补阳还五汤对脓毒症大鼠脾细胞凋亡的实验研究

目的 通过观察脓毒症大鼠脾脏T、B淋巴细胞数量、细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化,探讨补阳还五汤对脓毒症大鼠免疫功能的影响及其作用机制.方法 按随机数字表法将180只雄性Wistar大鼠分为假手术组(30只)、模型组(50只)及补阳还五汤治疗组(50只)和防治组(50只).采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型.治疗组于术后30 min、防治组于术前3 d灌胃补阳还五汤浓缩液(含生药1 g/ml)15 ml/kg,每日1次.分别于术后6、12、24、48、96 h处死大鼠,观察各组动物脾脏形态学变化,脾T、B淋巴细胞,凋亡细胞,Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 光镜下观察CLP术后大鼠脾脏白髓逐渐萎缩,淋巴小结破坏,损伤的严重程度为模型组＞治疗组＞防治组.与假手术组比较,模型组术后各时间点CD4+T淋巴细胞、CD40 B淋巴细胞、Bcl-2蛋白表达明显降低,凋亡细胞、Bax蛋白表达明显增加,均于24 h达谷值或峰值[均为积分吸光度(A)值:CD4+T淋巴细胞:18.28±4.57比98.60±18.18;CD40 B淋巴细胞:26.96+6.26比104.87±30.97;Bcl-2蛋白表达:20.23±11.75比149.67±5.24;凋亡细胞:241.75±44.79比14.67±5.24;Bax蛋白表达:128.75±44.79比5.34±4.26,均P＜0.01];而CD8+淋巴细胞无明显变化.与模型组比较,补阳还五汤治疗组和防治组各时间点脾脏CD4+T淋巴细胞、CD40B淋巴细胞明显升高,凋亡细胞、Bax蛋白表达明显减少,而CD8+T淋巴细胞、Bcl-2蛋白表达无明显变化;防治组治疗效果优于治疗组(A值:CD4 +T淋巴细胞:94.12±15.45比72.37±8.00;CD40 B淋巴细胞:90.46±13.34比55.66±4.23;凋亡细胞:27.63±9.91比40.83±16.09;Bax蛋白表达:11.63±5.91比30.83±16.09,P＜0.05或P＜0.01);至96 h时各指标逐渐接近假手术组水平.细胞凋亡与Bax呈显著正相关(r=0.522,P=0.000),与Bcl-2呈显著负相关(r=-0.659,P=0.000).结论 补阳还五汤通过减少脾脏CD4+T淋巴细胞、B淋巴细胞凋亡,从而改善脓毒症时的免疫抑制;这可能与补阳还五汤减弱Bax对细胞凋亡的促进作用相关.     

足背动脉为蒂的逆行岛状皮瓣修复足远端皮肤缺损

目的 探讨应用以足背动脉为蒂的逆行岛状皮瓣修复足远端皮肤缺损的临床疗效.方法 以足背动脉为血管蒂,设计逆行岛状皮瓣,转移至足部远端,皮瓣面积略大于缺损面积,皮瓣经开放隧道转移至受区,皮瓣供区以中厚皮片覆盖.结果 本组患者共9例,缺损面积为3.5 cm×2.5 cm～6.0 cm x4.5 cm,术后随访3～12个月,皮瓣全部成活,修复后缺损部位功能和外形良好.结论 以足背动脉为蒂的逆行岛状皮瓣具有良好的血运,血管解剖结构恒定,是修复足远端皮肤缺损的可行方法 .     

急性一氧化碳中毒大鼠急性肺损伤的实验研究

目的制备大鼠急性一氧化碳中毒（ACOP）模型，观察肺损伤的病理学与病理生理学变化，比较氧合指数和碳氧血红蛋白（HbCO）与急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征（ALI／ARDS）的相关性。方法健康Wistar大鼠静式吸入一氧化碳（CO）1h建立ACOP模型，对照组20只，中毒组按吸入CO浓度分为轻（A组）、中（B组）、重（C组）三组，每组20只。染毒后，分别检测各组动脉血气分析、HbCO浓度。取肺组织切片，观察病理学改变，根据检查结果进行统计学分析。结果B组和C组CO中毒的ALI／ARDS发生率分别为25％和55％，均明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）；A、B、C组的动脉血HbCO均明显高于对照组（P〈0．01），而动脉血PaO2均明显低于对照组（P〈0．01）。ALI／ARDS组的动脉血HbCO（62．4±19．1）％明显高于非ALI／ARDS组（29．9±13．8）％（P〈0．01）；ALI／ARDS组的动脉血PaO2（51．3±13．1）明显低于非ALI／ARDS组（79．0±15．8）（P〈0．01）；ALI／ARDS组的动脉血A-aDO2（37．6±27．9）mmHg亦高于非ALI／ARDS组（24．2±15．7）mmHg（P〈0．05）；而ALI／ARDS组的动脉血PaCO2（43．5±15．4）与非ALI／ARDS组（41．0±6．4）比较，差异无统计学意义（P〈0．05）。HbCO与氧合指数（本文与动脉氧分压PaO2表示）两指标诊断ALI／ARDS差异有统计学意义（P〈0．05）。根据本实验数据制定诊断截断值，即：ACOP患者动脉血HbCO〉43％即可认为有ALI／ARDS的发生。结论ACOP可导致ALI／ARDS的发生与低张性缺氧；与氧合指数比较，HbCO浓度诊断ALI／ARDS更灵敏。     

深Ⅱ度烧伤愈合后Bcl-xl、Bax蛋白表达与增生性瘢痕的相关性

目的探讨Bcl-xl和Bax蛋白在深Ⅱ度烧伤愈合后不同时期增生性瘢痕中的表达特点。方法人深Ⅱ度烧伤愈合后不同时期的增生性瘢痕皮肤40例,正常皮肤组织10例。分为增生期组、减退早期组、减退晚期组、成熟期组,正常对照组。免疫组织化学染色,检测Bcl-xl和Bax蛋白的表达。结果深Ⅱ度烧伤创面愈合后,Bcl-xl和Bax蛋白主要表达于表皮基底细胞和真皮层成纤维细胞,增生期和减退早期Bcl-xl和Bax蛋白产物光密度值明显高于正常皮肤(p<0.01),减退晚期和成熟期随瘢痕成熟而逐渐递减接近正常皮肤。结论 Bcl-xl和Bax蛋白表达与深Ⅱ度烧伤创面愈合后增生性瘢痕的发生和瘢痕成熟相关。     

转化生长因子β1诱导肾小管上皮细胞转分化的蛋白质组学研究

目的 研究转化生长因子（TGF）β1诱导肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化（EMT）过程中相关靶蛋白的表达变化。 方法 应用比较蛋白质组学方法。用双向凝胶电泳（2-DE）对TGF-β1刺激组和对照组 NRK52E细胞总蛋白进行分离。两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定，并用RT-PCR和Western 印迹在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。 结果 鉴定出22个差异蛋白，包括与细胞骨架相关蛋白、参与物质转化和能量代谢的酶类、与蛋白翻译后修饰相关蛋白、细胞因子及其他蛋白等。应用RT-PCR验证了转胶蛋白（transgelin）、ATP合成酶α亚型、苹果酸脱氢酶、丝氨酸（半胱氨酸）蛋白酶抑制因子、泛素结合酶9（Ubc9）和表皮生长因子8在mRNA水平的表达差异，与2-DE结果一致。用Western 印迹验证了transgelin、ATP 合成酶α亚型两种蛋白的表达差异，亦与2-DE结果一致。 结论 TGF-β1刺激NRK52E细胞EMT发生过程中可诱导包括与细胞骨架相关蛋白、与翻译后修饰相关蛋白、代谢酶类及细胞因子等多种蛋白表达变化。本研究结果有助于深入理解EMT的具体分子机制及阐明肾脏疾病慢性进展的机制。     

Rosiglitazone down-regulates lipopolysaccharide-induced expression of CD40 and intercellular adhesion molecule 1 in rat peritoneal mesothelial cells through a NF-κB dependent mechanism

Objective To investigate the effect and mechanism by which PPARγ ligand, rosiglitasone, regulates the expression of CD40 and intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) in the rat peritoneal mesothelial cells (RPMCs) induced by lipopolysaccharide (LPS). Methods RPMCs were harvested from Sprague-Dawley rat peritoneal cavity and maintained under defined in vitro conditions. The cells were randomly divided into groups as follows: medium, LPS (5 mg/L), LPS (5 mg/L)+BAY11-7085(5 μmol/L, NF-κB inhibitor), rosiglitazone (10 μmol/L or 20 μmol/L, peroxisome proliferator-activated receptor γ activator), LPS (5 mg/L)+rosiglitazone (10 μmol/L)+GW9662 (3 μmol/L, peroxisome proliferator-aetivatcd receptor γ antagonist), and LPS (5 mg/L)+vehicle (DMSO 0.2 ml/L). The expressions of CD40 and ICAM-1 RNA in RPMCs were examined by RT-PCR after 3 hour treatment, and the protein expressions of CD40, ICAM-1, p-NF-κB p65 and p-IκBα were examined by Western blot or immunofluorescence after 24 hour treatment. Results Following treatment with LPS, both the expressions of CD40 and ICAM-1 protein in RPMCs were up-regulated significantly (P<0.05), and the phosphoralation of p65 was increased greatly (1.10±0.17 vs 0.55±0.06, P<0.05). BAY11-7085 (5 μmol/L) significantly decreased the protein expression of p-p65 (0.22±0.11 vs 1.10±0.17, P<0.01), CD40 (0.34±0.02 vs 0.50±0.06, P<0.05) and ICAM-1 (0.35±0.16 vs 0.74±0.03, P<0.05). Pretreated with rosiglitazone for 3 h then added with LPS for 1 h, the levels of p-p65, CD40 and ICAM-1 in RPMCs were significantly decreased compared with those of LPS group (0.77±0.08 vs 0.90±0.10, P相似文献   

脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 观察脓毒症大鼠脾脏T、B淋巴细胞的数量变化及细胞凋亡情况,探讨脓毒症时免疫失衡的机制.方法 健康雄性Wistar大鼠80只,按随机数字表法分为假手术组(30只)、模型组(50只).采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,于制模后6、12、24、48、96 h活杀动物取脾脏,行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察脾脏组织病理变化;采用免疫组化法检测脾脏CD4~+、CD8~+T淋巴细胞和B淋巴细胞以及Bax、Bcl-2蛋白表达;采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测脾脏细胞凋亡指数.结果 光镜下观察模型大鼠脾脏白髓逐渐萎缩,淋巴小结结构破坏.制模6、12、24、48、96 h,模型组大鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞数、B淋巴细胞数、Bcl-2蛋白表达均较假手术组明显降低(P均<0.01),CD8~+T淋巴细胞数与假手术组比较差异无统计学意义(P均>0.05),细胞凋亡指数及Bax蛋白表达均较假手术组显著增加(P均<0.01).相关分析表明:Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡指数呈负相关(r=0.659,P<0.01),而Bax蛋白表达与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.522,P<0.01).结论 脓毒症早期免疫功能处于紊乱状态,表现为脾脏CD4~+T淋巴细胞数、B淋巴细胞数减少,细胞凋亡显著增加;Bax、Bcl-2在脓毒症脾细胞凋亡中发挥了关键作用.     

血液净化联合依达拉奉治疗急性百草枯中毒的临床观察

目的:比较血液净化和血液净化联合依达拉奉治疗急性百草枯中毒的临床效果.方法:回顾分析35例急性百草枯中毒患者,按照是否接受依达拉奉治疗分为对照组和试验组.对照组17例,接受血液净化治疗;试验组18例,接受血液净化联合依达拉奉治疗.将各组的生化指标、并发症情况、预后进行比较.结果:治疗前,两组患者的生化指标差异均无显著性(P＞0.05),治疗后,试验组患者肌酐(Cr)(110.7±27.9)μmol/L、WBC(12.0±3,4)x109/L、丙氨酸氨基转移酶(ALT)(26.0±4.1)IU/L、PaO2(88.2±15.1)mmHg,其中Cr、WBC均明显低于对照组治疗后(P＜0.05);试验组发生呼吸衰竭、急性肾功能衰竭和心衰的例数分别为4、7、3例,均明显少于对照组治疗后(P＜0.05);试验组死亡患者的平均存活时间为(10.3±5.2)d、治愈率27.7%、好转率38.9%、病死率33.3%,均明显优于对照组(P＜0.05).结论:血液净化能够较快的清除毒物,依达拉奉能清除氧自由基,抑制细胞的氧化损伤,二者联合治疗能起到保护重要脏器、改善预后、降低并发症的目的,是急性百草枯中毒患者较好的治疗方法.     

不同固定剂在激光共聚焦荧光技术中的效果评价

 【目的】 探讨3种不同的固定剂在激光共聚焦免疫荧光技术中对信号表达的影响。 【方法】 对培养的NRK-52E细胞分成胞浆,胞膜及胞核抗原3组,每组用4 g/L PFA,甲醇及丙酮分别固定后,完成免疫荧光实验;原代滑膜成纤维样细胞分两组用4 g/L PFA 固定后分别用TritonX-100 和预冷的甲醇进行打孔,完成免疫荧光实验之后,使用Confocal显微镜在条件同等的情况下观察并拍摄荧光图像,以证实不同的固定剂对信号表达的影响。【结果】 胞浆蛋白α-SMA用丙酮固定时信号清晰锐利,将Actin蛋白的丝状结构表达得非常充分;胞膜蛋白ZO-1用甲醇固定处理的信号最清晰;胞核蛋白磷酸化的Smad3用4 g/L PFA固定时p-Smad3信号与细胞核具有很好的共定位关系;原代滑膜成纤维样细胞用预冷甲醇打孔处理的细胞,其磷酸化的骨架相关蛋白(P-ERM)蛋白信号明显优于用TritonX-100打孔处理的细胞。 【结论】 针对不同抗原结构特点选用固定剂;有机溶剂固定剂用于细胞支架成分的固定,交联剂固定剂用于膜相关成分的固定,同时使用交联剂固定剂及有机溶剂打孔可较好的保存抗原而获得高质量的荧光图片。     

上调Smad7表达对腹膜纤维化大鼠腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子表达的影响

目的 研究基因转染上调Smad7表达对大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为（1）正常对照组（n=12）；（2）模型组（n=12）：每日给予腹腔注射4．25％葡萄糖腹膜透析液（100ml／kg），同时于第8、10、12、22、24、26天腹腔注射脂多糖（LPS，0．6mg／kg）；（3）空白载体对照组（n=12）：仅转入不含Smad7的Tet-on／vector空白载体；（4）Smad7基因转染组（n=12）：在造模后第0、14天分别转染Smad7。第28天时杀检，分别应用免疫荧光染色及RT-PCR检测脏层腹膜泛白细胞标志性抗原（OX-1）、单核巨噬细胞抗原（ED-1）、白介素1（IL-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）蛋白和mRNA的表达水平。Smad7基因转染采用超声介导的微泡基因转染技术。结果 与模型组及空白载体转染组比较．Smad7转基因组脏层腹膜OX-1、ED-1阳性细胞以及IL-1、TNF-α表达水平有明显的减少，但均高于正常对照组。结论 高糖腹膜透析液联合LPS可刺激腹膜炎症细胞的浸润及腹膜间皮细胞IL-1、TNF-α表达上调。基因转染上调Smad7表达可明显抑制大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子的表达上调。