乙酰紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的研究

目的：研究乙酰紫草素（ASK）对人前列腺癌PC-3细胞的诱导凋亡作用及相关的分子机制。方法：利用CCK-8实验检测ASK对体外培养PC-3细胞的杀伤作用；利用流式细胞术实验检测ASK处理后PC-3细胞凋亡情况；利用Western blotting检测凋亡蛋白和AKT信号通路蛋白的表达。结果：CCK-8实验证明ASK能够以时间和浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖；流式细胞术实验证明ASK能够诱导人前列腺癌PC-3细胞线粒体依赖性凋亡；Western blotting证明ASK能够有效抑制前列腺癌PC-3细胞中的AKT信号通路。结论：ASK能够有效抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖，并能够有效诱导PC-3细胞发生线粒体依赖性凋亡，其机制可能是通过调控PI3K/Akt信号通路来实现，说明ASK具有一定的抗前列腺癌的潜力。     

方剂药理研究的方法与思路

方剂是中医临床用药的主要形式、中医经验的载体,其配伍规、组方原则是中医药理论的精华。方剂药理研究是现代中医药研究的重点也是难点。由于病因、病机、中药药味及其组合方式的多样性,使得方剂的研究难度很大。结合现代科学技术对其加以研究对推进中医药理论现代化、科学化、创新发展具有重要意义。在运用现代药理学技术对方剂加以研究分析时应注重,坚持以中医理论为指导,结合运用现代系统论思想,采用现代科学手段,由简到繁,由宏观到微观,促使药理学与中医理论科学结合,从而全面揭示中药方剂防病治病的理论基础与作用机制。近年来对于方剂药理研究的方法主要集中在以下几个方面:全方研究、拆方研究、同类方剂对比研究、方剂剂型研究、煎服法研究、药代动力学研究。同时将方剂药理研究与生物化学、药物化学、分子生物学、中药血清药物化学、复方代谢组学、基因组学及蛋白质组学等现代科学技术相结合,有效的推进了方剂学发展。各种研究方法各有其适用范围及优势,但有时也存在一些不足,如中医整体观念、现代技术研究脱离中医理论存在局限性,整体与局部脱节,宏观与微观脱节,体内过程与活性评价脱节等,因此通过对以上实验研究方法加以探讨总结,明确中药方剂现代化研究的思路以期促进方剂研究更加合理有效的与现代科学技术相融合,避免局限性,促进方剂药理研究创新性发展。     

补阳还五汤对高脂血症模型大鼠FAK-PI3K-AKT信号通路的作用影响

目的 基于黏附斑激酶(FAK)-磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路探讨补阳还五汤对高脂血症模型大鼠血小板异常的调控机制.方法 选取清洁级健康SD大鼠50只,其中40只采用高脂饲料(基础饲料+15％猪油+20％蔗糖+1.2％胆固醇+0.2％胆酸钠)喂养4周建立高脂血症模型,并将其分为补阳还五汤高剂量组(高剂量组,14.0 g/kg)、补阳还五汤低剂量组(低剂量组,3.5 g/kg)、辛伐他汀对照组(对照组,0.004 g/kg)、模型组,每组10只;另10只大鼠作为空白组,空白组继续伺以普通饲料,其他组继续高脂饲料喂养.各给药组灌服相应药物,空白组和模型组灌服等体积蒸馏水,每天1次,连续4周.末次给药后,检测各组大鼠血浆中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;Western blot法检测FAK、4-磷酸-磷脂酰肌醇-5-激酶(PIP5K)、磷脂酰肌醇激酶β抗体(PI3Kp110β)、磷酸化蛋白激酶B[p-AKT(Ser473)]、磷酸化蛋白激酶1/2/3抗体[p-AKT1/2/3(Thr308)]、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)相关蛋白的表达水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠血浆TC、TG和LDL-C水平均明显升高(P<0.01),且蛋白FAK、PI3Kp110β、PIP5K、p-AKT(Ser473)和p-AKT1/2/3(Thr308)水平均上调;与模型组比较,各给药组大鼠血浆TC、TG和LDL-C水平均明显降低(P<0.05);对照组和低剂量组均抑制了该信号通路的蛋白表达.结论 补阳还五汤能降低高脂血症模型大鼠血脂异常状态,其作用机制可能与抑制FAK-PI3 K-AKT信号通路的激活有关.     

三七皂苷类成分的神经保护机制研究进展

三七皂苷类成分是从五加科植物三七中提取分离得到的一类化合物,具有抗炎、抗氧化、保护神经系统、保护心血管系统、抗肿瘤、降糖降脂等多种药理作用。目前,三七皂苷类成分在临床上广泛应用于中风、中风后遗症、高血压病、冠心病和阿尔兹海默病等多种疾病的治疗,尤其对于中风、中风后遗症等神经系统疾病的治疗具有明显的临床疗效。近年来,关于三七皂苷类成分保护神经系统的机制不断被发掘,为了推进三七皂苷类成分在防治中枢神经系统疾病方面的研究,本文结合国内外最新报道,对近年来三七皂苷类成分发挥神经保护作用及其机制进行总结,主要包括调控电压门控离子通道、保护神经细胞、抑制氧化应激、抑制炎症反应、促进血管新生、降低兴奋性神经毒性、保护神经血管单元等几个方面。虽然三七皂苷类成分对神经系统的保护机制主要涉及以上几个方面,但是对于其某些部分的研究还不够深入,需要借助分子生物学、代谢组学、蛋白质组学等技术,为三七皂苷类成分发挥神经系统的保护作用进行更深入的探索。     

基于Nrf2/ARE信号通路探讨少腹逐瘀汤对寒凝血瘀证大鼠血管内皮损伤的保护作用及机制

目的 通过制备寒凝血瘀证大鼠模型,观察少腹逐瘀汤对寒凝血瘀证大鼠胸主动脉血管组织核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应元件（ARE）信号通路的影响,探讨少腹逐瘀汤对血管内皮损伤的保护作用及机制。方法 将50只SPF级大鼠随机分为少腹逐瘀汤高、中、低剂量组（4.8,2.4,1.2 g·kg^-1）,模型组和空白组,每组10只。采用冰水浴联合皮下注射盐酸肾上腺素的方法建立寒凝血瘀证大鼠模型。造模的同时开始灌胃给药,连续给药28 d后,采用全自动血液流变仪检测血液流变学指标;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清中一氧化氮（NO）,内皮素-1（ET-1）,超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）,细胞间黏附分子-1（ICAM-1）,血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）,血管性血友病因子（vWF）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察胸主动脉血管损伤情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测胸主动脉血管组织Nrf2,血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测胸主动脉血管组织Nrf2,HO-1 mRNA的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠全血黏度及血浆黏度均明显升高（P<0.05,P<0.01）,vWF,ICAM-1,VCAM-1含量显著升高（P<0.01）,NO,SOD,GSH-Px含量显著降低（P<0.01）,ET-1的含量显著升高（P<0.01）,胸主动脉血管组织Nrf2,HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）,细胞核内的Nrf2蛋白表达明显升高（P<0.05）,细胞浆中Nrf2的蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,HO-1的蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,少腹逐瘀汤高、中剂量组全血黏度（高、中切）,血浆黏度均明显降低（P<0.05）;vWF,ICAM-1,VCAM-1,ET-1含量明显降低（P<0.05,P<0.01）;NO,SOD,GSH-Px含量明显升高（P<0.05,P<0.01）;胸主动脉血管内皮细胞增生、肿胀、脱落,内弹力膜断裂、平滑肌排列紊乱等病理变化有所改善;Nrf2,HO-1蛋白及mRNA表达水平显著升高（P<0.01）。结论 少腹逐瘀汤对寒凝血瘀证大鼠胸主动脉血管内皮损伤有保护作用,作用机制与激活Nrf2/ARE信号通路增加抗氧化酶的表达,抑制黏附因子的表达有关。     

辽东楤木叶总皂苷体外抗肿瘤作用的研究

目的探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)的体外抗肿瘤作用,为进一步将其开发成新靶点的抗肿瘤药物提供可靠的科学依据,为研发具有自主知识产权的抗肿瘤新药奠定坚实的基础。方法利用磺酰罗丹明B(SRB)染色法,观察辽东楤木叶总皂苷不同浓度对A549、BGC、BEL-7402和HCT-8肿瘤细胞的抑制作用。结果 ETS浓度达到31.25μg.ml-1时即可对人肺腺癌A549细胞、人胃癌BGC细胞和人肝癌BEL-7402细胞有50%生长抑制作用,达到62.5μg.ml-1时即可对人结肠癌HCT-8细胞有50%生长抑制作用。其浓度达到125μg.ml-1时即可对人胃癌BGC细胞和人肝癌BEL-7402细胞有50%杀死的作用。浓度达到500μg.ml-1时即可对人结肠癌HCT-8细胞有50%杀死的作用,而对人肺腺癌A549细胞未测出其50%杀死作用。各组均未测出完全抑制细胞生长所需的ETS浓度。对于体外加药48 h后对A549、BGC、BEL和HCT-8细胞OD值的影响,ETS组500,250,125μg.ml-1均有极显著性统计学差异(P<0.01),62.5μg.ml-1对A549、BEL和HCT-8均有显著性意义;31.25μg.ml-1均无统计学意义。结论 ETS体外对人肺癌A549、人胃癌BGC、人肝癌BEL-2、人结肠癌HCT-8肿瘤细胞有一定的抑制作用。     

温中益气胶囊对幽门结扎型胃溃疡大鼠的治疗作用

目的： 研究温中益气胶囊对幽门结扎型胃溃疡大鼠的治疗作用以及对小鼠的抗炎、镇痛作用。 方法： 采用幽门结扎法复制大鼠胃溃疡模型。取清洁级健康SD大鼠60只,雌雄各半,随机分成空白组,模型组,阳性对照药三九胃泰颗粒组（3.69 g·kg^-1）,温中益气胶囊高、中、低剂量组（2.21,1.11,0.55 g·kg^-1）。每天ig给药1次,连续给药7 d,模型组和空白组给予等量蒸馏水。第5天给药后各组动物禁食不禁水48 h,末次给药后2 h麻醉,进行幽门结扎手术,缝合后直肠给药1次,禁食水。18 h后麻醉大鼠,颈总动脉取血。取全胃观察大鼠胃溃疡面积和溃疡指数,胃组织匀浆测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、H⁺-K⁺-ATP酶、生长抑素（SS）含量。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和热板刺激法进行抗炎和镇痛实验,测定小鼠耳肿胀度、抑制率及痛阈值的大小。分别取清洁级小鼠50只,随机分成空白组、阳性对照药三九胃泰颗粒组（5.19 g·kg^-1）、温中益气胶囊高、中、低剂量组（3.12,1.56,0.78 g·kg^-1）。 结果： 胃溃疡实验中,与空白组比较,模型组H⁺-K⁺-ATP酶活性和MDA含量显著增加（P<0.01）,SS和SOD活性显著降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,温中益气胶囊能显著减小大鼠胃溃疡面积和溃疡指数,降低H⁺-K⁺-ATP酶的活性和MDA含量并增加胃组织中SS和SOD水平（P<0.01,P<0.05）。抗炎、镇痛实验中,与空白组比较,温中益气胶囊能降低二甲苯致小鼠耳廓肿胀度,提高小鼠痛阈值（P<0.01或P<0.05）。 结论： 温中益气胶囊可能通过降低H⁺-K⁺-ATP酶活性和MDA含量、增强SOD活性、增加SS的含量来实现抗幽门结扎型胃溃疡作用,并具有明显的抗炎、镇痛作用。     

麻姜宣肺胶囊药效学研究

目的： 观察麻姜宣肺胶囊的镇咳、祛痰、抗炎、解热和平喘作用。 方法： 将小鼠随机分为空白组、阳性药组和麻姜宣肺胶囊的高、中、低剂量组（2.49,1.24,0.62 g·kg^-1）,ig 7 d,分别采用氨水法、酚红法和小鼠耳肿胀法对麻姜宣肺胶囊的镇咳、祛痰、抗炎作用进行研究。将大鼠随机分为空白组、阳性药组、模型组和麻姜宣肺胶囊高、中、低剂量组（1.8,0.9,0.45 g·kg^-1）,采用内毒素致热实验观察其解热作用。将豚鼠随机分为空白组、阳性药组和麻姜宣肺胶囊的高、中、低剂量组（1.55,0.77,0.39 g·kg^-1）,采用整体动物引喘实验观察其平喘作用。 结果： 麻姜宣肺胶囊高、中剂量可减少小鼠咳嗽次数,延长咳嗽潜伏期（P<0.05,P<0.01）;高剂量能增加小鼠呼吸道酚红排泌量（P<0.01）;高、中、低剂量可抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀度（P<0.05）;高剂量可抑制脂多糖所致的大鼠体温升高（P<0.05,P<0.01）;高剂量可延长豚鼠乙酰胆碱和磷酸组胺所致的引喘潜伏期（P<0.05,P<0.01）。 结论： 麻姜宣肺胶囊具有镇咳、祛痰、抗炎、解热和平喘的作用。     

欣通胶囊对麻醉犬血栓素B2/6-酮-前列腺素及心肌梗死范围的影响

目的研究欣通胶囊对急性心肌梗死模型犬心肌的保护作用和机制,从而研究中药复方对冠心病的治疗方法,为临床开发新药提供依据。方法通过结扎犬冠状动脉左前降支复制急性心肌梗死模型,通过十二指肠给予受试药物,观察不同剂量组对模型犬血栓素、前列腺素、心脏定量组织学的影响。结果与假手术组比较,模型组TXB2/6-K-PG升高,4、6h差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。与模型组比较,欣通胶囊中剂量组6h的TXB2/6-K-PG降低（P〈0.05）;欣通胶囊高剂量组、地奥心血康组在4、6hTXB2/6-K-PG降低,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。欣通胶囊高剂量组及地奥心血康组能够缩小心肌梗死范围。结论欣通胶囊对急性心肌梗死犬具有一定的保护作用,其机制可能是通过缩小心肌梗死面积,维持血栓素与前列腺素平衡等途径实现的。     

欣通胶囊对犬急性心肌梗死心肌酶的影响

目的研究欣通胶囊对冠状动脉结扎诱发犬急性心肌梗死的心肌酶的影响,为开发新药提供实验依据。方法采用结扎犬冠状动脉的造模方法,建立急性心肌缺血模型,观察欣通胶囊对模型犬血浆中谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)的影响,观察欣通胶囊对急性心肌缺血的保护作用。结果欣通胶囊可以降低急性心肌梗死模型犬血浆中AST、CK、CK-MB、LDH水平。结论欣通胶囊对犬急性心肌梗死模型有一定的保护作用。