朝鲜淫羊藿酸性多糖的理化特性及对HepG2细胞脂质堆积的改善作用＊

目的 对比研究朝鲜淫羊藿酸性多糖酯化还原前后的理化特性，并探讨其改善油酸诱导的肝癌HepG2细胞脂质堆积活性的差异。方法 采用高效凝胶渗透色谱法测定朝鲜淫羊藿酸性多糖（EFPA）的均一性和分子量，高效液相色谱法测定EFPA和酯化还原后朝鲜淫羊藿酸性多糖（EFPA-R）的单糖组成；采用油酸（OA）处理HepG2细胞诱导建立脂质蓄积模型，不同浓度EFPA与EFPA-R（10、30、100、300 μg·mL^-1）分别和OA共同作用于细胞24 h，采用CCK-8试剂盒测定细胞存活率，油红O染色观察细胞内脂滴蓄积情况，并采用试剂盒测定细胞内总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量。结果 EFPA为成分均一的多糖组分，分子量为125.8 kDa，由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和阿拉伯糖组成，摩尔比为1.7∶7.4∶1.4∶1.8∶1.0，葡萄糖占比最大，EFPA-R由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为0.8∶10.6∶2.1∶1.0；在10-300 μg·mL^-1范围内，EFPA和EFPA-R对HepG2细胞的抑制作用较弱，作为给药浓度；与空白组相比，模型组细胞中TC、TG含量显著升高（P < 0.01），细胞内红色脂滴显著增多，与模型组相比，EFPA可显著降低细胞中TC、TG含量（P < 0.01），明显减少细胞内红色脂滴（P < 0.05或P < 0.01），EFPA-R干预后细胞则无明显变化。结论 EFPA可明显改善HepG2细胞脂质堆积情况，且呈现剂量依赖性，而半乳糖醛酸（GalA）的存在可能是其抑制HepG2细胞脂质蓄积的关键因素。     

微小RNA-30a-5p调控喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的　探讨miR-30a-5p对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法 用实时荧光定量PCR检测喉癌及癌旁组织中miR-30a-5p的表达；将Hep-2细胞分为NC组（转染miR-30a-5p mimics阴性对照）、miR-30a-5p组（转染miR-30a-5p mimics）、anti-NC组（转染miR-30a-5p inhibitor阴性对照）和anti-30a-5p组（转染miR-30a-5p inhibitor），MTT实验、平板克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI 双染实验分别检测细胞增殖、克隆形成和细胞凋亡情况。双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a-5p和SOX9的靶向关系。结果　与癌旁组织表达量（1.00±0.10）相比，喉癌组织中miR-30a-5p的表达水平（0.37±0.03）显著降低（P <0.05）。与NC组相比，miR-30a-5p组细胞活性（48小时：0.42±0.03 vs 0.58±0.04）降低，细胞克隆数（75.36±6.85 vs 136.25±10.50）降低，细胞凋亡率[（23.86±2.21）% vs（9.95±1.16）%]升高（P <0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示，转染SOX9-WT质粒的Hep-2细胞荧光素酶活性明显降低（P <0.05），而转染SOX9-MUT质粒的Hep-2细胞荧光素酶活性无显著变化。anti-miR-30a-5p组对He p -2细胞的作用与miR-30 a -5p组相反。结论  miR-30a-5p可能通过靶向下调SOX9抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖并促进细胞凋亡。     

人胰岛素样生长因子在pET-DsbA载体中的克隆及表达

目的 通过重组技术,对胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ基因进行缺失、突变以获得最有利于高水平表达的IGF-Ⅰ cDNA.构建原核表达载体,并进行表达,以获得能够高水平表达高活性产物的基因工程菌珠.方法 提取人肝脏组织总RNA,RT-PCR后琼脂糖电泳初步鉴定产物.将cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS,酶切鉴定后,对IGF-Ⅰ基因进行序列分析.采用PCR法从克隆质粒中扩增IGF-Ⅰ片段,亚克隆至pET-DsbA原核表达载体,酶切鉴定,并进行序列测定.转化到大肠杆菌BL21(DE3)PLysS中,IPTG诱导表达,聚丙稀酰胺凝胶电泳、Western Blot分析目的蛋白.结果 成功构建原核表达载体pET-DsbA-IGF-Ⅰ,测序结果与预期序列完全一致,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达出IGF-Ⅰ融合蛋白.结论 IGF-Ⅰ融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3) PLysS中的表达,对进一步研究IGF-Ⅰ的功能及开发其生物制品具有重要意义.     

细菌质粒谱分析技术

细菌质粒是一种染色体外具有自主复制能力的环状DNA 分子,其分子量约为1～300kb。自然状态下完整的质粒分子是双链超螺旋构型,它并非细菌生存繁殖所必需.质粒能介导细菌的抗药性及许多其他生物学特性如细菌毒素,降解复杂有机化合物、产生限制性内切酶和修饰酶等。多数细菌含有大小不一、     

硬膜下积脓的临床特点及治疗分析

目的探讨硬膜下积脓(Subdural empyema,SDE)的临床特点,为临床治疗提供借鉴。方法回顾性分析本科保守治疗的硬膜下积脓病例1例,并对已有文献报道进行综述,总结其临床、影像学表现及治疗。结果文献报道共50例患者,48例外科手术治疗,2例内科保守治疗。SDE起病急,主要临床表现为大脑镰综合征、抽搐,意识障碍。头磁共振表现:大脑镰及小脑幕下积脓呈长T1,长T2信号,FLAIR呈高信号,DWI呈高信号,积脓周围脑膜强化。治疗上主要以外科手术为主,少数病例通过合理的抗菌药物治疗也可好转。结论镰幕硬膜下积脓的临床特点是大脑镰综合征和镰幕下积脓;以外科治疗为主,内科保守治疗也是一种可行的治疗方法。     

改良的纸片表型筛选法用于AmpC酶的检测

目的 建立并评价一种检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶的新方法.方法 采用改良的纸片表型筛选法,以头孢西丁三维试验和多重PCR法作为对照,对临床分离的耐第三代头孢菌素的164株大肠埃希菌和40株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶的检测.结果 164株大肠埃希菌中,改良的纸片表型筛选法检出8株产AmpC酶的阳性菌株（8/164,4.88%）,其中有2株同时产ESBLs酶;40株肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶菌株,但检出2株（2/40,5.00%）诱导产AmpC酶菌株.头孢西丁三维试验在大肠埃希菌中检出AmpC酶阳性菌株8株（8/164,4.88%）,在肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶株.多重PCR法检出大肠埃希菌AmpC酶耐药基因阳性9株（9/164,5.49%）,肺炎克雷伯菌阳性2株（2/40,5.00%）.结论 改良的纸片表型筛选法可用于检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和诱导产酶株,并可同时检测产ESBLs酶菌株,该法操作简便、结果可靠、无需特殊仪器,可在普通临床实验室应用.