逼尿肌相关蛋白在慢性前列腺炎大鼠模型中的表达及意义

目的：采用17β-雌二醇联合去势建立大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型,检测膀胱逼尿肌蛋白在慢性前列腺炎大鼠膀胱的表达。方法取2月龄 SD 雄性大鼠60只随机分为6组,每组10只,即：空白对照组、生理盐水组、假手术组、单纯17β-雌二醇组、单纯去势组、17β-雌二醇联合去势组。HE 染色判定大鼠慢性前列腺炎模型建造成功后,采用 SP 免疫组化法、Western blot 检测6组大鼠膀胱组织肌动蛋白(α-actin)、肌球蛋白(MLC 2)及高分子量钙调素结合蛋白(h-cad)表达的差异。结果免疫组化结果显示17β-雌二醇联合去势组中α-actin、MLC 2、h-cad 蛋白表达增多,Western blot 显示α-actin 在各组的表达,与空白对照组相比,生理盐水组、假手术组、单纯17β-雌二醇组、单纯去势组联合去势组差异有统计学意义。 MLC 2、h-cad 在各组的表达与空白对照组相比,生理盐水组、假手术组差异无统计学意义,单纯17β-雌二醇组、单纯去势组、联合去势组差异有统计学意义。结论α-actin、MLC 2、h-cad 表达变化可能参与慢性前列腺炎排尿相关症状的发病。     

细胞核CaMK和Calcineurin参与大鼠心肌肥厚的发生

目的：研究大鼠心肌肥厚时，钙依赖的蛋白激酶和蛋白磷酸酶在心肌细胞膜、细胞浆和细胞核的分布规律，以探讨核钙信号与核反应在心肌肥厚发生过程中的病理生理意义。方法：制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型、差速离心和密度梯度离心提纯心肌细胞核，同位素32P掺入法测激酶活性，无机磷生成显色法测定蛋白磷酸酶活性。结果：腹主动脉缩窄术后4周大鼠心肌显著肥厚，伴有明显的血液动力学异常。与正常对照组相比较，腹主动脉缩窄心肌肥厚组心肌细胞核钙调素蛋白激酶（CaMK）活性增加1．011倍（p〈0．001），膜升高40．16％（p〈0．001），胞浆不变（p〉0．05）；心肌细胞核钙调神经磷酸酶（Calcineurin）活性增加43．57％（p〈0．05），膜和胞浆增加无显著性（P〉0．05）。正常组和腹主动脉缩窄心肌肥厚组心肌细胞CaMK和Calcineurin活性分布为核〉膜〉胞浆（p〈0．01）。结论：腹主动脉缩窄心肌肥厚时核内钙依赖的CaMK和Calcineurin活性增加，提示压力超负荷时细胞核内钙调节的蛋白磷酸化和去磷酸化水平增高，可能在介导心肌肥厚的发生中起重要作用。     

钙拮抗剂治疗高血压病患者钙调素水平的变化

目的：观察在用钙拮抗剂硝苯地平治疗高血压病的过程中，细胞内外钙调素水平的改变。方法：将７４例高血压病患者分为Ａ组：未使用任何类型的钙拮抗剂；Ｂ组：规则使用硝苯地平，治疗时间≤１个月；Ｃ组：规则使用硝苯地平，治疗时间＞３个月。用反转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）法测定淋巴细胞内钙调素基因的信使核糖核酸（ＲＮＡ）转录水平。另外选择８２例高血压病患者分为Ａ′组、Ｂ′组、Ｃ′组（标准同前），用放射免疫测定法（ＲＩＡ）测定细胞外（即血清）钙调素浓度。结果：服用硝苯地平＞３个月时，高血压病患者淋巴细胞内钙调素基因信使ＲＮＡ的转录水平显著降低（Ｐ＜０．０１），而治疗时间在≤１个月者，钙调素基因的转录水平尚无明显变化（Ｐ＞０．０５）。服用硝苯地平≤１个月者，血清钙调素浓度下降，而＞３个月者则相对增高，但两组间无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。结论：长期服用硝苯地平的高血压病患者，淋巴细胞内钙调素基因信使ＲＮＡ表达受到抑制，但血清中钙调素水平无显著变化。     

异丙酚对抑郁大鼠电休克处理后海马CaMKⅡα活性的影响

目的 探讨异丙酚对抑郁大鼠电休克处理后海马钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)活性的影响.方法 健康成年雄性SPF级SD大鼠,体重180～220 g,2～3月龄,采用慢性轻度不可预见性应激法建立抑郁模型.取模型制备成功的大鼠40只,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):抑郁组(D组)腹腔注射生理盐水8 ml/kg;单纯异丙酚组(P组)腹腔注射异丙酚80mg/kg;单纯电休克组(E组)腹腔注射生理盐水8ml/kg后实施电休克处理;异丙酚联合电休克(DPE)组腹腔注射异丙酚80 mg/kg,待翻正反射消失后行电休克处理.以上处理每天1次,连续7d.于处理前1d和处理后1d采用糖水偏好实验评价抑郁状态.于处理前1d和处理后3d采用Morris水迷宫实验检测学习记忆能力.于Morris水迷宫实验完成后1d,采用免疫组织化学法检测大鼠海马磷酸化CaMKⅡα(pCaMKⅡα)及CaMKⅡα的表达,计算pCaMKⅡα/CaMKⅡα比.结果 与D组比较,E组、DPE组糖水偏好比升高,E组逃避潜伏期延长,空间探索时间缩短,海马CaMKⅡα和pCaMKⅡα表达下调,pCaMKⅡα/CaMKⅡα比降低,DPE组逃避潜伏期缩短,空间探索时间延长,pCaMKⅡα表达上调(P＜0.05);与E组比较,DPE组逃避潜伏期缩短,空间探索时间延长,CaMKⅡα和pCaMKⅡα表达上调,pCaMKⅡα/CaMKⅡα比升高(P＜0.05).结论 异丙酚减轻抑郁大鼠电休克处理后认知功能损害的机制可能与增强海马CaMKⅡα的活性有关.     

左卡尼汀通过抑制钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号通路抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡

 目的： 观察左卡尼汀对过氧化氢（H2O2）诱导的大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法：利用200 μmol/L H2O2刺激12 h,建立体外原代培养新生乳鼠心肌细胞凋亡模型。Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N, N, N′, N′-四乙酸(BAPTA)、钙调素依赖蛋白激酶II (CaMKII)特异性抑制剂KN93及左卡尼汀分别于加入H2O2前30 min或1 h加入,以检测这3种药物对H2O2刺激下心肌细胞活力、细胞凋亡、细胞内静息钙浓度（［Ca2+］i）及磷酸化CaMKII (p-CaMKII)表达的影响。利用MTT比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;利用激光共聚焦扫描检测［Ca2+］i;蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达。结果：模型组经200 μmol/L H2O2作用12 h后,细胞活力显著下降,细胞凋亡率显著增加。BAPTA、KN93及左卡尼汀预处理显著抑制上述细胞损伤。进一步研究发现,H2O2 诱导的 ［Ca2+］i水平升高、cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达增加均可被上述3种药物不同程度地抑制。结论：左卡尼汀可抑制H2O2所致的心肌细胞凋亡,该心肌保护作用可能与其抑制Ca2+/CaMKⅡ信号通路有关。     

Akt-Kv4.3-CaMKⅡ在有氧运动抑制压力负荷小鼠 心肌肥厚中的作用及其机制

目的 探讨丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）-离子通道Kv4.3（Kv4.3）-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）信号 通路在有氧运动抑制压力负荷小鼠心肌肥厚中的作用及其机制。方法 60只实验小鼠均分为5组：假手术（SHAM） 组、主动脉缩窄手术（TAC）组、假手术+有氧运动（SHAM+E）组、主动脉缩窄术+有氧运动（TAC+E）组,主动脉缩窄术+ 有氧运动+ Akt抑制剂Perifosine（TAC+E+Peri）组。高分辨率小动物超声系统评价小鼠心功能及肥厚程度,麦胚凝集 素（WGA）染色检测心肌细胞横截面积;荧光定量PCR（RT-qPCR）检测ANP表达,Western blot检测蛋白心房钠尿肽 （ANP）、p-Akt、Kv4.3、p-CaMKⅡ表达水平。结果 与SHAM组相比,TAC促进心肌肥厚,恶化心功能（P＜0.01）。给 予有氧运动训练后,TAC+E组较TAC组小鼠心功能改善,心肌肥厚程度减轻（P＜0.01）。同时Western blot检测显示, TAC组较SHAM组p-Akt、Kv4.3表达降低,p-CaMKⅡ上调（P＜0.01）;TAC+E组p-Akt和Kv4.3表达较TAC小鼠增加, p-CaMKⅡ下调（P＜0.01）。而给予Akt抑制剂Perifosine后,相比于TAC+E组,TAC+E+Peri组心功能恶化、心肌肥厚 程度和ANP表达增加,心肌细胞横截面积增大,同时伴随Kv4.3表达降低、p-CaMKⅡ增高（P＜0.01）。结论 有氧运 动训练能够通过调节Akt-Kv4.3-CaMKⅡ信号通路抑制压力负荷心肌肥厚。     

钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ在心肌肥厚和心力衰竭中的作用

钙是心肌细胞中重要的第二信使。慢性或持久的Ca^2＋浓度变化可导致某些基因的激活。称为兴奋一转录耦联。Ca^2＋浓度的改变能通过多种钙调节的酶来传导不同信号，其中钙，钙调素依赖蛋白激酶家族（Ca^2＋／CaMK）中的钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ发挥重要作用。     

丙泊酚或依托咪酯对大鼠空间学习记忆能力的影响

目的 观察丙泊酚或依托咪酯对大鼠空间学习记忆能力的影响.方法 雄性SD大鼠45只,4周龄,随机均分为对照组、丙泊酚组和依托咪酯组.Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆能力,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马组织中神经球蛋白(Ngb)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA的表达.结果 与第1天比较,三组大鼠第2、3、4、5天逃避潜伏期均逐渐缩短(P＜0.05)；与对照组比较,丙泊酚组和依托咪酯组第4、5天逃避潜伏期延长(P＜0.05).各组大鼠Ngb的表达量差异无统计学意义,而丙泊酚组和依托咪酯组bFGF和CaMKⅡ的表达量明显少于对照组(P＜0.05).结论 丙泊酚或依托咪酯可使幼年大鼠的空间学习记忆能力降低,其机制可能与降低海马bFGF和CaMKⅡ的表达有关.     

钙调素自身抗体的临床研究

建立了测定钙调素（ＣａＭ）自身抗体（抗ＣａＭ）的间接ＥＬＩＳＡ法，发现全身性红斑狼疮（ＳＬＥ）、类风湿性关节炎（ＲＡ）、甲状腺功能亢进、桥本甲状腺炎（ＨＴ）、慢性活动性乙型肝炎（ＣＡＨ）患者血清抗ＣａＭ水平与检出率均显著高于正常对照及冠心病、风湿热等其他内科疾病患者。在甲亢与ＨＴ患者中，抗ＣａＭ与抗甲状腺球蛋白（抗ＴＧ）、抗甲状腺过氧化物酶（抗ＴＰＯ）抗体不相关，而在ＳＬＥ与ＲＡ患者，抗ＣａＭ与抗核抗体（ＡＮＡ）有同步性。抗ＣａＭ的出现无疾病特异性，可能在自身免疫病患者的免疫功能紊乱中起一定作用。