炎症性肠病患者混合样本策略的蛋白质组学研究

目的 应用混合样本策略的蛋白质组学方法在炎症性肠病患者血清中寻找与疾病相关的蛋白质.方法 选取2007年3月至2008年6月中山大学附属第六医院收治的炎症性肠病患者以及健康受试者血清蛋白样本各8例,混合样本后用不同的CyDye荧光染料标记后进行胶内双向差异凝胶电泳,并对获得的图谱进行分析及对差异蛋白质进行基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定和生物学信息分析.应用DeCyder V6.0软件中的胶内差异分析及生物学差异分析软件进行统计分析.组间比较采用t检验.结果 成功建立炎症性肠病和健康受试者的胶内荧光差异染色双向凝胶图谱,发现了炎症性肠病患者中存在56个表达异常蛋白质点,质谱分析和数据库检索筛选后共鉴定出30个点有意义,包括结合珠蛋白、补体B因子、载脂蛋白A-Ⅱ、K-ras基因等.结论 采取混合样本策略、双向差异凝胶电泳、MALDI-TOF-MS技术路线的蛋白质组学方法能很好显示炎症性肠病患者与健康受试者血清蛋白质表达差异,所鉴定的蛋白质可为研究炎症性肠病的生物学行为提供新的分子标志物.     

SM22蛋白在结肠癌组织中的表达

目的 通过比较结肠腺癌与正常结肠黏膜的蛋白质组表达差异,寻找结肠腺痛相关的蛋白质.方法 运用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例正常结肠黏膜组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析,并对结肠癌组织中表达下调的蛋白SM22进行Western blot验证.结果 成功建立结肠腺癌和正常结肠黏膜的双向凝胶电泳图谱,结肠腺癌和正常黏膜组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和3122,其中表达差异超过2倍的斑点共有22个,质谱分析和数据库检索共鉴定出14种蛋白质,包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase、SM22等.从功能分析,这些差异蛋白与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关;SM22在结肠癌组织中的表达水平Western blot结果与电泳结果一致.结论 蛋白质组学能提示结肠腺癌与正常组织间的蛋白质表达差异,SM22在结肠癌组织中表达下降,可作为结肠癌组织的分子标记物.     

肾性高血压大鼠心、肾α_1肾上腺素能受体的变化

以3H-哌唑嗪为放射配基，测定肾性高血压大鼠不同药物治疗前后心肌α_1肾上腺素能受体的密度和亲和力，并观察血压。治疗前后心肌α_1受体无明显改变（P＞0．05）；治疗前肾脏α_1受体密度明显升高（P＜0.05），治疗后α_1受体恢复近正常，其改变与血压改变吻合；各组亲和力无明显变化。心肌和肾脏α_1受体可能以不同的亚型（α_1a，α_1b）为主。狭窄肾α_1受体调节可能与血压改变有关。     

反复种植失败妇女“种植窗”时期子宫内膜组织的细胞骨架蛋白质的差异表达

目的探讨体外受精-胚胎移植治疗周期中反复种植失败(RIF)和已生育正常妇女"种植窗"时期(LH+6~LH+9d)子宫内膜组织蛋白质表达的差异。方法选择RIF妇女和正常对照妇女各4名分为实验组和对照组。采用胶内差异双向电泳、(2D-DIGE)和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术鉴定子宫内膜组织的差异表达蛋白质。结果两组之间获得16个差异表达蛋白质(其中6个下调表达,10个上调表达),其中10个参与细胞骨架构成,分别是:波形蛋白、埃兹蛋白、Septin 2蛋白、radixin蛋白、纽蛋白、角蛋白8、角蛋白10、角蛋白18、角蛋白19及肌动蛋白。结论本研究结果证实"种植窗"时期RIF妇女子宫内膜组织存在多个细胞骨架蛋白质表达的异常,可能是子宫内膜细胞"质膜转换"缺陷和胚胎种植失败的重要原因。     

血液透析时药物剂量调整

1引言 透析是治疗终末期肾病的有效方法之一.它在清除肾病患者体内累积毒性产物的同时,也清除了部分药物,所以透析病人需校正药物的用量以维持有效的血药浓度.在某些情况下,透析也用于清除体内过多的药物或毒物.其中,血液透析是最常用的透析技术,它使血液在体外通过数百根具有很大面积的纤维膜,和流动相反方向的透析液进行交换,在2～4小时内便可完成清除体内代谢废物.     

利多卡因在抗心律失常时的个体化给药

利多卡因(1idocaine)是局部麻醉药，也有抗心律失常的活性，在抗心律失常药分类中属ⅠB类抗心律失常药，临床用于需要迅速控制的严重室性心律失常。利多卡因口服生物利用度低，在肝脏迅速被酰胺酶代谢，有明显的首关效应，作用时程短。因此须迅速静脉注射1～2mg／kg以求尽快起效，然后以1～4mg／min维持抗心律失常疗效。     

增生性瘢痕与正常皮肤的蛋白质组学研究

目的 比较增生性瘢痕与正常皮肤组织的蛋白质组表达差异,筛选出增生性瘢痕的特异蛋白质.方法 以中山大学附属第一医院烧伤外科2010年1月至5月8例增生性瘢痕患者的增生性瘢痕组织和3例整形外科患者正常躯干皮肤为研究对象,运用蛋白质组学技术、双向凝胶电泳对比分析增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中蛋白表达差异,选择差异蛋白点进行MALDI - TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析.结果 获得重复性较好的双向电泳荧光染色图谱,增生性瘢痕和正常皮肤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白点分别为2975和3053,对其中表达差异超过4倍的蛋白点进行质谱分析和数据库检索,共鉴定出24种蛋白质,其中上调蛋白有11种,下调蛋白有13种.结论 成功地建立增生性瘢痕的双向电泳荧光染色图谱,鉴定出增生性瘢痕组织与正常皮肤组织间的差异蛋白质表达.     

转化生长因子β1诱导肾小管上皮细胞转分化的蛋白质组学研究

目的 研究转化生长因子（TGF）β1诱导肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化（EMT）过程中相关靶蛋白的表达变化。 方法 应用比较蛋白质组学方法。用双向凝胶电泳（2-DE）对TGF-β1刺激组和对照组 NRK52E细胞总蛋白进行分离。两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定，并用RT-PCR和Western 印迹在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。 结果 鉴定出22个差异蛋白，包括与细胞骨架相关蛋白、参与物质转化和能量代谢的酶类、与蛋白翻译后修饰相关蛋白、细胞因子及其他蛋白等。应用RT-PCR验证了转胶蛋白（transgelin）、ATP合成酶α亚型、苹果酸脱氢酶、丝氨酸（半胱氨酸）蛋白酶抑制因子、泛素结合酶9（Ubc9）和表皮生长因子8在mRNA水平的表达差异，与2-DE结果一致。用Western 印迹验证了transgelin、ATP 合成酶α亚型两种蛋白的表达差异，亦与2-DE结果一致。 结论 TGF-β1刺激NRK52E细胞EMT发生过程中可诱导包括与细胞骨架相关蛋白、与翻译后修饰相关蛋白、代谢酶类及细胞因子等多种蛋白表达变化。本研究结果有助于深入理解EMT的具体分子机制及阐明肾脏疾病慢性进展的机制。     

KN-93抑制脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

[目的]探讨钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(LTP)的诱导和维持中的作用。[方法]用钨丝微电极在脊髓腰膨大部背角浅层神经元细胞外记录C-纤维诱发电位,强直刺激坐骨神经诱导背角C-纤维诱发电位的LTP。在LTP诱导前后,在暴露的脊髓表面局部给予CaMKⅡ的选择性抑制剂KN-93,观察C-纤维诱发电位的变化。[结果]50μmol/L的KN-93不影响脊髓背角C-纤维诱发电位的幅度,但可完全阻断脊髓背角LTP的诱导(n=6)。KN-93呈时间依赖性翻转脊髓背角LTP。在LTP诱导后30min,50μmol/L的KN-93对LTP的早期表达无影响(n=4),而100μmol/L的KN-93在用药后,LTP逐渐降低,于3h降至对照水平(n=6);在LTP诱导后1h脊髓局部给予100μmol/L的KN-93,7例动物中有5例LTP被抑制;但同样浓度的KN-93,在LTP诱导后3h,不能翻转业已建立的LTP(n=5),且增加KN-93的浓度至200μmol/L也不能抑制脊髓背角LTP。[结论]CaMKⅡ参与脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持,但KN-93对晚期LTP无抑制作用。