血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

 [目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

再生障碍性贫血患儿CD+4CD+25T细胞及TGF β1Flt 3L水平变化的意义

目的评价免疫调节T细胞和细胞因子在再生障碍性贫血(再障)细胞免疫功能紊乱中的作用。 方法2004 02—2005 06中山大学第二附属医院采用流式细胞术检测27例特发性再障患儿骨髓及外周血淋巴细胞亚群和CD+4CD+25T细胞水平，ELISA检测骨髓转化生长因子(TGF β1)和Flt 3L水平，并与正常儿童对照。 结果与对照组比较，初诊再障患儿外周血和骨髓CD+8T细胞均显著增高(P<0.05)，重型再障(SAA)组伴外周血CD-3CD+56NK细胞及骨髓B细胞显著下降(P<0.05)。初诊SAA组骨髓CD+4CD+25T细胞\[(7.5±3.4)%\]显著高于对照组\[(4.3±0.9)%，P<0.05\]，初诊SAA组及轻型再障(MAA)组骨髓CD+4CD+25/CD+4比值分别为(28.9±11.1)%和(28.2±9.4)%，均显著高于对照组\[(17.4±0.9)%，P均<0.05\]，骨髓TGF β1分别为(2.2±1.7)μg/L和(2.0±0.6)μg/L，均较对照组［(4.4±0.9)μg/L］显著降低(分别为P<0.01、P<0.05)，而Flt 3L水平分别为(1031.1±321.8)ng/L和(694.7±424.7)ng/L，均较对照组［(63.0±37.5)ng/L］显著增高(P均<0.01)。缓解期SAA儿童除外周血CD+8T细胞仍较对照组显著增高外，其余上述指标均接近正常水平。相关分析显示，骨髓CD+4CD+25T细胞与CD+3CD+4T细胞呈显著正相关(r分别为0.495、0.540,P<0.01)；Flt 3L与骨髓CD+3、CD+4、CD+8T细胞及CD+4CD+25T细胞均呈显著正相关(r分别为0.732、0.542、0.688、0.405,P分别<0.01、0.01、0.01、0.05)，而TGF β1与骨髓CD+8T细胞和Flt 3L水平呈显著负相关(r分别为-0.431、-0.482,P分别<0.05、<0.01)。 结论儿童再障发病与CD+4CD+25T细胞数量缺乏无关，骨髓TGF β1水平显著降低和Flt 3L水平显著增高可能在再障儿童T淋巴细胞数量增多和功能紊乱中起重要作用。     

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目的评价免疫调节T细胞和细胞因子在再生障碍性贫血(再障)细胞免疫功能紊乱中的作用。方法2004-02—2005-06中山大学第二附属医院采用流式细胞术检测27例特发性再障患儿骨髓及外周血淋巴细胞亚群和CD 4CD2 5T细胞水平,ELISA检测骨髓转化生长因子(TGFβ-1)和F lt-3L水平,并与正常儿童对照。结果与对照组比较,初诊再障患儿外周血和骨髓CD 8T细胞均显著增高(P<0.05),重型再障(SAA)组伴外周血CD3-CD 56NK细胞及骨髓B细胞显著下降(P<0.05)。初诊SAA组骨髓CD 4CD 25T细胞[(7.5±3.4)%]显著高于对照组[(4.3±0.9)%,P<0.05],初诊SAA组及轻型再障(MAA)组骨髓CD 4CD2 5/CD 4比值分别为(28.9±11.1)%和(28.2±9.4)%,均显著高于对照组[(17.4±0.9)%,P均<0.05],骨髓TGFβ-1分别为(2.2±1.7)μg/L和(2.0±0.6)μg/L,均较对照组[(4.4±0.9)μg/L]显著降低(分别为P<0.01、P<0.05),而F lt-3L水平分别为(1031.1±321.8)ng/L和(694.7±424.7)ng/L,均较对照组[(63.0±37.5)ng/L]显著增高(P均<0.01)。缓解期SAA儿童除外周血CD8 T细胞仍较对照组显著增高外,其余上述指标均接近正常水平。相关分析显示,骨髓CD4 CD 25T细胞与CD 3CD 4T细胞呈显著正相关(r分别为0.495、0.540,P<0.01);F lt-3L与骨髓CD 3、CD 4、CD 8T细胞及CD 4CD 25T细胞均呈显著正相关(r分别为0.732、0.542、0.688、0.405,P分别<0.01、0.01、0.01、0.05),而TGFβ-1与骨髓CD 8T细胞和F lt-3L水平呈显著负相关(r分别为-0.431、-0.482,P分别<0.05、<0.01)。结论儿童再障发病与CD 4CD 25T细胞数量缺乏无关,骨髓TGFβ-1水平显著降低和F lt-3L水平显著增高可能在再障儿童T淋巴细胞数量增多和功能紊乱中起重要作用。     

重组人IL-6对近曲肾小管上皮细胞增殖及生物学表型的影响

【目的】观察重组人白细胞介素6（rIL-6）在体外对人近曲肾小管上皮细胞株（HK-2）增殖及生物学表型的影响。探讨rIL-6对HK-2细胞作用的时间-效应及剂量-效应关系。【方法】用MTT比色法检测rIL-6对细胞增殖的影响；用流式细胞术检测rIL-6对细胞周期及α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）阳性细胞百分率的影响；倒置显微镜观察rIL-6对HK-2细胞形态改变的影响。【结果】MTT比色法示，rIL-6在10～50ng／mL作用浓度范围内促进HK-2细胞增殖，呈剂量、时间依赖效应；rIL-6作用浓度为100～200ng／mL时抑制细胞增殖，随作用浓度增加抑制作用加强（F=201．582，P〈0．001），（F=43．943，P〈0．001）。rIL-6影响HK-2细胞的DNA合成。HK-2细胞有基础量的α—SMA表达，25ng／mL rIL-6与HK-2孵育1～48h后，α—SMA阳性细胞百分率高峰出现在48h（F=442．22，P〈0．001）。rIL-6干预下，HK-2细胞形态由卵园型渐转变为长棱型、长条型。【结论】rIL-6可促进HK-2细胞增殖及生物学表型的转化，但大剂量的rIL-6可抑制HK-2细胞增殖。     

8号环状染色体并嵌合体综合征一例

患儿　男,第１胎,足月顺产。１岁１个月时不能自行扶立,双足跟不能着地,只能发单音,可认出父母,反应差。头喜向右歪。双眼睑轻度下垂,眼距正常。鼻无畸形,鼻孔朝天,耳位正常,左耳屏有一小皮赘。心、肺正常。外生殖器正常。四肢及脊柱无异常。掌纹正常。１岁９个月时,双眼睑下垂好转,已能自行扶立,双足跟勉强着地,仍只能发单音。２岁７个月时,双足跟已能着地,能自行站立,单手扶持下可行走,仍不能叫爸妈,反应能力有进步。３次检查测量其身高、体重、头围均落后于同龄正常婴幼儿。患儿父母非近亲结婚,无放射线接触史,患儿…     

Laminin和survivin的表达与胆囊癌临床病理特征的关系

目的:研究laminin和survivin蛋白在原发性胆囊癌组织中的表达情况,及其与癌组织类型、病理分级和转移状况的关系。 方法:应用免疫组织化学方法检测49例原发性胆囊癌、21例胆囊腺瘤和13例慢性胆囊炎组织中laminin和survivin蛋白的表达。 结果:胆囊黏膜内癌或原位癌细胞基底膜laminin线性染色完整；NevinⅡ期胆囊癌组织表现为基底膜不完整,变薄,断裂,或缺损；临床NevinⅢ、Ⅳ、Ⅴ期胆囊癌，则无基底膜形成，在肿瘤组织周围，laminin表达类型呈碎片状或断线状和连续线状，部分癌组织内laminin染色消失和癌细胞浆内有laminin弱染色。胆囊癌组织中survivin阳性表达率明显高于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织，但survivin的阳性表达与胆囊癌细胞分化程度、病理分级和转移无关(P>0.05)。且胆囊癌组织中laminin的连续线断裂或缺失,与胆囊癌组织中survivin的表达情况无相关性。 结论:胆囊癌基质中laminin的表达类型与胆囊癌的侵袭和转移有关，而survivin在胆囊癌中表达增加，但两者之间似乎无关联。      

高效液相色谱法测定人子宫、输卵管及血清中氧氟沙星浓度

目的建立人组织及血清中氧氟沙星含量的HPLC测定方法。方法采用Hypersil C₁₈柱分离,流动相为乙腈-0.01 moL·L^-1磷酸盐缓冲液-0.5 moL·L^-1四丁基溴化铵(9∶91∶4, pH 2.5),流速1.0 mL·min^-1,在UV 294 nm处测定；样品经匀浆或用液氮冷冻研磨至粉末状，用1%曲拉通-100溶解，乙酸乙酯-异丙醇（9∶1）提取，HPLC测定。结果 氧氟沙星浓度在0.2～8.0 μg·mL^-1与峰高比呈线性关系,最小检测限40 ng·mL^-1,用本法对20例妇产科病人进行药物浓度测定,取得了满意的结果。结论此方法适用于人体组织中氧氟沙星浓度的测定，口服后氧氟沙星在人体组织中有良好的分布。     

重组人IL-6对近曲肾小管上皮细胞增殖及生物学表型的影响

 【目的】观察重组人白细胞介素6（rIL-6）在体外对人近曲肾小管上皮细胞株（HK-2）增殖及生物学表型的影响。探讨rIL-6对HK-2细胞作用的时间-效应及剂量-效应关系。【方法】用MTT比色法检测rIL-6对细胞增殖的影响；用流式细胞术检测rIL-6对细胞周期及α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）阳性细胞百分率的影响；倒置显微镜观察rIL-6对HK-2细胞形态改变的影响。【结果】MTT比色法示，rIL-6在10～50ng／mL作用浓度范围内促进HK-2细胞增殖，呈剂量、时间依赖效应；rIL-6作用浓度为100～200ng／mL时抑制细胞增殖，随作用浓度增加抑制作用加强（F=201．582，P〈0．001），（F=43．943，P〈0．001）。rIL-6影响HK-2细胞的DNA合成。HK-2细胞有基础量的α—SMA表达，25ng／mL rIL-6与HK-2孵育1～48h后，α—SMA阳性细胞百分率高峰出现在48h（F=442．22，P〈0．001）。rIL-6干预下，HK-2细胞形态由卵园型渐转变为长棱型、长条型。【结论】rIL-6可促进HK-2细胞增殖及生物学表型的转化，但大剂量的rIL-6可抑制HK-2细胞增殖。     

甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖作用

目的探讨甘精胰岛素(insulin glargine)和人胰岛素(human insulin)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)的调节作用。方法使用不同浓度的甘精胰岛素和人胰岛素刺激人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,检测不同时间段的细胞增殖作用,探讨抑制ERK1/2激活对细胞增殖的影响。使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果甘精胰岛素和人胰岛素在1、10、100IU.L-1刺激MDA-MB-231细胞96h后均可轻度促进MDA-MB-231细胞增殖,相同条件下甘精胰岛素和人胰岛素的促增殖效应无差异。甘精胰岛素与人胰岛素以10IU.L-1分别刺激48、72、96h后两药均诱导细胞增殖,比较两种药物间增殖效应的差异无统计学意义。甘精胰岛素和人胰岛素均使S+G2/M期细胞比例增加,但两处理组间差异无显著性。ERK1/2抑制剂PD98059可抑制MDA-MB-231细胞增殖;但PD98059不影响甘精胰岛素和人胰岛素对MDA-MB-231细胞增殖的促进作用。结论甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖有类似的轻度促进作用,该作用不依赖于ERK的激活。     

成釉细胞瘤中MMP-2的表达及RNA干扰的抑制作用

目的：研究MMP-2存成釉细胞瘤中的表达和RNA干扰对成釉细胞瘤细胞中MMP-2基因的沉默效应。方法：培养成釉细胞瘤细胞，应用免疫组织化学方法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达；体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体，将siRNA质粘表达载体转染原代培养的成釉细胞瘤细胞，激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效率，RT-PCR检测成釉细胞瘤细胞中MMP-2 mRNA的改变，明胶酶谱法检测MMP-2的变化．应用SPSSI 1．0统计软件中的t检验对结果进行统计学分析。结果：成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达．siRNA质粒表达载体对原代培养的成釉细胞瘤细胞的转染半为41.8％；转染后，成釉细胞瘤细胞的MMP-2 mRNA表达水平显著降低，酶原性MMP-2和活性MMP-2显著减少，P〈0．05结论：体外构建的MMP-2靶向siRNA质粒表达载体可以转染体外培养的成釉细胞瘤细胞，并导致MMP-2基因沉默。