）。在胞外Ｃａ２＋＜１０－８ｍｏｌ／Ｌ时，［Ｃａ２＋］ｉ静息水平７０．２±７．５ｎｍｏｌ／Ｌ，作同样的诱导，［Ｃａ２＋］ｉ的峰值（３２１．２±１７．８ｎｍｏｌ／Ｌ）及下降幅度（９９．２％±３．６％）均有显著变化（ｐ＜０．００１）。结果表明，本文所建立的方法能连续测定血小板［Ｃａ２＋］ｉ的动态变化。     

成年大鼠脑细胞内钙的测定

目的：探讨成年大鼠脑细胞分离及其细胞内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的测定。方法：低浓度胰蛋白酶消化及机械吹打等方法分离脑细胞，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ２＋－敏感的荧光指示剂，应用荧光分光光度计测定［Ｃａ２＋］ｉ。结果：分离的脑细胞存活率在９５％以上，在细胞外Ｃａ２＋１ｍｍｏｌ／Ｌ的情况下［Ｃａ２＋］ｉ为（２７０±３５）ｎｍｏｌ／Ｌ，高钾使［Ｃａ２＋］ｉ急剧增加。结论：本方法分离成年大鼠脑细胞简单、可靠，且能准确反映［Ｃａ２＋］ｉ的变化。     

钙指示剂Fura－2／AM对血小板功能及细胞内游离钙测定结果的影响

本实验结果表明，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载家兔洗脱血小板，当Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的浓度低于２μｍｏｌ／Ｌ时，３μｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ花生四稀酸（ＡＡ）诱导的血小板聚集（透光度增加：７２．５±７．８４％）及释放反应（ＡＴＰ释放：１．１２±０．２１μｍｏｌ／４×１０５血小板）不受影响，但随Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度增加，ＡＡ的聚集和释放反应明显减弱（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度对单一血小板内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的静息水平无影响，但Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为２μｍｏｌ／Ｌ时，ＡＡ诱导的［Ｃａ２＋］ｉ动员最明显。另外，标本中血小板的数量也明显影响［Ｃａ２＋］ｉ的测定结果（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。提示，Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度过高，很可能导致过多的钙离子被螯合，降低了血小板的功能，同时，细胞内游离钙与Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的结合过程存在着饱和性。     

槲皮素对血小板激活时胞浆游离钙的影响

采用钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２定量测试法观察了槲皮素对血小板胞浆内游离钙浓度的影响。结果发现，槲皮素２５￣４００μｍｏｌ／Ｌ能剂量依赖性地抑制凝血酶引起的血小板胞浆游离钙［Ｃａ＾２＋］ｉ的升高（ＩＣ５０和９５％可信区间为７８．５（４９．５￣１２４．４）μｍｏｌ／Ｌ）；但不能抑制同等剂量凝血酶所引起的胞内贮存钙的释放；抑制钙内流可能是槲皮素抑制血小板聚集和［Ｃａ＾２＋］ｉ升高的机制。     

蛋白磷酸酶抑制剂对人成神经细胞瘤细胞钙瞬态的影响

应用荧光倒置显微镜系统,分别检测了蛋白磷酸酶ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－１抑制剂岗田酸（Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ,ＯＡ）和ＰＰ－２Ｂ抑制剂三氟吡拉嗪（Ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ,Ｔｒｉ）处理的人成神经细胞瘤细胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）胞浆钙瞬态变化。结果发现：１ｎｍｏｌ／ＬＯＡ抑制ＰＰ－２Ａ时,胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）瞬时波动明显增强,［Ｃａ２＋］ｉ在２０ｍｉｎ内逐步轻微升高,后逐渐回复;而用１００ｎｍｏｌ／ＬＯＡ同时抑制ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－１时,则引起［Ｃａ２＋］ｉ即刻持续升高,并同时伴有［Ｃａ２＋］ｉ瞬时波动明显增强;用１００μｍｏｌ／ＬＴｒｉ抑制ＰＰ－２Ｂ时,则引起［Ｃａ２＋］ｉ即刻持续升高,［Ｃａ２＋］ｉ瞬时波动没有明显变化。提示：蛋白磷酸酶降低可能通过钙瞬态变化而参与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）的发病过程。     

颅通定对猪肺动脉平滑肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

采用钙荧光探针Ｆｕｒａ－２／ＡＭ观察了颅通定对培养的猪肺动脉平滑肌细胞胞浆游离钙浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）的影响。结果发现：颅通定可显著抑制高钾和ＢａｙＫ８６４４所致的［Ｃａ＾２＋］ｉ增加，并且有剂量－效应关系，对静息状态［Ｃａ＾２＋］ｉ无明显影响，其作用与维拉帕米相似，但较弱。提示：颅通定降低平滑肌细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ的作用与其抑制电压依赖性钙通道有关，此为其降压作用机制之一。     

高钾离子引起PC12细胞内游离Ca2+浓度升高的机制

目的：分析高钾离子（Ｋ＾＋）引起ＰＣ１２细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）升高的可能机制。方法：利用ＭｉｒａＣａｌ Ｉｍｉａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ检测［Ｃａ＾２＋］ｉ，Ｃａ＾２＋荧光探针为Ｆｕｒａ－２／ＡＭ。结果：（１）ＫＣ１浓度为３０￣１００ｍｍｏｌ／Ｌ时，可剂量依赖性地诱导ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ升高；（２）在细胞外无Ｃａ＾２＋时，高Ｋ＾＋对ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ无影响；（３）Ｌ－     

外源性神经节苷脂GM_3对Ca~（2＋）－ATP酶及红细胞胞浆Ca~（2＋）－浓度的影响

研究神经节苷脂ＧＭ３（简称ＧＭ３）对部分纯化的人红细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的作用和对完整兔红细胞浆［Ｃａ２＋］的影响。结果表明：外源性ＧＭ３对Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的作用呈浓度依赖性双相调节即浓度为１～６．５μｍｏｌ／Ｌ时抑制酶活性，浓度大于６．５μｍｏｌ／Ｌ时激活酶活性；ＧＭ３不影响钙调素（ＣａＭ）对酶的激活；ＣＭ３对兔红细胞浆［Ｃａ２＋］也呈浓度依赖性双相调节即在ＧＭ３浓度低于６９μｍｏｌ／Ｌ时［Ｃａ２＋］有不同程度升高，浓度大于６０μｍｏｌ／Ｌ时则降低［Ｃａ２＋］。     

八肽胆囊收缩素对谷氨酸诱导神经元死亡的拮抗作用及机制研究

以谷氨酸、ＮＭＤＡ作用原代培养的大鼠大脑皮层神经元，随药物浓度递增，作用时间延长，细胞存活率逐渐下降。八肽胆囊收缩素对谷氨酸、ＮＭＤＡ诱导的神经元死亡具有明显的拮抗作用，在其浓度为１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ时其拮抗率为７７８±４４％和７５４±６７％。ＣＣＫＢ受体拮抗剂Ｌ－３６５２６０可完全阻断八肽胆囊收缩素的保护作用，而ＣＣＫＡ受体拮抗剂Ｌ－３６４７１８无此作用。应用Ｆｕｒａ－２荧光技术测定新生大鼠大脑皮层神经元细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ），八肽胆囊收缩素可明显抑制ＮＭＤＡ诱导的神经元［Ｃａ２＋］ｉ升高，在浓度为１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ时其抑制率为９５７％。结果显示：八肽胆囊收缩素可能通过其Ｂ受体产生拮抗谷氨酸神经兴奋毒性作用，抑制Ｃａ２＋内流是其产生拮抗作用的机制之一。     

槲皮素对血小板激活时胞浆游离钙的影响

采用钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ—２定量测试法观察了槲皮素对血小板胞浆内游离钙浓度的影响。结果发现，槲皮素２５～４０μｍｏｌ／Ｌ能剂量依赖性地抑制凝血酶引起的血小板胞浆游离钙［Ｃａ２＋］；的升高（ＩＣ５０和９５％可信区间为７８．５（４９．５～１２４．４μｍｏｌ／Ｌ）；但不能抑制同等剂量凝血酶所引起的胞内贮存钙的释放；抑制钙内流可能是槲皮素抑制血小板聚集和［Ｃａ２＋］１升高的机制。     

海风藤醇B对PAF诱导的兔血小板钙内流和胞内游离钙浓度升…

应用＾４５Ｃａ＾２＋和钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２／ＡＭ进行实验，发现海风藤醇Ｂ（１０，１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１）无论对血小板激活因子（ＰＡＦ）引起的兔洗涤血小板Ｃａ＾２＋内流还是胞内游离钙浓度（Ｃａ＾２＋）升高均有抑制作用，且呈良好的剂量相关，最大抑制率分别为３７．２％和５０．８％，但对Ａ２３１８７引起的胞内（Ｃａ＾２＋）升高无显著抑制作用。结果表明，海风藤醇Ｂ能选择性拮抗ＰＡＦ诱导的钙内流的Ｃａ＾     

黄腐酸和超氧阴离子对软骨细胞内钙离子浓度的影响

目的：为探讨病区黄腐酸（ＦＡ）和活性氧自由基可能引起大骨节病，我们测定了在ＦＡ和超氧自由基（）作用下，软骨细胞内钙离子浓度（［Ｃａ￣（２＋）］ｉ）随时间的变化。方法：应用萤光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定细胞内钙离子浓度并用下式计算：［Ｃａ￣（２＋）］ｉ＝Ｋｄ（Ｆ－Ｆ＿（ｍｉｎ））／（Ｆ＿（ｍａｘ）－Ｆ）。结果：作用４５ｍｉｎ后，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ从１．６２×１Ｏ￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ升达１．１８×１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ；ＦＡ作用４ｈ后，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ从３．７８×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ升达５．５１×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ。结论：说明ＦＡ与·有相似的促进［Ｃａ￣（２＋）］ｉ升高的作用，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ的升高将造成软骨细胞损伤，而软骨坏死是大骨节病的重要病理特症之一。     

钙增敏剂MCI-154对内毒素休克大鼠心肌钙稳态的影响

目的：研究钙增敏剂ＭＣＩ－１５４ 对内毒素休克大鼠心肌钙稳态的影响。方法：甲腈吡酮或ＭＣＩ－１５４ 治疗内毒素休克大鼠后１、３、５ ｈ,分别测定心肌组织、线粒体、肌浆网（ＳＲ）的钙含量;离体分离内毒素休克大鼠心肌细胞,分别与１×１０－ ３、１×１０－ ２、１×１０－ １ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ甲腈吡酮或ＭＣＩ－１５４孵育,利用Ｆｕｒａ ２－ＡＭ 测定心肌细胞胞浆钙浓度（［Ｃａ２＋ ］ｉ）。结果：内毒素休克后,心肌组织、线粒体、ＳＲ钙含量明显增加。甲腈吡酮治疗后,上述指标进一步升高;而ＭＣＩ－１５４ 治疗后,心肌组织、线粒体、ＳＲ钙含量无明显增加,治疗后３、５ ｈ 值同单纯生理盐水（ＮＳ）治疗组无明显差别,显著低于甲腈吡酮治疗组值。内毒素休克大鼠心肌细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ明显高于对照组,甲腈吡酮与内毒素休克心肌细胞孵育后,［Ｃａ２＋ ］ｉ随药物浓度增大而显著升高;不同浓度的ＭＣＩ－１５４均不明显升高心肌细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ。结论：ＭＣＩ－１５４用于内毒素休克治疗时,不进一步加重心肌钙稳态失衡及心肌细胞内钙超载。     

应用Fura-Ⅱ/AM检测大鼠多形核中性粒细胞内游离钙浓度

应用ＦｕｒａⅡ技术，检测大鼠无菌性炎症时腹腔多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）及中药锦灯笼苦味素Ｂ对其影响。结果：在静息状态下，ＰＭＮ内［Ｃａ２＋］ｉ为（３１９４３±１８９０５）ｎｍｏｌ／Ｌ，酵母多糖激活可使［Ｃａ２＋］ｉ成倍增加，两者相比Ｐ＜００５。中药可抑制［Ｃａ２＋］ｉ增加。各组之间差异显著（Ｐ＜００５）。并探讨了ＦｕｒａⅡ检测ＰＭＮ内［Ｃａ２＋］ｉ的可行性及证明中药可抑制［Ｃａ２＋］ｉ。     

创伤后活化T细胞内游离钙,钙调素,钙调素依赖的蛋白激酶…

研究了创伤小鼠活化Ｔ细胞内游离钙浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）、钙调素（ＣａＭ）、钙调素依赖的蛋白激酶（ＣａＭ－ＰＫ）活性的变化及其与Ｔ细胞功能之间的关系。结果显示，创伤后活化Ｔ细胞内［Ｃａ＾２＋］ｉ降低，且这一变化同创伤小鼠Ｔ细胞白介素２（ＩＬ－２）ｍＲＮＡ、ＩＬ－２受体α（ＩＬ－２Ｒα）ｍＲＮＡ水平降低，ＩＬ－２生成减少，ＩＬ－２Ｒα表达受抑，Ｔ淋巴细胞转化（ＴＬＴ）降低密度相关。创伤后活化Ｔ细胞内     

17β-雌二醇对人的类成骨细胞HOS TE85胞内游离钙、IP3及钙调蛋白影响

目的观察１７β－雌二醇（Ｅ２）对成骨细胞胞内游离钙（［Ｃａ２＋］ｉ）、１,４,５－三磷酸肌醇（ＩＰ３）含量及钙调蛋白（ＣａＭ）含量的影响。方法以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ为钙荧光指示剂,采用激光共聚焦显微系统测定细胞内钙荧光值的改变,以反映［Ｃａ２＋］ｉ含量的变化。用阳离子交换法测定ＩＰ３含量。以测定钙依赖的磷酸二酯酶活性方法测定ＣａＭ含量。结果给予０．１、１．０ｎｍｏｌ／ＬＥ２后５０ｓ胞内钙荧光值分别增加４．７和６．１倍,持续８０～１６０ｓ;以１００ｎｍｏｌ／Ｌｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ预处理细胞,Ｅ２仅使胞内钙荧光值升高１．５倍。加入１．０ｎｍｏｌ／ＬＥ２,ＩＰ３含量在给药后２０～３０ｓ和６０～７０ｓ呈双峰升高。同样剂量的Ｅ２可使ＣａＭ含量增加８５．２％。他莫西芬不能阻断Ｅ２引起的胞内钙荧光值、ＩＰ３及ＣａＭ含量升高的作用,而磷脂酶Ｃ抑制剂使Ｅ２的作用部分或完全抑制。结论Ｅ２作用于胞膜引起胞外钙内流,并通过ＩＰ３导致［Ｃａ２＋］ｉ进一步增加,激活ＣａＭ从而调节细胞功能。     

三磷酸肌醇在兔急性肾缺血及再灌流损伤中的作用

用新西兰大白兔制作急性肾缺血及再灌流损伤模型，观察肾组织细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ３）、细胞内总钙及胞浆游离钙（［Ｃａ（２＋）］ｉ）浓度变化。结果显示，缺血组与对照组的ＩＰ３浓度（±ｓ）分别为（４３０．３±４６．８）、（２９７．９±５４．３）ｍｉｎ（－１），［ｃａ（２＋）］ｉ浓度分别为（２１２．５±４３．５）、（１０６．１±１５．５）ｎｍｏｌ／Ｌ，前者较后者均显著性升高（均为Ｐ＜０．０１），总钙浓度分别为（３９８．６±３２．３）、（３８５．０±３２．４）μｍｏｌ／Ｌ，两组无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。再灌流６０ｍｉｎ后ＩＰ３浓度为（７７６．０±６８．０）ｍｉｎ（－１）、［Ｃａ（２＋）］ｉ浓度为（４１２．１±４７．３）ｎｍｏｌ／Ｌ、总钙浓度为（４４７．１±４２．５）μｍｏｌ／Ｌ，较对照组和缺血组均显著性增加（Ｐ＜０．０１）。提示，细胞内ＩＰ３对急性肾缺血及再灌流损伤中肾组织细胞内钙超负荷的形成具有重要作用。