血液肿瘤患者侵袭性真菌感染的流行病学特征

目的 探讨血液肿瘤患者侵袭性真菌感染(IFI)的流行病学特征.方法 回顾性分析静脉化疗(A组,235例)和造血干细胞移植(B组,41例)血液肿瘤患者IFI发病率,随访患者治疗及预后,分析影响IFI发病的危险因素.结果 两组各有4例发生IFI;B组IFI发病率高于A组(9.8％vs.1.7％)(P＜0.01).随访期间,A组4例IFI患者均治愈,B组3例IFI治愈,1例好转.B组5例死亡,死因均与IFI无关.IFI发病的危险因素包括深静脉置管、粒细胞缺乏、持续性发热、联合应用2种及以上广谱抗生素超过7d、病毒感染、低蛋白血症、入院时FCOG评分≥2分(P＜0.05).结论 需要重视血液肿瘤患者IFI的危险因素,及早诊断,并采用抗真菌药物治疗.     

急性早幼粒细胞白血病的并发症及其危险因素分析

目的：总结儿童及青少年急性早幼粒细胞白血病诊治中的主要并发症,分析其发生的危险因素。方法：回顾性分析 2010年1月—2021年5月南京医科大学第一附属医院收治的43例初诊急性早幼粒细胞白血病儿童及青少年病例,总结分析各类并发症的发病率,根据分化综合征临床诊断标准分为分化综合征组和非分化综合征组,采用多因素Logistic回归分析分化综合征发生的危险因素,采用Kaplan-Meier生存分析评估患者的累积无事件生存率和总生存期。结果：43例急性早幼粒细胞白血病患者中,与非分化综合征组比较,分化综合征组的维甲酸诱导后血清铁蛋白、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白蛋白都高于非分化综合征组,差异有统计学意义(P ＜ 0.01)。多因素Logistic逐步回归分析显示,外周血白细胞数(white blood cell,WBC)最高值(WBC_max)、血清铁蛋白、LDH和IL-6显著升高是诱导治疗期间发生分化综合征的独立危险因素(P ＜ 0.01)。高危组和低危组累积总生存率和无事件生存率相比,差异无统计学意义。结论：儿童及青少年急性早幼粒细胞白血病诊治过程中可出现出血和分化综合征等多种并发症。维甲酸诱导治疗后的WBC、LDH、血清铁蛋白和 IL-6 等炎症因子过度升高是发生分化综合征的危险因素。     

伴有22三体的t(5;17)变异易位急性早幼粒细胞白血病

目的 探讨一例核型为47,XY,t(5;17),+22的少见急性早幼粒细胞白血病(acute promyelo-cytic leukemia,APL)的临床和实验特征.方法 在常规核型分析的基础上,应用荧光原位杂交(fluorescencein situ hybridization,FISH)和多重荧光原位杂交(multiplex fluorescence in situ hybridization,M-FISH)技术进一步检测该病例的细胞遗传学异常,并结合文献分析此类少见变异易位的临床特点.结果 FISH检测PML-RARa阴性,但77%的细胞显示存在17号RARa基因的重排或复制;BCR-ABL阴性,但74%的细胞显示有22号染色体的复制或重排.M-FISH明确RARa基因重排系5号与17号染色体易位所致,并证实了22号三体的存在.结论 变异型t(5;17)易位,形成NPM-RARa融合基因的急性早幼粒细胞白血病是APL中少见的类型.骨髓形态表现为奥氏小体缺如,核型中常伴有其它附加染色体异常,全反式维甲酸(all-trans retinoicacid,ATRA)联合化疗有效,但易复发,合并弥漫性血管内凝血及高白细胞者预后凶险.     

8例Richter综合征临床及生物学特征分析

为了探讨Richter综合征（RS）临床及生物学特征及其预后因素,回顾性分析8例RS患者。利用血清学检测、多参数流式细胞术（FCM）、常规细胞遗传学（CC）、间期荧光原位杂交（FISH）技术、PCR联合DNA序列测定,分别检测患者血清乳酸脱氢酶（LDH）、β2-微球蛋白（β2-MG）、胸苷激酶1（TK1）、血清铁蛋白（SF）和糖链抗原-125（CA-125）,CD38和ZAP-70,染色体核型,ATM和p53基因缺失、＋12异常,以及免疫球蛋白重链可变区（IgVH）突变。结果显示：8例RS患者中7例转化为弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）,1例转化为霍奇金淋巴瘤（HL）。7例LDH高于正常值,4例β2-MG高于正常值,7例SF高于正常值,4例CA-125高于正常值,1例TK1高于正常值。4例患者ZAP-70阳性,7例CD38阳性,5例IgVH无突变,4例有染色体复杂核型,1例有＋12,1例有p53缺失。按就诊时BinetA＋B期与BinetC期将患者分为两组,BinetA＋B组从诊断至转化的平均时间为98.5个月,BinetC组为38.3个月,两组间有显著性差异（p=0.021）。平均总生存期（OS）在BinetA＋B组及BinetC组之间分别是123.8个月及49.8个月,两组间有显著性差异（p=0.049）,转化后平均生存时间分别是34.5个月及10.3个月。结论：RS患者血清LDH、β2-MG和SF水平高,ZAP-70和CD38高表达、IgVH无突变发生率高,临床分期可能是RS转化的风险及预后因素。     

实时定量PCR检测白血病相关miRNA方法的建立

本研究建立实时定量PCR（RQ-PCR）技术检测白血病相关miRNA的方法,探讨此方法在定量检测miRNA中的应用价值。通过提取82例慢性淋巴细胞白血病（CLL）、70例急性白血病（AL）患者骨髓或外周血标本总RNA,以cDNA为模板进行10倍梯度系列稀释,分别作miRNA及内参U6RNA的标准曲线并计算扩增效率;运用ABF7300定量PCR仪进行定量检测;采用SYBRGreen荧光染料法、以U6RNA作为内参照、循环阈值（ct）比较法进行miRNA表达相对定量分析,以检测CLL患者miR-15a、miR-16-1、miR-29b、miR-181b及AL患者miR．128．1、miR-223、let-7b、miR-155、miR-181a的表达。方法学考核参数包括特异性、线性范围、精密度和重复性。结果表明：RQ—PCR检测miRNA仅需10—50ng总RNA样本,检测下限为0．05ng,miRNA及u6的Ct值均在15—30之间,10倍系列稀释法制作的标准曲线呈现良好的线性关系（R^2〉0．980）,扩增效率均在0．9以上,溶解曲线均为单峰,PCR产物经琼脂糖电泳均显示较亮的目的条带,批内差和批间差分别小于4．8％和6．3％。结论：RQ-PCR技术检测白血病相关miRNA敏感、快速,高通量,节约成本,定量范围宽,极大的方便了对miRNA的定量研究。     

实时定量逆转录PCR检测慢性淋巴细胞白血病puma基因mRNA的表达及其临床意义

Puma为一种凋亡调控因子。本研究探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者p53上调puma mRNA的表达情况,并探索其在评估CLL预后中的意义。采用基于SYBR GreenI荧光染料法的实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)方法检测100例CLL患者及11名健康对照者外周血标本中puma基因的表达,以β-actin为内参照,用2(-△Ct)方法计算puma的相对定量值,组间分析采用秩和检验。结果显示,qRT-PCR标准曲线的R2均≥0.990,批内差及批间差变异系数(CV)均小于5%,灵敏度可达102copies/μgRNA。100例CLL患者puma基因表达水平中位数为1.038×10-3(4.106×10-4-2.806×10-3);11名健康对照者puma表达水平中位数为1.220×10-3(7.233×10-4-1.405×10-3),二者无显著性差异(U=544.5,p=0.957)。临床分期较早(Binet分期A期)的患者puma表达水平明显高于临床分期较晚(Binet分期B期、C期)的患者(p0.001);具有CD38表达阳性、ZAP-70蛋白表达阳性、血清乳酸脱氢酶水平增高、血清β2-微球蛋白水平增高的患者,其puma基因表达水平均明显低于无以上不良预后因素的患者,差异显著(p值分别为0.002,0.012,0.009和0.046);FISH检测显示存在12号染色体三体和14q32易位的患者puma表达水平明显低于无以上分子遗传学异常者,其差异显著(p值分别为0.003和0.045)。结论:qRT-PCR方法检测puma表达灵敏可靠,puma表达水平与CLL多种预后因素存在相关性,在评估CLL预后中具有重要价值。     

慢性淋巴细胞白血病外周血免疫球蛋白异常研究

为了解慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者外周血免疫球蛋白（Ig）异常与年龄、性别、疾病分期及预后的关系,运用免疫速率比浊法测定83例CLL患者血清中IgG、IgA和IgM水平,用多参数流式细胞术（FCM）检测患者外周血CD38、ZAP－70表达水平。结果表明：83例CLL患者中IgG减低12例（14．5％）;IgA减低26例（31．3％）,IgM减低34例（41．0％）。BinetC期组Ig减低发生率明显高于BinetA和B期组（P=0．011）,Rai分期高危组的Ig减低发生率明显高于低危组（P=0．011）。Ig减低组CD38和ZAP－70表达阳性率明显较Ig正常组高（P＝0．033和P=0．038）。CD38和ZAP－70在疾病晚期患者表达阳性率更高,其中BinetC期组ZAP－70表达阳性率明显高于BinetA和B期组（P=0．047）。而年龄和性别与Ig异常没有明显相关性（P〉0．05）。结论：CLL患者体液免疫功能与疾病分期密切相关,检测CLL患者外周血Ig水平的变化,对了解CLL患者免疫功能状态,从而判断病情及预后具有重要作用。     

血小板显著增多为首发表现的慢性髓细胞白血病1例并文献复习

 目的 探讨以血小板显著增多为首发表现的慢性髓细胞白血病（CML）的临床及生物学特点。方法 临床诊断以血小板显著增多为首发表现的CML患者1例并文献复习。结果 血小板显著增多为首发表现的CML临床发病率低,易误诊为原发性血小板增多症,表达bcr／abl融合基因,随病程进展,可进一步向CML加速期、急变期演变。该类患者bcr／abl融合基因多为b3a2型,转录表达产物与血小板显著增多和血栓形成相关。结论 血小板显著增多为首发表现的CML是一组有独特临床和生物学特点的疾病,深入认识该组疾病有助于提高该病的临床诊疗。     

移植物细胞组分对异基因造血干细胞移植预后的影响

目的：探讨移植物中单个核细胞（mononuclear cell,MNC）、CD34⁺ 细胞及 T 淋巴细胞亚群剂量对移植后生存的影响。方法：回顾性分析121例行异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）的血液系统恶性疾病患者,研究回输移植物中MNC、CD34⁺ 细胞、CD3⁺ T细胞、CD4⁺ T细胞、CD8⁺ T细胞、调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）剂量及CD4⁺ /CD8⁺ T细胞比值对移植后造血重建及生存的影响。结果：中性粒细胞成功植入120例,高剂量CD34⁺ T细胞 （≥6.90×10⁶ 个/kg）（P < 0.001）、CD3⁺ T细胞（≥6.24×10⁸ 个/kg）（P=0.042）和CD8⁺ T细胞（≥1.05×10⁸ 个/kg）（P=0.021）与中性粒细胞更快植入相关。血小板成功植入119例,高剂量CD34⁺ 细胞与血小板更快植入相关（P=0.001）。53例（43.8%）患者发生急性移植物抗宿主病,28例发生慢性移植物抗宿主病。1年和3年总体生存（overall survival,OS）率为83.5%和68.0%,1年和3年无进展生存（progression-free survival,PFS）率为75.0%和64.4%。单因素分析中,高剂量MNC（≥9.79×10⁸ 个/kg）、高剂量CD3⁺ T细胞和CD4⁺ /CD8⁺ T细胞比值<3.57患者有更好的OS,高剂量MNC患者有更好的PFS（P=0.061）。多因素分析显示,CD4⁺ /CD8⁺ T 细胞比值<3.57患者有更好的OS（HR=0.288,95%CI：0.084~0.988,P=0.048）。1年和3年累积复发率分别为18.2%和26.8%,高剂量MNC和CD8⁺ T细胞患者有更低的累积复发率。结论：移植物细胞组分对异基因造血干细胞移植预后有重要影响,高剂量 CD34⁺ 细胞可促进血小板更快植入,回输移植物中CD4⁺ /CD8⁺ T细胞比值<3.57的患者有更好的OS和更低的累积复发率。     

典型与不典型免疫表型慢性淋巴细胞白血病的预后相关因素分析

Objective To analyze the proguostic factors for chronic lymphocytic leukemia (CLL) with typical and atypical immunophenotype. The parameters analyzed included sex, age, Binet stages, abso-lute lymphocyte count (ALC), immunoglobulin heavy-chain variable region (IgVH) gene mutation status, ZAP-70 protein, CD38 expression and cytogenetic aberrations. Methods According to the clinical guideline and scoring system for CLL in Britain, among 77 patients, 61 patients with score 5 called typical immunophe-notype CLL, 16 with score 4 or 3 were atypical immunophenotype CI,L. Multiparameter flow cytometry was employed for immunophenotypic analysis in 77 CLL patients for CD5, CD19, CD23, FMC7, slg, CD20, CD79h expression and ZAP-70 protein and CD38. IgVH mutation status was detected by multiplex RT-PCR and sequencing of the purified PCR amplification products. Fluorescence in situ hybridization (FISH) and a panel of probes were used to detect cytogenetic aberrations. Results There was no significant difference be-tween the two groups in sex, age, ZAP-70 and IgVH mutation status (P =0.398, P =0. 189, P =0.268 and P =0. 131, respectively). The incidence of ALC≥50 × 109/L, Binet B + C, CD38 ≥30% in atypical CLL patients(43.8%, 87.5% and 43.8%, respectively) were higher than that in typical group (16.4%, 36.1% and 16.4%, respectively) (P = 0. 026, P < 0. 01 and P = 0. 026, respectively). The proportion of typical patients (26. 8%) with a 13q14 deletion as sole abnormality was higher than that of atypical patients (7.6%), and that with deletion of 11q22 or 17p13 was lower than that of atypical patients (12.2% vs 46.2%) (P = 0. 022). Conclusion There were obvious differences between the typical immunophenotype CLL and atypical CLL in ALC, Binet stages, CD38 expression level and cytogenetic aberrations.