珍珠丸—1和珍珠丸—2清除和抑制自由基的实验研究

本文报道珍珠丸－１（Ｚｈｅｎ－１）和珍珠丸－２（Ｚｈｅｎ－２）清除和抑制自由基的作用。结果显示Ｚｈｅｎ－１对０２＾－的ＩＣ５０为１１５．７μｇ／ｍｌ，ＳＣ５０为１１１．５μｇ／ｍｌ，对ＯＨ的ＩＣ５０为７４７μｇ／ｍｌ，ＳＣ５０为１１２１μｇ／ｍｌ；Ｚｈｅｎ－２对０２＾－的ＩＣ５０为６６．０μｇ／ｍｌ，ＳＣ５０为８２．４μｇ／ｍｌ，对ＯＨ的ＩＣ５０为６６０μｇ／ｍｌ，ＳＣ５０为６５２μｇ／ｍｌ。提增     

宁夏枸杞多糖对CC14损伤大鼠肝脏的保护作用

以ＣＣ１４诱发大鼠肝脏脂挝过氧化为自由基损伤模型，观察枸杞多糖，不同剂量（２５ｍｇ／１００ｇＮＷ６ｄ＾－１；５０ｍｇ／１００ｇＢＷ．ｄ＾－１）对鼠肝的保护作用。结果低剂量组能明显降低肝中丙二醛（ＭＤＡ）及甘油三脂（ＴＧ）（Ｐ〈０．０１），Ｐ〈０．０５）；两剂量组均能明显升高肝中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性（Ｐ〈０．００１）。提示ＬＢＰ对鼠肝自由基损伤有保护作用。高剂量级至ＭＤＡ是ＴＧ降低作用不明显     

HPLC法测定SHR血清中硝苯地平浓度及其药代动力学研究

目的建立血清中硝苯地平浓度的ＨＰＬＣ测定法，研究其在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）体内的药动学。方法ＳＨＲ灌胃给与硝苯地平１０ｍｇ／ｋｇ，用ＨＰＬＣ法测定硝苯地平血清浓度。用乙酸乙酯提取出血清中的硝苯地平，在５０℃水浴中用氮气吹干，残渣用流动相溶解后进样。选用ｓｈｉｍＰａｃｋＣＬＣ－ＯＤＳ柱，甲醇－水（６∶４）作流动相，检测波长２３５ｎｍ。结果：硝苯地平最低检出浓度为０．０２μｇ／ｍｌ，标准曲线线性范围为０．０２～５．０μｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９９７），血样平均回收率为９８．０９％。硝苯地平在大鼠体内的药动学符合一定开放模型，其参数为Ｔ１／２ｋａ＝０．８２８±０．５５ｈ，Ｔ１／２ｋｅ＝３．１７±２．３２ｈ，Ｔｍａｘ＝２．１２±１．４７ｈ，Ｃｍａｘ＝２．７８±１．５０μｇ／ｍｌ和ＡＵＣ＝２４．５±２９．２ｈ·μｇ／ｍｌ。结论本法能满足血清中硝苯地平浓度测定及药动学研究的需要。     

抗Ia单克隆抗体促进异基因皮肤移植耐受

目的：探索抗Ｉａ单克隆抗体促进“细胞＋环磷酰胺（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ,ＣＰ）”系统诱导移植耐受的作用及其机制。方法：ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２＾ｄ）小鼠经尾静脉注入Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２＾ｂ,Ｂ６）小鼠脾细胞,４８ｈ后腹腔注射ＣＰ,接着两天分别经尾静脉注入抗小鼠Ｉａ单克隆抗体５００μｇ,然后进行皮肤移植,并于耐３受３０ｄ对受体小鼠作混合淋巴细胞反应（ｍｉｘｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｒｅａｃ     

阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株HSC-T6增殖及胶原合成的影响

目的：研究阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖及胶原合成的影响。方法：采用肝贮脂细胞株,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖的影响;通过＾３Ｈ－脯氨酸掺入法测定药物对ＨＳＣ－Ｔ６胶原合成的影响。结果：阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖及胶原合成的抑制率随药物浓度增加（２８．９～４６２．６ｎｍｏｌ／Ｌ）而升高,呈药物浓度依赖关系。结论：阿魏酸     

普罗布考对过氧化氢诱导平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨普罗布考（Ｐｒｏｂｕｃｏｌ）对Ｈ２Ｏ２诱导的平滑肌细胞（ＳＭＣＳ）增殖的抑制作用。方法：采用细胞计数法和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察０．１～１００μｍｏｌ／Ｌ Ｐｒｏｂｕｃｏｌ对新生牛血清（ＮＣＳ）和过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）促ＳＭＣＳ增殖的抑制作用。结果：１０μｍｏｌ／Ｌ及１００μｍｏｌ／Ｌ Ｐｒｏｂｕｃｏｌ作用９６ｈ,可抑制１０％ＮＣＳ刺激的ＳＭＣＳ增殖,而１,１０及１００μｍｏｏｌ／Ｌ Ｐｒ     

乙酰水杨酸对实验性动脉粥样硬化形成过程中脂代谢的影响

雄性家兔３４只，体重１．５－２．５ｋｇ，随机分为３组喂养，正常组（１０只）饲以基础饲料，模型组（１２只）加饲胆固醇１．５ｇ．ｄ＾－１／只，预防级（１２只）加饲胆固醇１．５ｇ．ｄ＾－只及乙酰水杨酸ＡＳＡ７．５饲ｍｇｄ＾－１／ｋｇ，持续３个月。结果显示，与同模型组相比，预防组血浆ＴＣ、ＬＤＬ－Ｃ、ＡｐｏＢ水平明显下降，ＨＤＬ－Ｃ／ＴＣ升高，主动脉组织Ｃｈ、ＡｐｏＢ及肝组织Ｃｈ含量减少，主动脉粥样硬化程     

E.coli DNA 对荷瘤小鼠血清中TNF-α、NO含量的影响

２４只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠中,８只作为正常对照组,其余１６只荷瘤后,随机分为两组,Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ治疗组和ＴＥＳ对照组。荷瘤后第４ｄ予ＤＮＡ治疗组、ＴＥＳ对照组小鼠皮下注射Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ（１００μｇ／ｍｌ）或ＴＥＳ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）０．３ｍｌ／只,隔日１次,共５次,荷瘤后２１ｄ,摘眼球取血,制备血清,测定ＴＮＦ－α含量。结果显示：Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ可调节荷瘤机体的ＴＮＦ－α、ＮＯ水平,防     

C-myc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＤＮＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％（Ｐ＜０．０５）,２１．６％和１４．７％（Ｐ＜０．０１）,３６．３％和２７．２％（Ｐ＜０．０１）;对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达抑制率分别为７１．３％（Ｐ＜０．０５）,８０．７％（Ｐ＜０．０５）,９２．５％（Ｐ＜０．０１）;５０μｇ／ｍｌ反义核酸对Ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达抑制率是７９．７％,１０、２０μｇ／ｍｌ组无抑制作用。Ｃ－ｍｙｃ反义核酸能显著抑制内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖,其作用系依赖反义核酸的序列特异性和剂量依赖。     

NO在外源性自由基损伤内皮细胞中的作用

目的：探讨ＮＯ在外源性自由基损伤内皮细胞（ＥＣ）中的作用。方法：培养的家兔主动脉ＥＣ随机分为四组：１．对照组（Ｃ,ｎ＝６）：２ｍｌＰＢＳ;２．自由基损伤组（Ｘ／ＸＯ,ｎ＝６）：２ｍｌＰＢＳ中加入终浓度为１μｍｏｌ／ｍｌＸ,０．１ＩＵ／ｍｌ的ＸＯ;３．Ｌ－Ａｒｇ组：含终浓度为１０＾－３Ｍ的Ｌ－Ａｒｇ,余同２;４．ＳＮＰ组：含终浓度为１０＾－５Ｍ的ＳＮＰ,余同２。在观察Ｌ－ＮＡＭＥ对自由基损伤的作用时     

原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的起源分析

目的观察原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的活化、分布、来源和免疫表达特征.方法应用HE染色、免疫组化S-P方法观察94例肝细胞癌(HCC)和12例肝内胆管细胞癌(ICC)和10例混合型肝癌的肝干细胞情况,用5例肝硬化和4例正常肝组织为对照.结果在原发性肝癌不同病理组织类型中干细胞免疫标志均有不同程度的表达,均可观察到肝于细胞向肝癌细胞的转化,以混合型肝细胞癌中肝于细胞免疫表型表达率最高(P＜0.05).结论不同病理组织类型的肝癌组织中均存在不同分化状态和不同来源的肝干细胞,可能由于肝干细胞(hepatic stem cell,HSC)分化不全或分化异常所致.     

大鼠肝星状细胞的简易分离法

目的在肝脏二步酶灌注法分离大鼠肝星状细胞的基础上,探讨一种简单易行且结果稳定的分离方法。方法采用大鼠肝脏二步酶灌注法对成年大鼠的肝脏进行消化,经密度梯度离心去杂质后得到肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活率,结蛋白(Desmin)免疫荧光鉴定肝星状细胞的纯度。结果肝星状细胞的得率为4.0×107以上,肝星状细胞纯度为96%左右,肝星状细胞存活率为(95.0±1.2)%。结论本实验采用的大鼠肝星状细胞的分离方法,结果稳定,细胞纯度较高,有利于进一步的生物学研究。     

分离、鉴定与培养大鼠肝细胞、肝星状细胞和Kupffer细胞

目的：建立稳定的同时分离原代大鼠肝细胞（HC）、肝星状细胞（HSC）和Kupffer细胞（KC）的方法,并初步评估其在体外培养的特征。方法：通过胶原酶原位灌注获得肝脏单细胞悬液,随后行等密度离心结合选择性贴壁纯化肝脏原代细胞,细胞的产量和活力经自动细胞计数仪计算出,纯度经免疫荧光、特殊染色及吞噬等实验进行鉴定。结果：大鼠原代HC产量为（21.0±8.2）×106/g肝组织,活力为92.1%±2.1%,纯度为96.5%±2.2%;原代HSC产量为（2.5±0.8）×106/g肝组织,活力为90.1%±3.8%,纯度为93.1%±1.5%;原代KC产量为（4.1±1.2）×106/g肝组织,活力为96.2%±2.7%,纯度为95.1%±1.4%。分离的HC、HSC和KC适合体外长期培养。HSC在体外培养过程中失去维生素A,逐渐向成纤维细胞表型转变。KC在体外可增殖,至14 d时仍表达CD68,具有较强的吞噬能力。结论：成功建立同时分离和培养大鼠HC、HSC和KC的方法,为进一步研究肝脏病理生理提供细胞基础。     

正常大鼠肝脏祖细胞的分离和培养

目的探讨正常大鼠肝脏祖细胞的分离和体外培养方法。方法选择正常Wistar大鼠,以CD90．1为标志物,通过免疫磁珠法分离正常肝脏内的祖细胞。对祖细胞进行体外培养,并诱导分化。结果CD90．1阳性细胞占肝脏非实质细胞的（0．32±0．03）％,流式细胞仪分析显示CD90．1阳性细胞占分离细胞的（98．26±1．37）％。刚分离的CD90．1阳性细胞中,CK-19表达呈强阳性,HNF-4a表达呈阴性;培养8周后,CK-19表达呈阴性,HNF-4a表达呈阳性。结论正常大鼠肝脏内存在祖细胞,可将其诱导分化为肝细胞。     

一种改进的分离纯化人肝脏星形细胞的方法

目的：改进传统的分离纯化人肝脏星形细胞（HSCs）的方法。方法：在传统的分离人HSCs方法的基础上，省略链霉蛋白酶消化，仅用Ⅳ型胶原酶消化，采用低速离心去除肝脏实质细胞，将获得的肝脏非实质细胞进行两次换液及传1代培养，观察培养过程中细胞形态及蛋白标志物的改变。结果：经传1代培养24h后，所分离得到的人HSCs纯度接近100％。结论：所改进的分离人HSCs的方法具有操作简便，收获细胞纯度高的特点。     

甲基阿魏酸对PDGF—BB刺激的肝星状细胞增殖的影响

目的观测甲基阿魏酸(meth-ferulic acid,MFA)对PDGF-BB刺激的肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响。方法采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测MFA对HSC-T6增殖的影响并计算抑制率。结果 MFA可以抑制HSC的增殖,呈现一定的剂量依赖性。结论 MFA能抑制PDGF-BB刺激HSC的增殖作用从而减轻肝纤维化。     

大鼠肝星状细胞的分离、培养与鉴定

目的:改进大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离质量。方法:取成年雄性Wistar大鼠,用链蛋白酶、胶原酶体内门静脉灌注消化大鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:肝星状细胞得率为2.8×107/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。Desmin阳性细胞原代培养达90%以上,传代培养达95%以上。结论:改良大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,有利于原代大鼠肝星状细胞的生物学研究。     

小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究

目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,检测HPCs在小鼠脾脏内分化和移植细胞的功能及其在脾脏组织中的整合情况,探讨肝细胞合适的替换治疗细胞来源.方法体外培养ESC并制备拟胚体(EBs),体外诱导EBs 18 d后得到HPCs,然后用Hochest 3342荧光标记HPCs并制备成6.0×107/ml细胞悬液.移植受体小鼠用2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理,移植前受体鼠经过7 Gy 60 Coγ全身辐照和50%肝脏切除,造成小鼠体内对肝细胞的极大需求;然后将0.1 ml含6.0×106 HPCs细胞悬液经尾静脉注射移植入脾脏,细胞移植4周后,检测移植细胞在小鼠脾脏整合分化情况.结果体外培养ESC并制备出EBs,EBs经体外诱导为HPCs,并将HPCs移植到小鼠脾脏,4周后观察到移植细胞能够嵌合到受体脾脏组织,在脾脏组织中未形成畸胎瘤,并且移植细胞能表达肝细胞较特异标志物白蛋白、CK19和糖原PAS染色呈阳性反应.结论本实验建立一种将体外ESC诱导的HPCs移植并整合到脾脏的细胞移植技术,为研究肝细胞分化的分子机制和肝病的细胞替换治疗提供基础.     

Mouse A6-positive Hepatic Oval Cells Derived from Embryonic Stem Cells简

Summary： Oval cells have a potential to differentiate into a variety of cell lineages including hepatocytes and biliary epithelia. Several models have been established to activate the oval cells by incorporating a variety of toxins and carcinogens, alone or combined with surgical treatment. Those models are obviously not suitable for the study on human hepatic oval cells. It is necessary to establish a new and efficient model to study the human hepatic oval cells. In this study, the hepatocyte growth factor（HGF） and epidermal growth factor（EGF） were used to induce differentiation of mouse embryonic stem（ES） cells into hepatic oval cells. We first confirmed that hepatic oval cells derived from ES cells, which are bipotential, do exist during the course of mouse ES cells＇ differentiation into hepatic parenchymal cells. RT-PCR and transmission electron microscopy were applied in this study. The ratio of Sca-1＋/CD34＋ cells sorted by FACS in the induction group was increased from day 4 and reached the maximum on the day 8, whereas that in the control group remained at a low level. The differentiation ratio of Sca-1＋/CD34＋ cells in the induction group was significantly higher than that in the control group. About 92.48% of the sorted Sca-1＋/CD34＋ cells on the day 8 were A6 positive. Highly purified A6＋/Sca-1＋/CD34＋ hepatic oval cells derived from ES cells could be obtained by FACS. The differentiation ratio of hepatic oval cells in the induction group（up to 4.46%） was significantly higher than that in the control group. The number of hepatic oval cells could be increased significantly by HGF and EGF. The study also examined the ultrastructures of ES-derived hepatic oval cells＇ membrane surface by atomic force microscopy. The ES-derived hepatic oval cells cultured and sorted by our protocols may be available for the future clinical application.