细胞外信号调节激酶及蛋白激酶Cγ亚型在慢性染铅小鼠脑海马中的异常表达

目的:观察和探讨铅对小鼠脑海马蛋白激酶Cγ(PKC-γ)及细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达的影响。方法:小鼠出生1d,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6mmol/L。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,21,28,35d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠海马区PKC-γ蛋白表达状况;分别在7,14,21,28d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠海马区ERK蛋白表达状况。结果:慢性铅暴露对小鼠脑海马PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组中,PKC-γ蛋白表达与相应期对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。低浓度铅2.4mmol/L使ERK表达升高,但此后随铅浓度升高ERK表达量逐渐降低,铅浓度升高至9.6mmol/L时随着铅浓度升高ERK表达量不再降低相反有所回升。结论:铅扰乱小鼠脑海马中PKC-γ及ERK蛋白正常表达。     

蛋白激酶C-γ亚型在慢性染铅小鼠脑皮质中的表达

目的:探讨铅对小鼠脑皮质中蛋白激酶C-γ亚型(PKC-γ) 蛋白表达的影响.方法:小鼠出生第1天起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4、4.8、9.6 mmol/L;幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠相同浓度的含铅水;分别在第14,21,28,35天处死小鼠,用蛋白免疫印记法观察各组小鼠脑皮质区PKC-γ蛋白表达.结果:慢性铅暴露对小鼠脑皮质PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组PKC-γ蛋白表达与相应时期对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论:铅扰乱PKC-γ蛋白正常表达.     

慢性铅暴露对小鼠脑皮质区ERK蛋白表达的影响

目的: 研究不同浓度乙酸铅染毒对发育期不同时段小鼠脑皮质区细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinases,ERK)活力表达的影响. 方法: 分组饲养小鼠,对照组喂以蒸馏水;实验组于交配后改喂含不同浓度乙酸铅(2.4、4.8、9.6 mmol/L)的水溶液.新生鼠通过母乳摄入铅,断乳后幼鼠自行饮水摄入铅.新生鼠按生后不同日龄(P7,P14,P21,P28)取脑皮质.利用ERK 磷酸化抗体,通过蛋白免疫印迹法检测不同日龄、不同染铅浓度小鼠等量脑皮质中ERK活力表达.结果: Western blot 结果显示,低浓度铅(2.4 mmol/L)使ERK表达升高,中浓度铅(4.8 mol/L)使ERK表达量降低,铅浓度升高至9.6 mmol/L时随着铅浓度升高ERK表达量不再降低相反有所回升.结论: ERK1/2的水平随铅浓度升高而逐渐降低,铅对ERK的影响在发育后期比发育前期影响大.     

孕期不同阶段铅暴露对仔鼠脑组织S100B蛋白表达影响

目的通过大鼠孕期不同阶段染铅制备仔鼠染铅模型,测定仔鼠血铅及脑铅水平,并观察S100B蛋白在不同染铅模型仔鼠脑组织中的表达及意义。方法将72只健康清洁级Wistar妊娠大鼠随机分为孕早期染铅组(孕早期:妊娠1～10d饮用0.25g/L醋酸铅溶液;孕后期:妊娠11～20d饮用蒸馏水)、孕晚期染铅组(孕早期饮用蒸馏水,孕后期饮用0.25g/L醋酸铅溶液)、孕全程染铅组(妊娠1～20d饮用0.25g/L醋酸铅溶液)和对照组(孕全程饮用蒸馏水),每组18只。各组妊娠末期剖宫取仔鼠,采血测定血铅水平;完整取出仔鼠大脑,测定脑铅水平和S100B蛋白的表达。结果仔鼠血铅及脑铅水平由低至高依次为对照组、孕晚期染铅组、孕早期染铅组、孕全程染铅组,任意两组比较,差异均有统计学意义(F=12.01、7.39,P<0.05)。与对照组比较,孕期染铅各组子代仔鼠脑组织中S100B蛋白的表达均升高;与孕全程染铅组比较,孕早期及孕晚期染铅组子代仔鼠脑组织中S100B蛋白的表达均下降,差异有统计学意义(F=3.73,P<0.05)。结论孕期铅暴露使得子代仔鼠脑组织中S100B蛋白的表达升高,以孕全期铅暴露组表达水平最高。母孕期低水平铅暴露导致子代仔鼠脑组织中S100B蛋白表达异常可能是铅致脑损伤的毒性机制之一。     

维生素C对慢性铅暴露小鼠海马NMDAR表达的影响

目的探讨维生素C对慢性铅暴露小鼠海马N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)表达的影响。方法将健康昆明系小鼠随机分为染铅组(从出生第l天起饲以醋酸铅水溶液9.6mmol/L)、维生素C给药组(从出生第l天起饲以醋酸铅9.6mmol/L及维生素C 7.5mL/kg水溶液)及对照组(饲以不含铅的饮用水),每组9只。小鼠于出生21d后断颈处死,采静脉血检测血铅浓度,并同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其海马中NMDAR亚单位的表达水平。结果维生素C给药组小鼠的血铅浓度显著低于铅染组,但仍然高于对照组(P<0.01),维生素C给药组小鼠海马细胞的NMDAR亚单位ε1mRNA表达水平较染铅组明显提高(P<0.01),而ε2mRNA表达水平基本不变(P>0.05)。结论维生素C可降低染铅小鼠的血铅浓度,并可以影响小鼠海马NMDAR的表达水平,对海马细胞具有一定保护作用。     

醋酸铅对雄性小鼠附睾Y染色体基因Ddx3y蛋白表达的影响

[目的]通过观察亚慢性铅暴露对小鼠附睾组织Y染色体基因Ddx3y表达的影响,为探讨铅的雄性生殖毒作用机制提供依据。[方法]昆明种小鼠48只,按体重将小鼠随机分为对照组、0.5 g/L、1.0 g/L和1.5 g/L醋酸铅染毒组。通过自然饮用含不同浓度醋酸铅的方式使小鼠染铅,连续染毒60 d后取附睾组织。HE染色观察组织病理学变化,Western blotting和免疫组化方法检测附睾组织Ddx3y蛋白的表达及组织分布。[结果]与对照组比较,染铅组附睾管内精子数和分泌液均减少,尤其1.5 g/L染铅组最为明显。Western blotting检测结果显示,染铅组的小鼠附睾组织中Ddx3y蛋白表达明显低于对照组,且有剂量-反应关系。免疫组化结果显示,随着染铅剂量的增加,附睾组织中抗Ddx3y蛋白免疫反应明显降低。[结论]亚慢性铅暴露显著下调小鼠附睾组织Y染色体基因Ddx3y蛋白表达。     

Effect of high glucose concentration on expression of toll-like receptor-2 in ARPE-19cells

目的 观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响及机制.方法 各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48 h,正常糖浓度组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、中度高糖组(15.5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5 mmol/L D-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5 mmol/L D-葡萄糖加10 mmol/L Go6976 PKC-o抑制剂)、高渗对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖加20 mmol/L甘露醇).Western blot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况;Real-time PCR分析各组ARPE - 19细胞TLR2的mRNA表达水平.结果 与正常糖浓度组相比,高糖组和中度高糖组TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α转位均增加(P＜0.05),并且高糖组高于中度高糖组(P＜0.05).与高糖组比较,PKC-α抑制剂组的TLR2蛋白表达降低(P＜0.05),PKC-α蛋白转位显著降低(P＜0.01).结论 高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,刺激PKC-α转位;高糖可能是通过PKC-α通路上调ARPE-19细胞TLR2表达.     

高糖对视网膜色素上皮细胞Toll样受体2表达的影响

目的观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响及机制。方法各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48 h,正常糖浓度组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、中度高糖组(15.5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5 mmol/L D-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5 mmol/L D-葡萄糖加10 mmol/L Go6976 PKC-α抑制剂)、高渗对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖加20 mmol/L甘露醇)。Western blot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况;Real-time PCR分析各组ARPE-19细胞TLR2的mRNA表达水平。结果与正常糖浓度组相比,高糖组和中度高糖组TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α转位均增加(P<0.05),并且高糖组高于中度高糖组(P<0.05)。与高糖组比较,PKC-α抑制剂组的TLR2蛋白表达降低(P<0.05),PKC-α蛋白转位显著降低(P<0.01)。结论高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,刺激PKC-α转位;高糖可能是通过PKC-α通路上调ARPE-19细胞TLR2表达。     

aFGF对染铅大鼠海马神经元细胞浆ERK活性的保护作用

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对染铅的原代培养大鼠脑神经元细胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响.方法:神经元培养4～8 d后,用0.6μg/L aFGF及不同浓度铅处理细胞,用改良Takai法测定ERK活性.结果:神经元染铅30 min,在0.1～2.0μmol/L铅浓度范围内,ERK比活性明显升高,呈浓度依赖性,尤其1.0～2.0μmol/L时最高.用aFGF预处理后再染铅时,在1.0～5.0μmol/L时ERK比活性与对照组比较无明显差异.结论:ERK比活性随着染铅浓度不同而发生改变.aFGF可保护神经元避免铅对ERK活性的影响.     

镉,铅,锰和铬对小鼠免疫功能的影响

采用外周血淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)和血清溶血素测定法研究了镉、铅、锰和铬对小鼠体内免疫功能的影响。结果显示,小鼠连续自由饮用不同浓度的硫酸镉(0.02,0.09,0.45mmol/L),硝酸铅(0.15,0.77,3.86mmol/L),硫酸锰(0.06,0.28,1.42mmol/L)和重铬酸钾(0.01,0.04,0.23mmol/L)溶液7d后,T淋巴细胞ANAE阳性率比对照组明显降低,而血清溶血素水平无明显影响;但连续饮用15d后,血清溶血素水平比对照组降低。表明镉、铅、锰和铬对小鼠细胞和体液免疫功能均具有不同程度的免疫毒性作用,对细胞免疫功能的抑制早于对体液免疫功能的抑制。     

蛋白激酶C-α在兔自体移植静脉中的表达

目的观察蛋白激酶C-α（PKC-α）在兔自体静脉移植中的动态表达,探讨其与移植血管内膜增生的关系。方法采用兔自体颈静脉移植模型,25只新西兰大白兔随机分为5组,其中手术Ⅰ～Ⅳ组分别于术后3,7,14,28d取材,假手术组（SO组）作为对照组。应用Real-TimePCR法、WesternBlot法分别检测各组中PKC-dmRNA及其蛋白的表达变化;应用免疫组织化学法检测各组平滑肌细胞中PKC-α的表达。结果与对照组比较,PKC-αmRNA及其蛋白在术后3d时,表达均明显升高（P〈0．01）,而后逐渐降至正常。免疫组织化学检测PKC-α结果与Weatern蛋白印迹法一致。结论PKC-α可能参与了自体静脉移植后的血管平滑肌增生过程中的信号转导。     

碱性成纤维细胞生长因子对染铅大鼠海马神经元胞浆ERK的保护作用

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（b FGF）对染铅大鼠海马神经元细胞外调节蛋白激酶（ERK）的保护作用。方法神经元培养7 d后,用0.6μg/L的b FGF以及不同浓度铅处理细胞,然后测定ERK活力。结果铅处理神经元30 min后,在铅浓度0.1~2.0μmol/L时ERK活性明显升高,其中2.0μmol/L时最高。经过b FGF处理以后的细胞,在铅浓度1.0~4.0μmol/L时ERK活性与对照组相比无明显差异。结论染铅浓度不同对ERK活性影响也不同,b FGF可以保护神经元中ERK活性。     

亚慢性染砷对小鼠脑组织性基因Jarid1d表达的影响

[目的]观察亚慢性染砷对小鼠脑组织性基因Jarid1d表达的影响.[方法]SPF级小鼠30只,按体重将小鼠随机分为1 mg/L As2O3染砷组、4 mg/Ls2O3染砷组和对照组,每组10只.自然饮用含不同浓度As2O3饮用水方式使小鼠染砷,连续染毒60 d后取脑.利用基因芯片技术检测小鼠脑组织性基因Jarid1d的...     

氟对小鼠成釉细胞Nrf2表达及核浆分布的影响

目的:探讨氟对小鼠成釉细胞Nrf2基因表达、蛋白质生成及蛋白核浆分布的影响。方法:采用不同浓度NaF(0. 25,0. 50,1. 00,2. 00,4. 00 mmol/L)分别作用成釉细胞24 h;同时采用叔丁基对苯二酚(tBHQ,50 mmol/L)预处理成釉细胞12 h后再采用不同浓度NaF(0. 25,0. 50,1. 00,2. 00,4. 00 mmol/L)作用24 h。用RT-PCR和Western Blot检测细胞Nrf2 mRNA和蛋白表达水平以及蛋白核浆分布情况。结果:与对照组比较,单独染氟组小鼠成釉细胞Nrf2 mRNA表达逐渐升高,其中1. 00 mmol/L和4. 00 mmol/L单染氟组Nrf2 mRNA表达显著升高(P<0. 05)。大部分单染氟组Nrf2核蛋白和浆蛋白表达上调,其中1. 00 mmol/L和2. 00 mmol/L单染氟组Nrf2核蛋白上调明显(P<0. 05),0. 25 mmol/L和2. 00 mmol/L的单染氟组Nrf2浆蛋白表达显著升高(P<0. 05)。tBHQ预处理后,与同剂量单独染氟组比较,除1. 00 mmol/L剂量,其他组Nrf2 mRNA相对表达量均显著升高(P<0. 05)。除4. 00 mmol/L剂量,各剂量组Nrf2核蛋白及浆蛋白的表达量均显著增多(P<0. 05)。在0. 25,1. 00,2. 00 mmol/L的剂量条件下,tBHQ处理组核浆比值与tBHQ对照组相比明显上升(P<0. 05)。结论:氟在一定的剂量条件下,可激活小鼠成釉细胞Nrf2信号因子,上调其基因及蛋白质表达,促进蛋白核转位。     

渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响

目的探讨渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响及其作用机制。方法高糖培养小鼠胰岛β细胞后,采用蛋白质印迹法检测细胞内磷酸化叉头转录因子1（p-FoxO1）表达水平,确定高糖诱导细胞FoxO1磷酸化最佳时间。小鼠胰岛β细胞根据培养条件分为4组：（1）常规糖浓度组：用含25mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养液培养;（2）高张浓度组：用含25mmol/L葡萄糖浓度和35mmol/L甘露醇的DMEM培养液培养;（3）高糖浓度组：用含60mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养液培养;（4）高糖浓度+渥曼青霉素干预组：用含60mmol/L葡萄糖浓度和50nmol/L渥曼青霉素的DMEM培养液培养。培养12h后采用蛋白质印迹法检测各组小鼠胰岛β细胞p-FoxO1、FoxO1蛋白表达水平;培养72h后采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组小鼠胰岛β细胞神经元素3（ngn3）、胰岛十二指肠同源盒-1（PDX1）蛋白和mRNA表达水平。结果在一定时间范围内,高糖能刺激FoxO1蛋白磷酸化;高糖培养小鼠胰岛β细胞后细胞ngn3蛋白和mRNA表达水平均增加,PDX1蛋白和mRNA表达水平均减少。渥曼青霉素同步干预后,FoxO1磷酸化减少,细胞ngn3蛋白和mRNA表达水平均减少,PDX1蛋白和mRNA表达水平均增加。结论渥曼青霉素能抑制高糖诱导的小鼠胰岛β细胞去分化,渥曼青霉素可能通过抑制FoxO1的磷酸化而产生该抑制作用的。     

瞬时受体电位家族香草醛1型受体转基因小鼠模型的建立

目的 建立瞬时受体电位家族香草醛1型受体(Trpvl)转基因小鼠模型.方法 通过显微注射法把pcDNA3.1-rTrpv1导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵雄原核中并移植到假孕母鼠输卵管内,用PCR方法鉴定子代基因型,用蛋白免疫印迹法检测TRPV1在组织中的表达水平.结果 将400枚注射卵移植到16只假孕母鼠的输卵管中,共出生小鼠120只,获得5只转基因阳性小鼠.其中2只阳性小鼠可稳定传代,经过与C57小鼠回交数次后各自建系.经蛋白免疫印迹法证实,与同窝野生型小鼠相比,转基因小鼠的脑组织和肌肉组织中TRPV1蛋白的表达显著升高.结论 成功建立了Trpv1转基因小鼠模型,为深入研究TRPV1通道的功能提供了更好的条件.     

亚慢性铅暴露小鼠睾丸组织铅蓄积及对精子质量影响

目的观察亚慢性铅暴露小鼠睾丸组织铅蓄积和对小鼠精子质量影响,并探讨二者的关联性。方法昆明种小鼠60只,按体重将小鼠随机分为对照组、0.5 g/L、1.0 g/L和1.5 g/L醋酸铅染毒组。通过自然饮用含不同浓度醋酸铅水的方式使小鼠染铅,连续染毒60 d后取附睾和睾丸组织。用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测小鼠睾丸组织的铅浓度,常规方法检测附睾精子质量,并用统计学方法对二者的相关性进行分析。结果 0.5g/L、1.0 g/L和1.5 g/L染铅组小鼠精子的活动度分别为87.3%、79.2%和68.3%,显著低于对照组(94.1%)(P<0.05)。各铅暴露小鼠精子畸形率分别为15.2%、32.8%和35.5%,显著高于对照组(7.0%)(P<0.05)。各铅暴露小鼠睾丸组织铅浓度分别为72.71 ng/g,118.74 ng/g和177.14 ng/g,显著高于对照组(9.73 ng/g)(P<0.05),并随染毒剂量增加而升高。而且,铅暴露小鼠睾丸铅浓度与精子的活动率、密度和存活率之间呈显著负相关(P<0.05)。结论亚慢性铅暴露可导致小鼠睾丸组织铅蓄积,铅在睾丸组织蓄积可能是亚慢性暴露小鼠精子质量下降的重要因素。     

高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响.方法 利用Ⅳ型胶原的快速黏附法分离培养小鼠表皮干细胞,观察其形态学;通过免疫荧光法检测表皮干细胞标志物β1整合素和K19来鉴定表皮干细胞;将小鼠表皮干细胞分别放在葡萄糖浓度为5.6、15和30mmol/L的培养基里培养;MTT法检测细胞增殖情况,免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平.结果 体外培养的小鼠表皮干细胞呈克隆样生长,增殖速度较快,细胞形态呈铺路石样,边缘细胞呈梭形,细胞核质比较大;免疫荧光法检测到培养的小鼠表皮干细胞β1整合素和K19呈阳性表达且阳性表达率均为100％;MTT法检测到与对照组（5.6mmol/L浓度葡萄糖）相比,15mmol/L浓度葡萄糖刺激72h后检测到细胞增殖速度无明显改变,而30mmol/L浓度葡萄糖刺激24、48和72h后检测到细胞增殖速度降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot法检测到与对照组相比,30mmol/L浓度葡萄糖刺激48h后凋亡蛋白Bax的蛋白表达量明显增加而抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）.结论 本研究结果表明较高浓度（30mmol/L）葡萄糖可以明显抑制小鼠表皮干细胞的增殖,从干细胞角度进一步为糖尿病创面难愈的原因提供了实验室依据.     

大鼠肾发育中CD95的表达

目的 探讨大鼠肾发育中死亡受体(DR)CD95的表达规律.方法 应用免疫组织化学技术与蛋白质印迹法对大鼠肾发育中CD95的表达进行定性和定量观察.结果 免疫组织化学检测结果显示,在肾发育早期,CD95的阳性细胞主要表达在肾深层皮质区的近端小管,随着发育的不断进行,CD95的表达逐渐扩展到整个肾皮质区的近端小管,而远端小管的表达十分微弱;蛋白质印迹法结果显示,CD95蛋白在胚胎期表达微弱,从出生后1～5 d逐渐升高,但变化幅度不大,在出生后7d又迅速升高.结论 CD95介导的DR凋亡途径在肾发育中,尤其是在近端小管的生长和分化中发挥重要作用,已成为肾发育后期细胞凋亡的主要调节机制.     

甲基强的松龙通过下调ERK1/2-NF-κB信号通路减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓炎症

观察甲基强的松龙(MP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠神经功能的影响,探讨其抑制脊髓炎症的可能机制。 方法 采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG_35-55)诱导雌性C57BL/6小鼠,建立EAE小鼠模型。待小鼠发病后,连续腹腔注射PBS或者MP,作为溶媒组和MP组。另取同龄正常小鼠,腹腔注射PBS,作为对照组。通过H-E染色观察炎症细胞的浸润情况,罗克沙尔坚牢蓝(LFB)染色及电镜观察髓鞘脱失,实时荧光定量PCR检测炎症因子mRNA水平及T细胞特异性转录因子(T-bet)、维甲酸A相关孤儿素受体(RORγt)mRNA水平,免疫印迹检测T-bet、RORγt、细胞外信号调节酶(ERK1/2)和核转录因子NF-κB蛋白变化。 结果 与溶媒组比较,MP组小鼠炎症细胞浸润、髓鞘破坏明显减少(P<0.05); 脊髓细胞因子IFN-γ,IL-17,IL-21及IL-23 mRNA表达降低,而IL-4,IL-5及IL-10 mRNA表达升高; Th1/Th17特异性谱系转录因子T-bet和RORγt mRNA及蛋白表达减少; ERK1/2及NF-κB蛋白磷酸化降低。 结论 MP可能通过抑制ERK1/2-NF-κB信号通路改善EAE的神经功能评分,减轻脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失,提示ERK1/2-NF-κB信号通路可能是MP发挥抗炎作用的主要靶点之一。