肝细胞癌中microRNA-1469表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨microRNA-1469(miR-1469)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法选取2010年1月至2012年12月于西安交通大学第一附属医院手术切除的HCC组织和对应的癌旁组织(距肿瘤边缘> 2 cm)标本各76例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC组织及癌旁组织中miR-1469的表达水平,分析miR-1469表达与HCC临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析miR-1469表达与HCC患者3 a总体生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC细胞系Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402及正常肝细胞系LO2中miR-1469的表达水平;培养Hep3B和SMMC-7721细胞,当细胞融合度达到70%时,分别应用miR-1469mimics和相应的阴性对照脂质体转染Hep3B细胞,应用miR-1469 inhibitors和相应的阴性对照脂质体转染SMMC-7721细胞。转染48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中miR-1469的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板克隆形成实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞增殖及克隆形成能力的影响,流式细胞术检测miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞周期的影响,Transwell实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞侵袭及迁移能力的影响,Western blot法检测Hep3B和SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白表达。结果 miR-1469在HCC组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0. 71±0. 03、5. 49±0. 04,HCC组织中miR-1469相对表达量显著低于癌旁组织(P <0. 05)。miR-1469表达与肿瘤直径、肿瘤数目、TNM分期、组织分化程度及微血管侵犯相关(P <0. 05),而与患者的年龄、性别、血清甲胎蛋白水平、静脉侵犯、Edmondson病理分级、肿瘤部位无相关性(P> 0. 05)。KaplanMeier生存分析显示,miR-1469高表达HCC患者的3 a总体生存率显著高于低表达者(P <0. 05)。miR-1469在LO2、Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量分别为1. 01±0. 02、0. 45±0. 01、0. 05±0. 01、0. 61±0. 02、0. 14±0. 01、0. 29±0. 02; miR-1469在Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量显著低于LO2细胞(P <0. 05);其中Hep3B细胞中miR-1469表达量最低,SMMC-7721细胞中miR-1469表达量最高。miR-1469mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量分别为4. 47±0. 15、0. 05±0. 01,miR-1469mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量显著高于miR-1469 control mimics组(P <0. 05)。miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量分别为0. 20±0. 11、1. 00±0. 00,miR-1469inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量显著低于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。MTT结果显示,培养24、48、72 h时,miR-1469 mimics组Hep3B细胞增殖能力显著低于miR-1469 control mimics组,miR-1469inhibitors组SMMC-7721细胞增殖能力显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。平板克隆实验结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞的克隆数分别为17. 00±1. 73、65. 67±2. 33,miR-1469mimics组Hep3B细胞的克隆形成能力显著低于miR-1469 control mimics组(P <0. 05); miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆数分别为93. 00±2. 08、27. 67±1. 45,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆形成能力显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。流式细胞术结果显示,与miR-1469control mimics组比较,miR-1469 mimics组G1期Hep3B细胞显著增多,S期Hep3B细胞显著减少(P <0. 05),但2组G2期细胞比例比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与miR-1469 control inhibitors组比较,miR-1469 inhibitors组G1期SMMC-7721细胞显著减少,S期SMMC-7721细胞显著增多(P <0. 05);但2组G2期SMMC-7721细胞比例比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。Transwell实验结果显示,miR-1469 mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为59. 00±2. 08、29. 00±2. 08,miR-1469 control mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为35. 00±1. 53、20. 33±1. 45; miR-1469 mimics组Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著高于miR-1469 control mimics组(P <0. 05)。miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为26. 00±1. 16、17. 33±0. 88,miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为56. 33±3. 18、44. 67±1. 45; miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的迁移和侵袭能力显著低于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。Western blot结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为0. 23±0. 04、1. 00±0. 00,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著低于miR-1469 control mimics组(P <0. 05); miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为3. 90±0. 17、1. 00±0. 00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。结论 MiR-1469在HCC中表达下调,且其表达与肿瘤数目、肿瘤直径、TNM分期、组织分化程度、微血管侵犯及患者预后密切相关; miR-1469可能通过靶向结合NDRG1并抑制其表达而抑制HCC细胞的增殖、周期、侵袭和迁移。     

LINC00665通过let-7i/HMGA1促进肝癌细胞增殖与侵袭的机制研究

目的 探讨LINC00665通过let-7i/HMGA1对肝癌细胞增殖与侵袭能力的影响。方法 通过qRT-PCR分析LINC00665在肝癌组织中的表达情况。选择人肝癌细胞Hep3B和Huh7细胞，分别将其分为siRNA-NC组、siRNA-LINC00665组、let-7i mimics-NC组、let-7i mimics组进行转染；采用qRT-PCR和Western blot检测各组的HMGA1 mRNA和蛋白水平；CCK8法检测各组细胞的增殖活力；划痕实验检测各组细胞的划痕愈合率；Transwell实验检测各组细胞的侵袭数量。结果 LINC00665在肝癌组织中的表达量显著高于正常组织。hep3B和Huh7细胞转染48 h后，与si-NC组相比，si-LINC00665组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降，HMGA1的mRNA和蛋白水平下降，let-7i的表达水平升高；与let-7i mimics-NC组相比，let-7i mimics组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降，HMGA1的mRNA和蛋白水平下降。结论 LINC00665通过let-7i/HMGA1途径，在肝癌进展中调控肿瘤增...     

NRP1和miR-9在人NSCLC组织和癌旁组织中的表达及其临床意义

目的: 检测人非小细胞肺癌(NSCLC)组织标本中神经纤毛蛋白1(NRP1)mRNA和miR-9的表达水平,并探讨二者表达与NSCLC患者临床特征之间的关系。方法: 在患者知情同意下,收集2010-2011年吉林大学中日联谊医院匹配的NSCLC患者组织标本,包括45例正常组织、45例癌旁组织及45例肿瘤组织。采用qRT-PCR法检测不同组织中NRP1 mRNA和miR-9表达水平,分析二者表达水平与不同临床病理特征的相关性。结果: 与正常组织比较,癌旁组织中NRP1 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),而肿瘤组织中NRP1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与正常组织比较,癌旁组织miR-9表达水平无明显变化(P>0.05),而肿瘤组织中miR-9表达水平明显升高(P<0.05)。男性癌旁组织中miR-9表达水平低于女性(P<0.05)。NSCLC患者肿瘤组织中NRP1 mRNA表达水平与性别、年龄、分化程度、TNM分期及临床分期无关联(P>0.05),但与病理分型及淋巴结转移有关联(P<0.05);NSCLC患者肿瘤组织中miR-9表达水平与年龄、肿瘤病理类型、淋巴转移、分化程度、TNM分期及临床分期无关联(P>0.05),而与性别因素有关联(P<0.05)。结论: NSCLC患者肿瘤组织中miR-9表达水平显著升高,而NRP1 mRNA表达水平明显下降,NRP1 mRNA检测有助于判断NSCLC的分型及转移。     

microRNA-616在肝细胞癌侵袭转移中的作用机制研究

目的探讨microRNA-616（miR-616）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC侵袭转移中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测miR-616在60例HCC及癌旁组织中的表达,同时检测miR-616在不同肝癌细胞系中的表达情况;免疫组织化学染色检测miR-616在HCC及癌旁组织中波形蛋白（vimentin）、上皮型钙黏素（E-cadherin）及同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）的表达情况;qRT-PCR检测miR-616在人正常永生化肝细胞（LO2）及5种不同肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721、Hep3B、Hu7）中的表达水平;使用miR-616抑制物作用Hep3B细胞,TranswellTM实验检测miR-616抑制后Hep3B细胞侵袭能力变化;应用miR-616抑制物及PTENsiRNA转染Hep3B细胞,qRT-PCR检测Hep3B中miR-616、vimentin、PTEN、E-cadherin的mRNA水平,Westernblot法检测癌细胞中vimentin、PTEN、E-cadherin的蛋白水平。结果miR-616在HCC组织中表达水平高于对应癌旁组织;miR-616在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-616高表达与低表达在血管侵犯、Edmonson-Steiner分级、TNM分期比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);miR-616高表达肝癌组PTEN及E-cadherin水平低于miR-616低表达肝癌组,而vimentin水平高于miR-616低表达肝癌组,相关性分析结果显示HCC组织中miR-616与E-cadherin、PTEN水平呈负相关,与vimentin水平呈正相关;在肝癌细胞中抑制miR-616后PTEN及E-cadherin表达水平上调,而vimentin表达降低,Hep3B细胞的侵袭能力明显降低。结论miR-616在HCC组织中表达上调,其表达与HCC恶性临床病理特征有关,miR-616促进肝癌细胞侵袭转移的作用可能与其抑制PTEN表达及诱导上皮间质转化有关。     

血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响

目的：探讨血管内皮生长因子165b（VEGF165b）对人肝癌HepG₂细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法：HepG₂细胞分为空白组（仅加转染试剂）、对照组（转染阴性对照PcDNA3.0表达载体）和PcDNA-VEGF165b组（转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b）。MTT法检测各组HepG₂细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG₂细胞迁移能力。结果：与空白组比较,对照组HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义（P<0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG₂细胞迁移率明显降低（P<0.05）。结论：VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。     

Exendin-4对胰岛素抵抗人肝癌HepG2细胞脂代谢相关因子基因表达的影响

目的：探讨Exendin-4（Ex-4）对胰岛素抵抗（IR）人肝癌HepG₂细胞脂代谢相关因子表达的影响,阐明Ex-4改善IR的作用。方法：选取处于对数生长期的人肝癌HepG₂细胞,采用高浓度胰岛素诱导HepG₂细胞制备IR模型（HepG₂-IR细胞）,再将其分为对照组（不含胰岛素的HepG₂细胞）、IR组（IR模型,即HepG₂-IR细胞）和Ex-4组（IR模型中加入10 nmol·L^-1 Ex-4）。采用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）检测细胞中葡萄糖消耗量,采用油红O染色观察细胞形态及胞内脂滴形成情况,应用甘油三酯（TG）试剂盒检测细胞中TG水平,采用荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）和载脂蛋白B100（apoB100）等脂代谢相关因子mRNA表达水平。结果：HepG₂细胞建立IR模型后,与对照组比较,IR组HepG₂-IR细胞葡萄糖消耗量明显降低（P<0.01）;与IR组比较,Ex-4组HepG₂-IR细胞葡萄糖消耗量明显增加（P<0.05）。油红O染色法,与对照组比较,IR组细胞含脂率明显升高（P<0.05）;与IR组比较,Ex-4组细胞中含脂率明显降低（P<0.05）。与对照组比较,IR组细胞中TG水平明显升高（P<0.01）;与IR组比较,Ex-4组细胞中TG水平明显降低（P<0.05）。qRT-PCR检测,与对照组比较,IR组细胞中ACC、FAS和SREBP-1c mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,apoB100mRNA表达水平明显降低（P<0.05）;与IR组比较,Ex-4组细胞中ACC、FAS和SREBP-1c mRNA表达水平降低（P<0.05）,apoB100 mRNA表达水平升高（P<0.01）。结论：Ex-4可通过调节人肝癌HepG₂细胞脂类代谢相关因子的表达进而改善IR。     

miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3 促进肝癌细胞增殖

目的检测MicroRNA-128a（miR-128a）在肝细胞癌中的表达情况并探讨其在肝癌细胞中的生物学功能及机制。方法收
集19例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-128a 在肝细胞癌和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达;应用
miR-128a mimics或inhibitor转染人肝癌细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化;软件预测miR-128a的潜在靶点RND3,并用
双荧光素酶报告实验证实miR-128a与RND3 3’UTR结合,qRT-PCR和Western blot检测miR-128a潜在靶点RND3的表达变化;
Western blot检测细胞周期蛋白变化。结果在肝细胞癌组织中miR-128a的表达显著高于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-128a
促进肝癌细胞增殖（P<0.05）;在肝癌细胞中miR-128a通过与RND3 3’URT结合下调RND3 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）;抑
制miR-128a的表达可以导致cyclin B1、cyclin D1 和CDK4表达下调。结论miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控
RND3促进肝癌细胞增殖。
     

miR-18a对结直肠癌SW116细胞辐射敏感性的影响

目的:探讨miR-18a与结直肠癌SW116细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-18a影响细胞凋亡和自噬的可能机制。方法:人结直肠癌SW116细胞分为miR-18a NC组、miR-18a mimic组、miR-18a NC+4Gy组和miR-18a mimic+4Gy组。qRT-PCR法检测照射前后SW116细胞中miR-18a的表达;集落形成实验观察miR-18a对SW116细胞辐射敏感性的影响;GFPLC3形态学方法检测SW116细胞自噬率;流式细胞术检测SW116细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-18a的靶基因,以荧光素酶报告基因验证miR-18a与靶基因3'UTR结合;Western blotting法检测SW116细胞中共济失调-毛细血管扩张突变基因(ATM)蛋白表达。结果:与照射前比较,照射后SW116细胞中miR-18a表达水平明显降低(P<0.05)。集落形成实验,与miR-18a NC组比较,miR-18a mimic组SW116细胞辐射敏感性增强(P<0.05),细胞凋亡率和自噬率明显增加(P<0.05)。与miR-18a NC+4Gy组比较,miR-18a mimic+4Gy组SW116细胞中ATM蛋白表达减少。结论:miR-18a的靶基因为ATM;miR-18a mimic可促进辐射诱导的细胞凋亡和自噬,且能增加结直肠癌SW116细胞辐射敏感性。     

miR-18b增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂化疗敏感性的作用及其机制

目的:探讨miR-18b在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂(DDP)化疗敏感性中的作用,阐明其可能的机制。方法:乳腺癌MDA-MB-231细胞根据转染条件分为MDA-MB-231组、MDA-MB-231+DDP组、MDA-MB-231-NC组、MDA-MB-231-NC+DDP组、MDA-MB-231 mimic组和MDA-MB-231 mimic+DDP组。采用生物信息学方法预测的miR-18b的靶基因;荧光素酶报告基因分析验证miR-18b与靶基因3'UTR的结合;应用qRT-PCR法检测各组MDA-MB-231细胞中miR-18b的表达水平;Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中ATM蛋白表达水平;CCK-8法检测各组细胞的生长抑制率。结果:荧光素酶实验报告验证ATM为miR-18b的靶基因,并与ATM 3'UTR序列部分结合;与MDA-MB-231-NC组比较,MDA-MB-231 mimic组和MDA-MB-231 mimic+DDP组细胞中miR-18b的表达水平升高(P<0.05);Western blotting法检测,与MDA-MB-231组比较,MDA-MB-231+DDP组细胞中ATM蛋白表达水平升高(P<0.05);与MDA-MB-231-NC组比较,MDA-MB-231 mimic组细胞中ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);与MDA-MB-231-NC+DDP组比较,MDA-MB-231 mimic+DDP组细胞中ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);CCK-8法检测,与MDA-MB-231 NC组比较,经不同浓度DDP作用后,MDA-MB-231 mimic组细胞生长抑制率均升高。结论:miR-18b通过靶向调控ATM蛋白增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对DDP的化疗敏感性。     

姜黄素对肝癌细胞miR-29及VEGF表达的干预作用

目的观察姜黄素对肝癌细胞miRNA-29(miR-29)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的干预作用。方法收集2008年12月1日—2018年12月1日杭州市肿瘤医院临床资料较完整的手术切除肝癌标本41份,含癌组织和癌旁非癌组织,采用免疫组化研究VEGF表达情况以及与肝癌分型的相关性;转染VEGF siRNA后,MTT检测其对细胞增殖的调控作用,Western blot检测其对凋亡蛋白Bcl2、Bax表达的影响;PCR检测肝癌细胞miR-29表达,转染miR-20mimics后,qRT-PCT和Western blot检测对VEGF表达的影响;MTT检测姜黄素对Hep G2细胞抑制效应的IC50,qRT-PCT和Western blot检测姜黄素对mi R-29-VEGF调控作用。结果肝癌组织VEGF表达阳性率70.73%(29/41)显著高于癌旁肝组织30.00%(3/10)和正常肝组织(0.00%)(P均0.01);肝癌组织VEGF表达水平与肿瘤的病理分级、侵袭转移性有关,病理分级Ⅲ～Ⅳ级明显高于Ⅰ～Ⅱ级(P0.05),高侵袭转移(15/24)明显高于低侵袭转移(7/17)(P0.05);qRT-PCR结果显示,与转染前比较,转染VEGF si RNA 48h后,细胞增殖下降[(2.31±0.39)%比(4.21±0.52)%,P0.05];与阴性对照组比较,抑制VEGF表达后,HepG2细胞迁移能力明显降低;与正常人肝细胞比较,HepG2细胞miR-29表达量显著降低[(2.11±0.92)比(7.32±2.11),P0.05];转染miR-29 mimics促进miR-29表达后,VEGF mRNA表达水平下降[(3.01±1.00)比(11.33±2.02),P0.05];姜黄素对Hep G2细胞抑制率在72h最好(IC50=49.50μmol/L);肝癌HepG2细胞与姜黄素59.68μmol/L共同培养72h后,miR-29表达显著升高[(9.04±2.19)比(2.18±1.00),P0.05],VEGF mRNA表达降低[(2.98±1.00)比(8.32±1.80),P0.05]。结论姜黄素可能通过促进肝癌细胞miR-29表达,抑制VEGF表达,调控肝癌细胞生物学过程。     

miR-135b通过靶向FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖

目的探讨miR-135b在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖的作用的机制。方法运用RT-PCR的方法检测22 对子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的miR-135b 和FOXO1 的表达;运用RT-PCR 的方法检测JEC、Ishikawa、HEC-1-B、 RL-952这4种子宫内膜癌细胞株中miR-135b和FOXO1的表达。分别转染miR-135b的模拟物抑制物于子宫内膜癌细胞株,通 过RT-PCR检测转染的效果,通过MTT增殖试验检测对子宫内膜癌细胞增殖的影响。通过RT-PCR的方法检测FOXO1 mRNA 的变化,Western blotting 检测在FOXO1 蛋白的变化。结果miR-135b 在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达增高（P< 0.05）, FOXO1在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达降低（P<0.05）。荧光定量PCR显示子宫内膜癌细胞中miR-135b与 FOXO1表达趋势成负相关。miR-135b能促进子宫内膜癌细胞增殖（P<0.05）。上调miR-135b能够降低FOXO1 mRNA和蛋白 的表达（P<0.05）,下调miR-135b能够提高FOXO1 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论miR-135b在子宫内膜癌的发生发展 中发挥重要的作用,其部分分子机制可能是通过调控靶基因FOXO1而发挥作用。     

miR-27a对胃癌细胞凋亡影响的体外研究

目的:探讨miR-27a对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分别构建miR-27a过表达和敲除FOXO1的SGC-7901细胞株,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡和自噬相关蛋白p53、BCL-2、LC3I、LC3II水平,同时检测上调及下调miRNA-27a的胃癌细胞FOXO1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miR-27a的靶基因。实时聚合酶链式反应（Realtime PCR） 检测miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒的转染效率,并检测过表达/敲低miRNA-27a的胃癌细胞中FOXO1 mRNA的水平。结果:（1）上调miR-27a的细胞凋亡率较对照组明显下降,且凋亡相关蛋白BCL-2表达上调,p53水平下降,自噬相关蛋白LC3I、LC3II的表达较对照组下调（P<0.05）。而敲低胃癌细胞中FOXO1后得到了与上调miR-27a相似的实验结果。（2）双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-27a与FOXO1存在靶点关系。miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒分别成功转染至胃癌细胞中。上调或下调胃癌细胞中miR-27a后,SGC-7901细胞中FOXO1 mRNA水平无明显变化（P>0.05）,FOXO1基因表达在蛋白水平相应下调或上调。结论:体外实验中,miR-27a可通过靶向抑制FOXO1的表达抑制胃癌细胞凋亡,miR-27a/ FOXO1轴可以为胃癌治疗提供新的策略。     

miR-4324与Talin2在乳腺癌中高表达

目的 探讨miR-4324对踝蛋白2（Talin2）调控和乳腺癌细胞的影响及临床意义。方法 利用免疫组化法检验Talin2在乳腺癌组织（BCT）和对应癌旁乳腺组织（PCBT）的表达,结合病理资料分析Talin2与乳腺癌预后及病理特征间的关联;qRT-PCR法测定miR-4324在BCT和PCBT的表达;人乳腺癌细胞株（SKBR-3）体外培养,分为Control对照组（正常培养)及相关转染组（转染相关片段）：miR-4324 mimics组;miR-4324 inhibitor组;miR-4324 NC组;si-Talin2组;miR-4324 inhibitor+si-Talin2组。通过细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭实验,检测SKBR-3的生物学活性改变;通过qRT-PCR及Western-blot实验测定Talin2的表达;利用荧光素酶活性实验验证miR-4324对Talin2靶向表达;利用Transwell回复实验验证miR-4324调控Talin2影响SKBR-3细胞的迁移能力。结果 Talin2在BCT中的表达高于PCBT,并与淋巴结转移、HER-2的高表达有关（P<0.05）,与年龄、临床分期、组织学分级及雌、孕激素受体（ER、PR）的表达间无明显相关性（P>0.05）;miR-4324在BCT中表达较PCBT降低（P<0.01）;与Control组比较,miR-4324 mimics组SKBR-3细胞增殖降低,凋亡增多（P<0.01）,迁移和侵袭能力降低（P<0.05）;双荧光素酶报告基因检测证实,相对于Control组,miR-4324 mimics共转染可显著降低Talin2-3'-UTR WT报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）;miR-4324 mimics组中Talin2的Mrna和蛋白表达较Control组降低（P<0.05）;Transwell迁移实验结果显示,相对于Control组,SKBR-3细胞的迁移能力在miR-4324 inhibitor组中上升（P<0.01）;si-Talin2组中下降（P<0.01）;miR-4324 inhibitor+si-Talin2组中居中（P<0.05）。结论 Talin2高表达与乳腺癌患者淋巴结转移及HER-2过表达相关,下调miR-4324能抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭与迁移,并诱导凋亡,其中抑制迁移可能是其靶向抑制Talin2表达实现的。     

miR-202通过降低肝癌细胞ROCK1表达抑制其迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-202（miR-202）对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：通过实时定量PCR检测Hep3B、Huh7及HCCLM3人肝癌细胞和LO2人正常肝细胞中miR-202的表达水平。以miR-202表达水平最低的HCCLM3细胞为转染对象,转染miR-202模拟物或空白对照miRNA,以miR-202表达水平最高的Hep3B细胞为转染对象,转染miR-202抑制物或阴性对照miRNA,并利用实时定量PCR验证转染效率。采用Transwell迁移和侵袭实验检测过表达和敲低miR-202对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学网站检索并应用荧光素酶报告基因实验验证miR-202的靶基因。实时定量PCR和Western blot检测miR-202靶基因的表达水平。结果：与正常肝细胞LO2相比,miR-202在肝癌细胞的表达水平显著降低;HCCLM3细胞转染miR-202模拟物后,细胞miR-202的表达水平显著增加;过表达miR-202后,HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力显著降低;Hep3B细胞转染miR-202抑制物后,细胞miR-202的表达水平显著降低;敲低miR-202后,Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著增强;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明ROCK1基因为miR-202的靶基因。过表达miR-202可明显降低肝癌细胞中ROCK1基因的表达,而敲低miR-202可明显增加肝癌细胞中ROCK1基因的表达。结论：miR-202在肝癌细胞中低表达,miR-202通过抑制ROCK1的表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

MiR-4719通过靶向调控ARHGAP36抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达,研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织,乳腺癌细胞株（BT549和MDA-MB-231）以及正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）中miR-4719和ARHGAP36的表达水平。生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响,并预测miR-4719的潜在靶基因。将miR-4719模拟物,靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞。Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3'-非翻译区（3'-UTR）直接结合。结果 与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比,miR-4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞（P<0.01）中显著降低和增高。miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关（P<0.01）。过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关（P<0.01）,双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达（P<0.01）,向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达（P<0.01）。此外,过表达ARHGAP36可逆转miR-4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.01）。结论 乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失,导致靶基因ARHGAP36的异常高表达,促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用

目的：利用实时定量RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因YES1,探讨miR-205抑制肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法: 实时定量RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中miR-205的表达水平;miR-205 mimics和control mimics分别转染A549细胞,利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒 pcDNA3/EGFP,将YES1 3′UTR的一段特异性序列、YES1 3′UTR（miR-205互补位点）点突变后的序列分别插入该质粒中,构建YES1-3′UTR和mut-YES1-3′UTR的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR与miR-205 mimics、YES1-3′UTR与control mimics、mut-YES1-3′UTR、mut-YES1-3′UTR与miR-205 mimics和mut-YES1-3′UTR与control mimics共6组,均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果：与癌旁正常肺组织比较,miR-205在肺癌组织及A549细胞中表达水平降低(P<0.05);miR-205mimics 转染组A549细胞增殖率明显低于转染control mimics对照组（P<0.05）;YES1-3′UTR与miR-205 mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组（P<0.01）;YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组（P<0.05）。结论： miR-205可能通过靶定靶基因YES1抑制了肺癌细胞A549的增殖,提示miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。     

miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的探究miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-28-5p在正常结肠细胞NCM460与结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中表达量的差异。将HCT116、SW480、SW620各分为三组:对照组,过表达组,沉默组。对照组不予特殊处理,其余两组分别转染miR-28-5p mimic和miR-28-5p inhibitor,采用qRT-PCR验证转染效率,采用CCK8法检测三组细胞的增殖能力,采用划痕实验检测三组细胞的的迁移能力。结果miR-28-5p在结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中低表达,与正常结肠细胞NCM460比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞增殖和迁移能力均降低(P<0.05),沉默组细胞增殖和迁移能力均增强(P<0.05)。结论miR-28-5p在结肠癌细胞中低表达且有调控结肠癌细胞增殖和迁移的作用。     

miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞（SKBR-3）与乳腺癌紫杉醇耐药细胞（SKBR-3/PR）为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组（miR-16-5p mimics）、miR-16-5p抑制剂组（miR-16-5p inhibitor）,YWHAQ干扰组（si-YWHAQ）,以及联合组（miR-16-5p mimics+si-YWHAQ）。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织（-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P<0.01）。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶向调节YWHAQ（P<0.01）。相对于 SKBR-3 细胞,SKBR-3/PR 细胞中 miR-16-5p 表达水平降低（P<0.01）,YWHAQ 表达水平增高（P<0.05）。Western blot 结果显示 miR-16-5p 类似物能够抑制 YWHAQ 表达,miR-16-5p 抑制剂能够促进 YWHAQ 表达（P<0.01）。相对于对照组,miR-16-5p类似物能够将耐药细胞阻滞在G0/G1期（[ 55.61±1.99）% vs（43.06±1.53）%,P<0.01],抑制细胞增殖和迁移能力（P<0.01）,促进细胞凋亡 （[ 10.37±0.23）% vs（3.81±0.88）%,P<0.01],YWHAQ干扰组细胞迁移能力下降,凋亡率升高,miR-16-5p类似物组与YWHAQ干扰组细胞的Bax蛋白表达增加,YWHAQ与Bcl-2蛋白水平降低。相对于miR-16-5p 类似物组,联合组细胞迁移能力被抑制（75.75±29.85 vs 181.11±11.71,P<0.01）,凋亡率显著升高（[ 24.20±2.43）% vs （14.10±4.47）%,P<0.01]。结论 miR-16-5p能够通过靶向调节YWHAQ调控Bcl-2/Bax的表达,从而改变乳腺癌紫杉醇耐药细胞的生物学活性。     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。