肝炎病人血清、外周血单核细胞及肝脏中GBV-C/HGV负链RNA的检测

目的：研究２７例肝炎病人血清、外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）及肝脏中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正链及负链ＲＮＡ（复制中间体）的存在状况。方法：应用逆转录－巢式多聚酶链反应技术检测ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正、负链ＲＮＡ。结果：２７例病人中２１例病人血清、７例ＰＢＭＣ、１０例肝组织中检测到ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正链ＲＮＡ,其中２例单一ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染者肝组织中检测到负链ＲＮＡ,在２７例病人血清及ＰＢＭＣ中均未检测到负     

输血后丙型肝炎患者庚型肝炎病毒感染的初步研究

为探讨输血后丙型肝炎患者合并庚型肝炎病毒感染的情况，以及合并感染是否加重肝损伤，本文采用逆转录聚合酶链反应方法（ＲＴ—ＰＣＲ），对２０例输血后丙型肝炎患者进行血清ＨＧＶ／ＧＢＶ－ＣＲＮＡ检测，结果合并ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ感染４例，占２０％；合并感染者ＡＬＴ升高程度与单纯ＨＣＶ感染者ＡＬＴ升高程度无差别，提示ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ不加重ＨＣＶ的肝损伤。     

HGV与HBV,HCA重叠感染病例的研究

目的 探讨庚肝病毒（ＨＧＶ）与ＨＢＶ，ＨＣＶ重叠感染状况。方法 采用套式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）技术检测了２２例乙肝病毒感染者及４８例丙肝病毒感染者血清ＨＧＶ ＲＮＡ。结果 ＨＧＶ与ＨＢＶ、ＨＣＶ重叠感染率分别为３１．８％（３１．８％（７／２２）、３１．３％（１５／４８），重叠感染病例与单纯ＨＢＶ，ＨＣＶ感染者在ＡＬＴ、ＳＢＩＬ水平及疾病的临床分型上无统计学差异。结论 ＨＧＶ与ＨＢＶ、     

慢性丙型肝炎患者肝内HLA-Ⅱ类抗原和丙型肝炎病毒NS_3抗原的表达

为了研究丙型肝炎的ＨＬＡ－Ⅱ类抗原相关性免疫发病机制,对４７例慢性病毒性肝炎患者的肝活检组织标本应用免疫组织化学技术研究了肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原和ＨＣＶ,ＮＳ３抗原的表达。１１例慢性丙型肝炎患者中３例肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原表达呈阳性,其阳性程度明显低于慢性乙型肝炎患者（１５／１９）和慢性乙型和丙型肝炎病毒重叠感染者（１５／１７）。１０例患者肝细胞内ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性,其中６例为慢性丙型肝炎患者,４例为慢性乙型和丙型肝炎病毒重叠感染者。慢性乙型肝炎患者的肝细胞中无ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性。尽管在ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性肝细胞表面未发现ＨＬＡ－Ⅱ类抗原,但ＨＬＡ－Ⅱ类抗原阳性表达明显与肝组织损伤的严重性有关。因此肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原的表达可能在慢性丙型肝炎患者的免疫发病中有一定的作用     

肝病患者中丙型肝炎病毒感染的免疫组化检测

以ＨＣＶＮＳ３区单克隆抗体，ＬＳＡＢ法检测了１１６例各类肝病肝组织（其中肝细胞癌５２例，肝炎后肝硬化１６例，慢性肝炎４０例，体质性黄疸８例）及６份正常肝组织（作为对照）中ＨＣＶ抗原的表达状况，结果表明，ＨＣＶ抗原在肝细胞癌，肝炎后肝硬化及慢性肝炎中检出率分别为１３．５％（７／５２），１２．５％（２／１６），１０％（４／４０），而在体质性黄疸及正常肝组织中未检出ＨＣＶ抗原，ＨＣＶ抗原可见于癌细胞或癌     

慢性丙型肝炎患者肝内HLA—Ⅱ类抗原和丙型肝炎病毒NS3抗？…

为了研究丙型肝炎的ＨＬＡ－Ⅱ类抗原相关性免疫发病机制,对４７例慢性病毒性肝炎患者的肝活检组织标本应用免疫组织化学技术研究了肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原和ＨＣＶ,ＮＳ３抗原的表达。１１例慢性丙型肝炎患者中３例肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原表达呈阳性丙型肝炎其阳性明显低于慢性乙型肝炎患者（１５／１９）和慢性乙型有丙型肝炎病毒重叠感染者,１０直细胞内ＨＣＶ、ＮＳ３怕阳性,其中６例为慢性丙型肝炎患者,４例为慢性乙型和丙型肝     

肝病患者中丙型肝炎病毒感染的免疫组化检测

以ＨＣＶＮＳ３区单克隆抗体、ＬＳＡＢ法检测了１１６例各类肝病肝组织（其中肝细胞癌５２例，肝炎后肝硬化１６例，慢性肝炎４０例，体质性黄疸８例）及６份正常肝组织（作为对照）中ＨＣＶ抗原的表达状况，结果表明，ＨＣＶ抗原在肝细胞癌、肝炎后肝硬化及慢性肝炎中检出率分别为１３．５％（７／５２）、１２．５％（２／１６）、１０％（４／４０），而在体质性黄疸及正常肝组织中未检出ＨＣＶ抗原。ＨＣＶ抗原可见于癌细胞或癌周肝细胞的胞浆或胞核中，实验结果支持ＨＣＶ与肝细胞癌的关联，ＨＣＶ感染对促使肝病的加重也具有一定影响。肝细胞癌中，胞核型ＨＣＶ抗原表达较多见。癌周组织中ＨＣＶ抗原检出率高于癌组织，提示ＨＣＶ可能主要作用于癌前病变，在肝细胞癌发生的初始阶段起作用，促使正常细胞恶性化。     

庚型肝炎病毒抗原在急性重型肝炎患者肝组织中的表达及意义

目的：探讨急性重型肝炎患者肝组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的存在状况及其与发病的关系；方法：采用免疫组化方法以抗－ＨＧＶ ＮＳ５单克隆抗体对２７例急性重型肝炎患者尸检肝组织中的ＨＧＶ等抗原进行了检测；结果：２７例肝组织中检测出ＨＧＶ ＮＳ５阳性６例（２２．２％）。ＨＧＶ ＮＳ５Ａｇ阳性着色颗粒表达于残存的肝细胞胞浆内，阳性细胞呈片簇状分布于汇管区周围。６例中４例重叠有ＨＧＶ或／和ＨＣＶ感染，肝组织中     

庚型肝炎病毒基因组全长cDNA的拼接及克隆

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３′和Ｉｗ３为起始材料，采用重叠延伸ＰＣＲ拼接和连接酶连接的方法，构建ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆。结果：ＧＢＶ／Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆的酶切图谱与预期一致；核苷酸序列分析显示，克隆的     

贲门癌细胞多向分化的临床意义

目的：探讨贲门癌细胞生物学行为及其临床意义。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学方法，应用Ｖｉｍ、ＣＨＧ、ＨＣＧ３种抗体对６２例贲门癌进行标记。结果：ＣＨＧ抗体表达１２例，ＨＣＧ表达３２例，Ｖｉｍ表达３３例，ＣＨＧ－Ｖｉｍ共同表达１２例，ＨＣＧ－Ｖｉｍ共同表达１９例，ＣＨＧ－ＨＣＧ共同表达９例，ＨＣＧ－Ｖｉｍ－ＣＨＧ共同表达８例。其中Ｖｉｍ、ＨＣＧ表达的肿瘤６０％以上出现在低分化癌细胞中。结论：贲门癌具有多向分化的特征，伴有向间叶、滋养叶分化的肿瘤大多数分化低并与临床预后有一定关系。对认识贲门癌生物学行为，探讨其预后及依肿瘤向不同组织分化采用药物治疗有指导意义。     

SEQUENCE ANALYSIS OF THE NS5 REGION OF GBV-C／HGV AND DETECTION OF THE VIRUS BY REVERSE TRANSCRIPTASE PCR

GBV-C/HGV is a newly identified virus associated with human hepatitis.In this study,the nucleotide sequences of the partial NS5 gene of GBV-C/HGV derived from sera of 8 Chinese patients were determined.The nucleotide homology among the 8 isolates were 92% on average.On the basis of sequence analysis,two sets of oligonucleotide primers derived from highly conserved region of GBV-C/HGV NS5 gene were designed to establish both sensitive and specific nested PCR for detection of GBV-C/HGV RNA.253 Chinese patients were examined for the virus RNA.GBV-C/HGV RNA positive rates in patients infected with HBV,HCV and patients with chronic non-B,non-C hepatitis were 18.4%,19.8% and 8.9% respectively.This result suggested that HBV,HCV and GBV-C/HGV shared the same transmission risk factors.8 patients with GBV-C/HGV and HCV coinfection were retrospectively observed for the response to interferon.Coinfection with GBV/HGV did not negatively influence the responsiveness of HCV,and GBV-C/HGV was sensitive to interferon to a certain degree.     

肝细胞癌组织中HBV，HCV，HGV的表达

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV) ,丙型肝炎病毒 (HCV)及庚型肝炎病毒 (HGV)在肝细胞癌 (HCC)组织中的存在状态。方法　分别采用抗 -HBVS ,抗 -HCVNS5及抗 -HGVNS5三种单克隆抗体 ,以免疫组织化学SPAB法检测 2 6例HCC患者石蜡包埋的肝癌及癌旁肝组织中HBVS抗原 (HBsAg) ,HCVNS5抗原 (HCAg)和HGVNS5抗原(HGAg)。结果　检出HBsAg 17例 ( 65 % ) ,HCAg 13例 ( 5 0 % )及HGAg 9例 ( 3 5 % ) ,其中HBV/HCV/HGV重叠感染 7例 ,HBV/HCV重叠感染 4例 ,HBV单独感染 6例 ,HCV单独感染 2例 ,HGV单独感染 2例 ,另有 5例均不表达上述三种抗原 ;HBsAg与HGAg阳性率之间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,HBsAg与HCAg及HCAg与HGAg阳性率之间差异均无显著性(P >0 0 5 ) ;HBV ,HCV及HGV均表达于肝细胞或肝癌细胞浆内 ,呈细颗粒状分布 ,癌组织表达强度均弱于癌旁组织。结论　HCC患者中有较高的HBV ,HCV及HGV感染率 ,感染率顺序为HBV >HCV >HGV ;推测HBV感染在HCC发生过程中起重要作用 ,HCV和HGV感染可能是HCC发生的相关因素。     

三种肝炎病毒在肝细胞癌组织及慢性肝炎肝组织中的表达

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及庚型肝炎病毒(HGV)在肝细胞癌(HCC)及慢性肝炎肝组织中的存在状态。方法:分别采用抗HBVS,抗-HBVC,抗HCVNS5及抗-HGVNS5单克隆抗体,以免疫组织化学SPAB法检测27例HCC及37例慢性肝病患者石蜡包埋的肝组织中HBVS抗原(HBsAg)、HBVC抗原(HBcAg)、HCVNS5抗原(HCAg)和HGVNS5抗原(HGAg)。结果:HCC中检出HBsAg18例(66.7%),HCAg13例(48.2%)及HGAg9例(33.3%)。其中HBV/HCV/HGV重叠感染7例,HBV/HCV重叠感染4例,HBV单独感染7例,HCV单独感染2例,HGV单独感染2例;在慢性肝炎中检出HBsAg26例(70.3%),HCAg19例(51.4%)及HGAg12例(32.4%)。其中HBV/HCV/HGV重叠感染10例,HBV/HCV重叠感染5例,HBV单独感染11例,HCV单独感染5例,HGV单独感染2例。HBsAg、HCAg、HGAg均表达于肝细胞或肝癌细胞浆内,呈细颗粒状分布。HBcAg表达于肝细胞或肝癌细胞胞核或胞浆内。结论:慢性肝炎及HCC患者有较高的HBV、HCV及HGV感染率,HBV感染在HCC的发生过程中起重要作用,HCV和HGV的感染可能是HCC发生的相关因素。     

HIV和HCV感染者重叠感染HGV对病毒复制的影响

目的 :了解人免疫缺陷病毒 (HIV)感染者和丙型肝炎病毒 (HCV)感染者重叠感染庚型肝炎病毒 (HGV)的情况 ,探讨重叠感染病毒在体内的相互作用机理。方法 :用定量 PCR测定 HIV和 HCV感染者血浆中病毒载量 ,同时用 RT- PCR检测这些患者 HGV的感染情况 ,并对部分 HGV阳性者进行序列测定。结果 :317例 HIV患者中检出 HGV阳性 12 3例 ,阳性率为 38.8% ;91例 HCV患者中 HGV阳性 19例 ,阳性率为 2 0 .9% ,统计学分析有显著差异。进一步研究显示 ,HIV和 HGV重叠感染中 HIV病毒载量明显低于单独 HIV感染者 [(1.8± 0 .6 )× 10copies/ ml vs(1.9± 1.1)× 10 2 copies/ ml];而 HCV和 HGV重叠感染者中 HCV的病毒载量与单独 HCV感染者比较没有显著差异 [(1.5± 0 .6 )× 10 4copies/ ml vs(5 .4± 1.8)× 10 4copies/ ml]。序例分析表明 ,与 HIV或 HCV重叠感染的 HGV来源于同一病毒株。结论 :HIV感染者有很高的 HGV重叠感染率 ,而且 HGV感染能明显抑制 HIV在体内的病毒复制。     

人肝癌细胞系7721与原代人胎肝细胞用于体外培养HCV的对比研究

目的 研究丙型肝炎病毒（HCV）在体外培养原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系7721中复制和表达的异同,探讨HCV体外培养条件。方法 原代人胎肝细胞系7721分别与HCV感染血清共孵育后,用逆转录-聚合酶链反应、原位杂交、免疫组化检测细胞和培养上清中的HCV RNA和抗原表达。结果 从孵育的2～3天,即可在细胞内和/或培养上清中间断地检出HCV RNA（其中HCV在7721细胞株中的复制至少可达66d,HCV在 人胎肝细胞中的复制持续25d）;HCV抗原可在感染细胞内得到稳定表达,感染细胞内存在HCV负链RNA杂交信号,且多位于细胞浆。结论 两种肝细胞对HCV易感,尤其是7721细胞可以稳定地支持HCV体外复制,可用于HCV体外长期培养的靶细胞。     

RNA病毒性肝炎抗原表达特点及与肝细胞损伤的关系

目的　探讨HCV、HDV、HGV3种肝炎病毒抗原表达与肝细胞损伤及不同年龄组的关系。方法　采用免疫病理组织化学方法对380例病毒性肝炎患者肝穿活检组织进行检测。结果　肝组织中3种病毒抗原在各年龄组的检出率依次为青壮年＞老年＞儿童。在轻度、中度和重度慢性肝炎中,病毒抗原表达不同。结论　3种病毒抗原表达随患者年龄和肝细胞损伤程度不同而变化。但病毒抗原阳性的肝细胞数量与肝细胞损伤程度没有平行关系,在肝小叶大块坏死及新鲜坏死区内较少看到病毒抗原表达。     

慢性肝病患者肝组织中庚型肝炎病毒NS5抗原的检测

目的了解慢性肝病患者肝组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的存在状况。方法采用免疫组织化学方法,用抗ＨＧＶＮＳ５单克隆抗体对１１０例血清学病毒标记非甲非戊、乙型及丙型肝炎的慢性肝病患者肝组织中的ＨＧＶ抗原进行了检测。结果ＨＧＶ的总检出率为３２７％（３６／１１０）,非甲非戊、乙型及丙型肝炎病毒的检出率分别为２１％（４／１９）、３６％（２５／６９）及３２％（７／２２）;活动性肝硬化、原发性肝癌及慢性重型肝炎中ＨＧＶ的检出率为２２％（１０／４５）、４３％（２０／４７）及３３％（６／１８）,不同血清病毒标志组或病理类型之间其检出率差异均无显著意义（χ２＝４３１,１．５２;Ｐ＞０１０,Ｐ＞０２５）。ＨＧＶＮＳ５Ａｇ主要于肝细胞或癌细胞胞浆内表达,阳性肝细胞呈弥漫或大片灶状分布,免疫组织化学双标记染色显示ＨＢｓＡｇ或丙型肝炎（ＨＣＶ）ＮＳ３Ａｇ阳性细胞呈单个或小片灶状,多与ＨＧＡｇ阳性细胞位于同一区域内,或在同一肝细胞内表达。结论在慢性肝病患者肝组织中ＨＧＶ的感染较为常见     

HCV体外感染正常成人肝细胞的研究

目的 为进一步研究丙型肝炎免疫发病机制，临床治疗和疫苗研制提供最接近自然感染状态的理想细胞模型。方法 体外二步灌流法分离正常成人肝细胞并维持培养1月以上，丙型肝炎患者血清感染上述肝细胞并用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR法）检测被感染肝细胞HCV抗原表达及HCVRNA。结果 正常成人肝细胞可在体外存活1月以上，加丙肝患者血清4-36d后免疫组化法可检测到肝细胞内HCVNS3、NS5抗原表达，感染后2-36d，RT-PCR法可在感染肝细胞培养上清和细胞悬液中间断检测出HCVRNA。结论 正常成人肝细胞可在体外存活1月余并被HCV感染者血清感染。     

庚型肝炎病毒非结构基因（NS）5区部分序列的一级结构及其变异

测定庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构基因５（ＮＳ５）区部分基因序列。方法从３例献血员，２例肝硬化患者及１例非甲－戊型肝炎患者血清中通过逆转录－套式－聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长９９４ｂｐ的ｃＤＮＡ序列，ＰＣＲ产物纯化后以双脱氧末端终止法测定其序列。结果所分离的６株ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与国外报道的３株（ＧＢＶ－Ｃ、ＰＮＦ２１６１、Ｒ１０２９１）比较，同源性为８７．２％～９３．９％；６株间同源性为９０．１％～９３．８％。根据所测得的６株ｃＤＮＡ序列推导出其编码的氨基酸序列，与国外发表的３株序列相比，同源性在９３．６％～９８．７％，６株之间为９３．６％～９８．４％。在此区内发现有１６个保守的脯氨酸残基及８个保守的半胱氨酸残基。结论从不同慢性肝脏疾病患者及献血员血清中分离出６株ＨＧＶ，其ＮＳ５区部分序列在核苷酸水平及氨基酸水平均较保守。可依赖此区序列设计诊断试剂