四环素调控复制缺陷性疱疹病毒载体介导LacZ基因在原代培养神经元中的表达

目的利用四环素调控复制缺陷性单纯疱疹病毒I型重组载体(QR9TO-LacZ)感染体外原代培养的大鼠皮层神经元,探讨其介导半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达情况及基因调控效能;并检测该载体对神经元活力的影响。方法用RUL9-8细胞系扩增QR9TO-LacZ病毒株,收集后采用噬斑法测定病毒滴度;体外原代培养大鼠皮层神经元。将培养的原代神经元分为强力霉素(DOX)组和对照组。两组细胞均用QR9TO-LacZ转染,强力霉素组加入四环素衍生物强力霉素(0.5μg/ml),对照组加入等剂量空白对照液。同时根据感染复数(MOI),即MOI=3、5、10、30 PFU/cell,将两组培养细胞进一步分为亚组。病毒转染48h后行X-gal染色;光镜下观察神经元形态,随机选取10个高倍镜视野(×400),计算每高倍镜视野中平均蓝染细胞率,比较不同MOI病毒感染神经元的效率。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测感染病毒48 h(MOI同上)后神经元的活性。结果在含有DOX的培养环境中,不同MOI亚组(3、5、10、30 PFU/cell)QR9TO-LacZ感染神经元出现蓝染细胞百分比分别为5.35%±0.84%、10.64%±1.92%、19.73%±2.87%、34.41%±2.58%;在无DOX的培养环境中,各亚组均未观察到蓝染细胞。上述MOI感染的神经元细胞存活率分别为:90.24%±8.16%、88.00%±5.69%、83.95%±3.82%、78.90%±5.49%。结论 QR9TO-LacZ载体能有效地将目的基因导入原代培养神经元中并表达;目的基因表达的开启受强力霉素调控;QR9TO-LacZ对体外原代培养神经元毒性较低。     

缺血性脑血管病患者颈内动脉颅外段血管折曲的影响因素分析

目的 探讨缺血性脑血管病患者颈内动脉颅外段血管折曲的影响因素. 方法 选择行DSA检查的334例缺血性脑血管病患者,根据颈内动脉颅外段血管走行分为血管折曲组(血管成角小于90°定义为血管折曲,110例)和血管无折曲组(血管成角大于90°或盘曲成环状定义为血管无折曲,224例),根据患者年龄分为青年组(18～45岁)、中年组(46～64岁)和老年组(≥65岁).对于可能影响患者颈内动脉颅外段血管折曲的影响因素,如性别、年龄、身高、颈动脉狭窄程度和脑血管病危险因素等进行统计学分析. 结果 单因素分析发现,患者年龄、高血压病史、吸烟史、酗酒史、身高、性别比例在血管折曲组和血管无折曲组中差异有统计学意义(P＜0.05);logistic回归分析显示,高血压病史(OR=2.546,95%CI:1.376～4.712,P=0.003)、年龄(以18～45岁为参照组,46～64岁组OR=2.610,95%CI:1.056～6.452,P=0.038;≥65岁组OR=2.929,95%CI:1.159～7.401,P=0.023)与患者颈内动脉颅外段血管折曲有明显相关性. 结论 高血压病史和年龄是缺血性脑血管病患者颈内动脉颅外段血管折曲的重要影响因素.

Abstract：

Objective To investigate the influencing factors of kinking of extracranial internal carotid artery (EICA) in patients with transient ischemic attack. Methods Three hundred and thirty-four patients with ischemic cerebrovascular disease performed digital subtraction angiography (DSA) were chosen; they were divided into 2 groups according to vascular morphology through DSA detection: kinking group (angulation smaller than 90°, n=110) and non-kinking group (angulation larger than 90°, n=224). According to the age, the patients were divided into youth group (18-45 years old),middle age group (46-64 years old) and elderly group (older than 65 years old). The influencing factors which may be related to the kinking of EICA, including gender, age, height and stenosis degree, and the risk factors for cerebrovascular diseases were statistically analyzed. Results Univariate analysis found that the kinking group and non-kinking group on the ratio of age, gender, height, and histories of hypertension, smoking and drinking were significantly different (P＜0.05). Multiple logistic regression analysis showed that the kinking of EICA was obviously correlated to the history of hypertension (OR=2.546, 95% CI: 1.376-4.712, P=0.003) and age (taking youth group as reference group, middle age group:OR=2.610, 95% CI: 1.056-6.452, P=0.038, elderly group: OR=2.929, 95% CI: 1.159-7.401, P=0.023).Conclusion The history of hypertension and age are identified as independent predictors for kinking of EICA in patients with ischemic cerebrovascular diseases.     

立体定向抽吸辅以尿激酶液化治疗中等量丘脑出血疗效研究

目的评价立体定向抽吸辅以尿激酶液化治疗中等量丘脑出血(10～35 mL)的临床疗效。方法将盐城市第一人民医院2006年1月至2011年6月住院的中等量丘脑出血(TH)患者137例,分为内科组68例,给予常规内科治疗;手术组69例,在常规内科治疗的基础上,采用立体定向抽吸辅以尿激酶液化清除血肿。结果手术组30 d病死率显著低于内科组(10.1%对33.8%)。手术组30 d格拉斯哥预后(GOS)评分平均秩次高于内科组(P=0.025)。在存活病例中,手术组30 d的美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS评分)显著低于内科组[(13.5±4.0)对(16.8±4.3)]。手术组在入院后第3天、第7天的血肿体积减少率分别为40.1%和63.8%,均显著高于内科组-0.21%与39.80%(P均<0.01)。10～20 mL出血患者中,手术组30 d的NIHSS评分(8.5±3.9)显著低于内科组(11.5±4.2)(P=0.023);但在30 d病死率、GOS评分方面,两组差异无统计学意义。在21～35 mL出血患者中,手术组30 d的病死率[20/44(45.5%)]显著低于内科组[6/48(12.5%)](P<0.001);手术组30 d的GOS评分的平均秩次显著高于内科组(P<0.0001);在存活病例中,手术组30 d NIHSS评分显著低于内科组(15.9±3.8对21.4±4.3)。在长期疗效方面,手术组90 d的GOS平均秩次显著高于内科组(P=0.001);手术组的转归良好(GOS>3)率为52.2%(36/69),显著高于内科组27.9%(19/68)(P=0.001);90 d的累积病死率为13.0%(9/69),显著低于内科组的36.8%(25/68)(P=0.001)。10～20 mL出血患者中,两组90 d GOS平均秩次、90 d良好转归率、90 d病死率差异均无统计学意义。在21～35 mL出血量亚组患者中,手术组90 d GOS平均秩次显著高于内科组(P=0.001);手术组的转归良好率为41.7%(20/48),显著高于内科组(13.6%,6/44)(P=0.003);90 d累积病死率为16.7%(8/48),显著低于内科组(50.0%,22/44)(P=0.001)。两组在30 d内再出血、颅内感染、肺部感染的发生率方面,差异无统计学意义。结论本研究初步显示立体定向抽吸辅以尿激酶液化治疗中等量TH安全有效,其结论有待大规模随机对照研究进一步验证。     

横切口外环入路治疗婴幼儿腹股沟斜疝的体会

我们采用横切口外环入路疝囊高位结扎手术取得满意疗效。现将治疗的131例病人临床资料总结如下.资料与方法131例男性患儿中,2岁以下60例,3～4岁35例,5～6岁24例,7～12岁12例。手术方法:在腹部外环口上方附近做长约1.5cm 横切口,不切开腹外斜肌腱膜暴露外环,用小拉勾提拉,外环处可见凸起,钳夹此处,上提时睾丸随之向上移动,证实其为精索背膜或疝囊壁。将疝囊分离并切开,分离时勿损伤输精管及血管。将疝囊分离至颈部,推开输精管及精索将疝内容物完全还纳腹腔后,用四号丝线贯穿缝扎,近端做环扎。剪去多余疝囊,留残端约0.5cm.由阴囊外牵拉睾丸,使之回到阴囊底部,缝合切口,术闭。     

脐带血造血干细胞的采集、浓缩与低温冷冻保存

目的 :探讨脐带血造血干细胞库建立中的脐带血采集、分离、低温冻存的方法。方法 :自 1997年 7月至2 0 0 0年 7月已冻存经过HLA配型的脐带血 (cordblood ,CB) 3 74 4份。CB采自经检查符合要求的足月顺产或剖宫产新生儿 ,经 (citratephosphateadeninedextnse ,CPD A)抗凝 ,用密闭式血袋采集法采集。采集后置于室温保存 ,18h内处理。用羟乙基淀粉 (hydroxythylstarch ,HES)沉降后一次分离方法去除绝大多数红细胞及大部分血浆。采用以二甲亚砜 (dimethylsulfoxide ,DMSO)为主的冷冻保剂 ,冷冻保存CB。DMSO的终质量分数为 10 %。经序控降温后 ,置于 - 196℃液氮中保存。结果 :分析了 3 74 4份冻存CB ,平均采集量为 (93± 2 2 )ml(45～ 198ml)。浓缩后平均体积为 (3 8± 8)ml(3 0～ 60ml) ;浓缩前后有核细胞数 .浓缩前平均有核细胞数为 11.2× 10 8± 5 .3× 10 8(4.5× 10 8～ 4 5 .1× 10 8) ;采用HES沉降一次离心浓缩去除红细胞后的平均有核细胞数为 9.7× 10 8± 4 .6× 10 8(3 .1× 10 8～ 3 0 .5× 10 8) ;平均有核细胞回收率为 79%。质控检测 4 0份标本细胞活率为 88.2 % ,CFU GM回收率和CD3 4 +细胞计数分别为 97.6%和 86.4 %。结论 :本研究采用的CB采集、冻存及造血干细胞和病原生物检测的方法是安     

HER2与前列腺癌

HER2蛋白由位于17q21的HER2基因编码，是人类表皮生长因子受体的成员之一。HER2基因在前列腺癌中很少有扩增。HER2蛋白在约40％前列腺癌中呈高表达，尤其是在经抗雄激素治疗者及雄激素非依赖性者。针对HER2的单克隆抗体对前列腺癌的治疗效果不明显，HER2蛋白的C末端片段的存在及其作用可以解释这一现象。     

加热灭活病毒产生的低ACAIgG聚体的构象研究

目的 :探讨IVIG在 6 0℃、10h灭活病毒过程中 ,木糖醇和低 pH对于生成低ACAIgG聚体的作用。 方法 :利用高压液相、荧光光谱、圆二色谱、紫外吸收光谱以及IgG聚体对木瓜酶水解敏感性的差别来确定IgG聚体的空间构象及维持IgG聚体的价键变化。结果 :木糖醇及低pH的条件下加热导致IgG折叠趋于紧密 ,维持IgG聚体的价键增多 ,热稳定性增强 ,但其聚体的补体结合位点不易被C1大分子靠近亲和。相反 ,在无稳定剂存在时 ,6 3℃、2 0min、pH7.4的条件下加热导致IgG折叠趋于松散 ,其补体结合位点有利于C1大分子靠近亲和 ,相应的聚体激活补体的能力较强。结论 :IVIG在加热灭活病毒中 ,木糖醇和低 pH极大地降低了IgG聚体的生成及其ACA ,适宜的稳定剂和 pH的选择是制备高质量IVIG制品的重要环节。     

神经生长因子对颅脑外伤大鼠的抗炎作用机制

目的：颅脑外伤（traumatic brain injury, TBI）后炎症反应会引发神经系统功能紊乱,文中旨在探讨经鼻给予神经生长因子（ nerve growth factor , NGF）对 TBI后大鼠炎症反应的作用及其机制。方法36只健康SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、TBI模型组、治疗组,每组12只,TBI模型组和治疗组采用自由落体法撞击建立脑外伤模型,假手术组仅采用开颅窗后用骨蜡封闭。治疗组TBI后6 h经鼻给予NGF（50 g/d）,TBI模型组及假手术组给予等量磷酸盐缓冲液（PBS,pH 7．4～7．5）,每天给药1次,持续给药至大鼠被处死。各组分别于TBI后12 h、24 h各处死6只大鼠。测定大鼠伤侧皮质内IL-1β、TNF-α的表达量、核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）的DNA结合活性及β-淀粉样蛋白（amyloid-β,Aβ42）的表达。结果 TBI后12 h和24 h治疗组大鼠IL-1β的表达量[（37．51±1．92、36．23±2．99）pg/mg]较TBI模型组[（70．65±3．10、68．85±8．10）pg/mg]明显降低（P＜0．05）,TNF-α的表达量[（27．63±5．77、29．94±8．62）pg/mg]较TBI模型组[（47．12±7．38、56．15±11．20）pg/mg]显著减少（P＜0．05）,TBI后12 h、24 h,经鼻给予NGF后,治疗组大鼠NF-κB DNA结合活性（111．62±0．49、131．52±0．88）较TBI模型组（135．26±0．60、149．86±0．49）显著降低（P＜0．05）,伤侧皮质内Aβ42的表达（0．230±0．008、0．520±0．004）较TBI模型组（0．827±0．009、1．390±0．010）明显下降（P＜0．05）。结论经鼻给予NGF可控制TBI大鼠脑内的炎症反应,该作用机制可能与调节Aβ42/NF-κB通路相关。     

HER2与前列腺癌

HER2蛋白由位于17q21的HER2基因编码，是人类表皮生长因子受体的成员之一。HER2基因在前列腺癌中很少有扩增。HER2蛋白在约40％前列腺癌中呈高表达，尤其是在经抗雄激素治疗者及雄激素非依赖性者。针对HER2的单克隆抗体对前列腺癌的治疗效果不明显，HER2蛋白的C末端片段的存在及其作用可以解释这一现象。     

疏血通注射液治疗原发性脑出血的临床研究

目的观察疏血通注射液对原发性脑出血血肿吸收、血肿周围低密度区改变和神经功能恢复的影响。方法将160例患者采用成组设计随机分为两组:对照组给予甘露醇、呋塞米脱水降颅内压,控制血压,防止出血等常规治疗。治疗组在常规治疗的基础上加用疏血通注射液6 mL加5%葡萄糖250 mL静脉输注,1次/日,连续21 d。于治疗第4天、第10天和第21天行CT检查测量血肿体积、血肿周围低密度区,并进行美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS)。结果两组血肿体积、NIHSS评分总的变化有统计学意义(P0.01),于治疗后第10天、第21天治疗组血肿体积、NIHSS评分较对照组明显缩小(P0.01);两组血肿周围低密度区范围总的变化趋势有统计学意义(P0.01),治疗组在第4天、第10天和第21天小于对照组(P0.01)。结论疏血通注射液能促进脑出血时的血肿吸收、血肿周围低密度区缩小和神经功能改善。疏血通对于小于30 mL,6 h～24 h后稳定脑出血是安全有效的。