朝鲜淫羊藿酸性多糖的理化特性及对HepG2细胞脂质堆积的改善作用＊

目的 对比研究朝鲜淫羊藿酸性多糖酯化还原前后的理化特性，并探讨其改善油酸诱导的肝癌HepG2细胞脂质堆积活性的差异。方法 采用高效凝胶渗透色谱法测定朝鲜淫羊藿酸性多糖（EFPA）的均一性和分子量，高效液相色谱法测定EFPA和酯化还原后朝鲜淫羊藿酸性多糖（EFPA-R）的单糖组成；采用油酸（OA）处理HepG2细胞诱导建立脂质蓄积模型，不同浓度EFPA与EFPA-R（10、30、100、300 μg·mL^-1）分别和OA共同作用于细胞24 h，采用CCK-8试剂盒测定细胞存活率，油红O染色观察细胞内脂滴蓄积情况，并采用试剂盒测定细胞内总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量。结果 EFPA为成分均一的多糖组分，分子量为125.8 kDa，由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和阿拉伯糖组成，摩尔比为1.7∶7.4∶1.4∶1.8∶1.0，葡萄糖占比最大，EFPA-R由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为0.8∶10.6∶2.1∶1.0；在10-300 μg·mL^-1范围内，EFPA和EFPA-R对HepG2细胞的抑制作用较弱，作为给药浓度；与空白组相比，模型组细胞中TC、TG含量显著升高（P < 0.01），细胞内红色脂滴显著增多，与模型组相比，EFPA可显著降低细胞中TC、TG含量（P < 0.01），明显减少细胞内红色脂滴（P < 0.05或P < 0.01），EFPA-R干预后细胞则无明显变化。结论 EFPA可明显改善HepG2细胞脂质堆积情况，且呈现剂量依赖性，而半乳糖醛酸（GalA）的存在可能是其抑制HepG2细胞脂质蓄积的关键因素。     

淫羊藿（苷）对男性生殖系统的作用和机制

淫羊藿是一种常用的中药材,淫羊藿苷是从淫羊藿中提取的一种黄酮类化合物,也是淫羊藿中最主要的活性物质。研究发现,淫羊藿苷具有促进成骨细胞的生成和活化、调节免疫、抗衰老和抗炎等多种功能。临床上淫羊藿（苷）用于治疗生殖系统、骨关节系统、呼吸系统、神经系统、心血管系统和免疫系统等多种疾病。淫羊藿（苷）对男性生殖系统的作用及机制主要包括具有雄性激素样作用,促进睾内睾酮的合成和分泌。淫羊藿（苷）通过改善精子发生的微环境、增强睾丸抗氧化作用促进精子生成,增加精子密度,改善精子活力,减缓生殖衰退。此外,淫羊藿（苷）可促进阴茎勃起,治疗勃起功能障碍及早泄。     

基于UPLC-Q/TOF-MS分析淫羊藿炮制前后黄酮组分的变化规律

目的基于UPLC-Q/TOF-MS技术建立淫羊藿炮制前后指纹图谱,对其全成分进行分析并找出标志性化学成分,以明确淫羊藿炮制前后黄酮组分的变化规律。方法采用UPLC-Q/TOF-MS技术,在正离子模式下采集淫羊藿生品及炮制品样品数据,并在此基础上根据正交-偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)整体探究9个不同产地、批次的淫羊藿炮制前后化学成分的差异。结果从淫羊藿生品及炮制品中寻找并鉴定出9个标志性化学成分,即8-乙烯-山柰酚、淫羊藿素、淫羊藿次苷I、淫羊藿素-3-O-葡萄糖苷、异戊醇基箭藿苷B、1,3-异戊二烯基朝藿定C、1,3-异戊二烯基-箭藿苷B-7-O-葡萄糖醛酸、3-O-(4-乙酰氧基)鼠李糖-2-O-(间二乙酰氧基)葡萄糖-淫羊藿苷及其同分异构体。结论淫羊藿炮制后黄酮组分结构发生变化,次级糖苷增加,多级糖苷减少,淫羊藿黄酮组分总体向低糖苷组分转化,进一步阐明了淫羊藿加热炮制后黄酮组分的变化规律。     

大孔吸附树脂分离纯化淫羊藿EF5黄酮

目的：采用HPLC法和UV法监测AB-8大孔吸附树脂分离纯化以淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和宝藿苷I这五种黄酮为主要成分的淫羊藿EF5黄酮并筛选出最佳分离纯化工艺参数。方法：采用UV法,以淫羊藿总黄酮洗脱率为指标,考察树脂对淫羊藿总黄酮的吸附容量、解吸附率、吸附动力学,以确定树脂分离纯化淫羊藿EF5黄酮的最佳吸附性能;采用HPLC法,以淫羊藿EF5黄酮中五种黄酮单体的洗脱率为指标,考察洗脱液浓度和洗脱液用量等参数,确定淫羊藿EF5黄酮的最佳洗脱参数。结果：AB-8大孔吸附树脂对淫羊藿总黄酮的吸附容量以湿树脂计为（58.37±2.36）mg·g-1,解吸附率为（86.77±2.32）%,最佳吸附时间为180min,最佳洗脱液为60%乙醇,最佳洗脱液用量为5BV,纯化后真空干燥所得棕褐色淫羊藿EF5黄酮粉末中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷I的含量分别为3.51%、4.87%、1.22%、33.05%、1.36%,淫羊藿EF5黄酮纯度为44%。结论：AB-8大孔吸附树脂分离纯化得到的淫羊藿EF5黄酮的纯度较高,适合工业生产。     

正交试验法优选淫羊藿-川芎药对的配伍提取工艺

该研究采用L₉(3⁴)正交试验法,考察溶剂倍数、提取时间、提取次数、醇浓度等因素的影响,以淫羊藿苷,阿魏酸,朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,宝藿苷I,藁本内酯的转移率为评价指标,采用HPLC多波长切换梯度洗脱技术和多指标综合加权评分法(权重系数为0.47:0.16:0.07:0.07:0.08:0.06:0.09),以SPSS 16.0软件分析,优选淫羊藿-川芎药对的最佳提取工艺为饮片浸泡1 h,以12倍量50%乙醇回流提取60 min.验证试验表明该工艺稳定可行,为淫羊藿-川芎的配伍及相关制剂研究提供了实验依据.     

黔产粗毛淫羊藿与黔岭淫羊藿总黄酮对2型糖尿病小鼠IR相关因子的影响

目的:研究黔产粗毛淫羊藿与黔岭淫羊藿中总黄酮(TFE)对四氧嘧啶(ALX)诱发2型糖尿病模型小鼠胰岛素抵抗(IR)相关因子的影响。方法:雄性小鼠100只,随机取10只为正常组,喂养基础饲料;其余的采用高脂饲料喂养小鼠6周,单次ip 2%ALX(200 mg·kg-1),建立2型糖尿病小鼠模型。将糖尿病模型小鼠随机分为6组,每组10只,分别为模型组,二甲双胍(150 mg·kg-1)组,两种TFE分别按剂量100,50 mg·kg-1分组,ig给药14 d。于末次给药后取血,检测小鼠血清胰岛素(FINS)、C肽水平;检测小鼠空腹血糖(FBG),注射胰岛素(Ins)40 min后血糖(BG);计算胰岛素耐量(ITT),胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰腺指数;观察小鼠胰腺形态学改变。结果:与正常组比较,模型组小鼠血糖升高非常显著(P0.01),空腹血清中C肽,FINS有明显增加(P0.05),胰腺组织损伤极为严重(P0.01),胰腺指数降低非常显著(P0.01)。与模型组相比,两种淫羊藿TFE均能够较明显地改善模型小鼠ITT(P0.05),降低模型小鼠血清C肽、FINS含量及HOMA-IR(P0.05),提高模型小鼠的胰腺指数(P0.05),明显地修复模型小鼠的胰腺组织损伤(P0.05)。两种TFE同剂量组相比,以粗毛淫羊藿TFE作用较为显著(P0.05,P0.01)。结论:两种黔产淫羊藿TFE对ALX诱生的2型糖尿病模型小鼠能增加胰岛素敏感性,较明显地改善模型小鼠胰岛素抵抗相关因子,保护受损的胰腺组织。以粗毛淫羊藿TFE作用较为明显,这可能与粗毛淫羊藿TFE中淫羊藿苷(ICA)含量高有较大关系。     

HPLC法测定不同产地淫羊藿中7种主要黄酮类成分的含量

目的 采用HPLC法测定不同产地淫羊藿药材中7种主要黄酮类成分的含量。 方法 色谱柱为SHISEIDO MG-C18柱 (3.0 mm×100 mm, 3.0 μm);流动相为乙腈(A)和0.1％的甲酸水溶液(B),梯度洗脱,A相含量随时间的变化：25%(0～10 min),25%～40%(10～12 min),40%～45% (12～22 min), 45%～75% (22～25 min), 75%(25～30min);流速0.6 mL/min;检测波长270 nm;柱温25 ℃;进样量5 μL。淫羊藿药材以70%乙醇超声提取。 结果 7种黄酮类成分朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、脱水淫羊藿素在30 min内基线分离。方法学验证表明,线性关系良好(r＝0.9999),日内日间精密度RSD%均小于2.0%,回收率在98%～102%之间,稳定性和重复性RSD%也均小于2.0%,符合方法学要求。测定了对照药材及辽宁、甘肃、湖北3个产地淫羊藿中7种黄酮类成分的含量。　结论 该方法快速简便,可为淫羊藿药材的质量控制提供依据,也为进一步开展淫羊藿中黄酮类成分的药动学及组织分布研究奠定了良好的基础。     

Box-Behnken试验设计优选淫羊藿饮片中淫羊藿苷及总黄酮提取工艺

摘 要 目的： 建立淫羊藿饮片醇提生产工艺。方法: 采用Box Behnken试验设计结合效应面法对各工艺参数进行优选,HPLC色谱法和紫外可见分光光度法联合定量评价。结果: 淫羊藿生产最佳提取工艺为：加入15倍量70%乙醇,提取150 min。结论: Box Behnken试验设计适合对因素的水平范围进行合理筛选,该工艺稳定,可行性强。     

不同方法炮制对巫山淫羊藿中主要成分朝藿定C和淫羊藿苷的影响

目的:研究不同方法炮制对巫山淫羊藿中主要成分朝藿定C及淫羊藿苷的影响。方法:采用RP-HPLC法,使用Shim-pack VP-ODS(5μm,150 mm×4.6 mm)色谱柱,以乙腈-水(25∶75)流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长270 nm,柱温30℃,比较不同炮制品中朝藿定C及淫羊藿苷含量的变化。结果:巫山淫羊藿不同炮制品中活性成分淫羊藿苷含量均有较大程度的上升;而朝藿定C变化则比较复杂,除羊脂油炙巫山淫羊藿中朝藿定C含量有较大的下降外,其余均有较小程度的上升。结论:加热炮制可能促使巫山淫羊藿中的其他成分分解或转化为淫羊藿苷;羊脂油炙巫山淫羊藿中朝藿定C含量有较大的下降,提示朝藿定C可能不是淫羊藿中的助阳成分;不同方法炮制对巫山淫羊藿主要成分影响较大,提示巫山淫羊藿在临床应用时必须选择合适的炮制方法。