雄性受体大鼠同种肾移植慢性排斥反应中性激素、性别、雄激素受体拮抗剂的作用

背景：在肾移植慢性排斥中，性别、受体体内的激素水平以及雄性激素受体等因素可能对慢性排斥的发生起到一定作用。 目的：观察性激素、雄激素受体拮抗剂及性别对雄性受体大鼠移植肾慢性排斥反应的影响。 设计、时间及地点：观察对照动物实验，于2005—06／2007—06在中山大学动物实验中心完成。 材料：以80只雄性Lewis大鼠为受者，雌性和雄性Fisher大鼠各40只作为供者，建立大鼠同种肾移植慢性排斥反应动物模型。 方法：根据干预药物以及供体性别不同，将大鼠分为8组（n=10），分别为雄性供体对照组、雄性供体睾酮组、雄性供体雌二醇组、雄性供体氟他胺组及雌性供体对照组、雌性供体睾酮组、雌性供体雌二醇组、雌性供体氟他胺组。其中干预药物剂量分别为雌二醇0．025mg／kg、睾酮0．5mg／kg、氟他胺25mg／kg，2个阴性对照组未服用药物，喂养期为20周。 主要观察指标：移植后每4周检测受体大鼠的24h尿蛋白、血肌酐及肌酐清除率；移植后20周处死受体大鼠，对移植肾进行显微镜检、免疫组化、核糖核酸酶保护测定。 结果：①与阴性对照组相比，不论雄性还是雌性供体大鼠的24h尿蛋白水平在睾酮组均升高（P〈0．05），在雌二醇、氟他胺组均降低（P〈0．05）：血肌酐水平、肌酐清除率、平均动脉压各组差异无显著性意义（P〉0．05）。②不同性别的供体以及不同药物对移植肾组织血管内膜增厚、肾小球硬化和间质纤维化程度以及单核巨噬细胞浸润、转化生长因子β mRNA表达程度均有一定影响。③雌性供体组的肾损伤大于雄性供体组。睾酮可以加重肾功能损伤，雌二醇、氟他胺可以减少肾功能损伤。 结论：在大鼠同种肾移植慢性排斥动物模型上，供者的性别对移植肾的功能和组织形态具有明显的影响。睾酮可以加重慢性排斥反应的发生，雌二醇、氟他胺可以明显抑制慢性排斥反应的发生。     

抵抗素在肝脏胰岛素抵抗中的作用及其机制

目的： 探讨抵抗素在肝脏胰岛素抵抗中的作用及其可能的机制。方法： 将载有抵抗素基因的重组腺病毒经尾静脉注射构建高抵抗素血症小鼠模型,同时设正常对照组及病毒对照组,取肝脏组织切片行PAS糖原染色半定量观察肝糖代谢的变化;以Western blotting检测肝腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的磷酸化,以磷酸化AMPK/总AMPK的比值代表AMPK激活程度;以实时 PCR检测肝组织糖异生关键酶葡萄糖6磷酸酶（G6Pase）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）mRNA表达水平的变化。结果： 重组腺病毒注射第5 d,获得血中抵抗素高表达构建了高抵抗素血症动物模型,糖原染色示高抵抗素血症小鼠肝糖原含量较正常对照及病毒对照组降低,分别为0.78±0.06 vs 0.93±0.13、0.89±0.05（P<0.05）;高抵抗素血症组肝AMPK磷酸化水平较正常对照及病毒对照组下降, 磷酸化AMPK/总AMPK比值分别为0.78±0.06 vs 0.93±0.13、 0.89±0.05（P<0.05）。高抵抗素血症小鼠G6Pase和PEPCK 的mRNA表达升高,高抵抗素血症组、对照组及空载病毒组G6Pase分别为2.136±0.857 vs 1.353±0.490、 1.250±0.770 （P<0.05）;高抵抗素血症组、对照组及空载病毒组 PEPCK分别为3.54±0.90 vs 2.75±0.78、 2.63±0.67（P<0.05）。结论： 抵抗素可能通过抑制肝脏AMPK活性,增加肝糖异生关键酶的表达而影响机体肝糖代谢,降低肝糖储量,参与肝脏胰岛素抵抗的形成。     

C57BL/6哮喘小鼠细胞内镁含量与肺组织β2受体mRNA表达的相关性研究

目的：探讨细胞内镁含量对C57BL/6哮喘小鼠肺组织β₂受体mRNA表达的影响。方法:健康4－6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠96只，体重(12±2)g，随机数字表法分为A、B、C、D 4组，每组各24只。应用鸡卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。A、B组予低镁饲料喂食，C、D组予正常镁饲料喂食。B、D组腹腔内注射沙丁胺醇诱导β₂受体低调节，A、C组腹腔内注射生理盐水作对照。第1 d、21 d、34 d各组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂受体mRNA及蛋白表达。 结果:1 d血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达各组间差异无显著（均P>0.05）。21 d、34 d C组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达均显著高于A组［21 d：(0.84±0.09)mmol/L vs （0.57±0.10)mmol/L、(2.39±0.14)mmol/L vs （2.11±0.08)mmol/L、(0.75±0.09)mmol/L vs （0.59±0.06)pmol/g、（88.50±8.50)pmol/g vs （60.10±7.70)pmol/g，均P<0.05；34 d：(0.67±0.10)mmol/L vs (0.51±0.09)mmol/L、(2.17±0.08)mmol/L vs (2.05±0.09)mmol/L、(0.61±0.05)pmol/g vs (0.53±0.06)pmol/g、(76.60±7.10)pmol/g vs (58.00±7.60)pmol/g，均P<0.05］；21 d、34 d D组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达亦显著高于B组［21 d：(0.95±0.33)mmol/L vs (0.46±0.09)mmol/L、(2.32±0.18)mmol/L vs (1.87±0.14)mmol/L、(0.73±0.10)pmol/g vs (0.43±0.07)pmol/g、(96.90±8.00)pmol/g vs (47.90±4.90)pmol/g，均P<0.05；34 d：(0.71±0.10)mmol/L vs (0.31±0.08)mmol/L、(1.66±0.13)mmol/L vs (1.45±0.16)mmol/L、(0.40±0.07)pmol/g vs (0.33±0.05)pmol/g、(61.50±3.20)pmol/g vs (35.30±7.10)pmol/g，均P<0.05］。结论:细胞内镁缺乏的C57BL/6哮喘小鼠肺组织β₂受体表达减少，在激动剂作用下更易发生β₂受体低调节。     

棕榈酸与脂多糖协同促进主动脉平滑肌细胞MCP-1的表达

目的研究棕榈酸及脂多糖(LPS)对主动脉平滑肌细胞MCP-1表达的影响及可能的机制。方法使用棕榈酸和(或)LPS对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5)处理24h后,应用RT-qPCR、ELISA法检测MCP-1表达及应用RT-qPCR和Western Blotting法检测toll样受体4 (TLR4)表达情况;细胞在TLR4抑制剂(TAK-242)预处理1 h后加人棕榈酸和(或)LPS处理24h,检测MCP-1表达情况。结果使用棕榈酸和(或)LPS处理的A7r5细胞,其MCP-1 mRNA表达水平和蛋白质分泌增加,LPS增强由棕榈酸诱导的MCP-1的表达;棕榈酸和LPS均可上调TLR4蛋白质表达,两者同时作用于A7r5细胞时,TLR4蛋白表达水平进一步升高;T AK242 (5μM)处理A7r5细胞后,棕榈酸及LPS诱导的MCP-1蛋白分泌减少。结论棕榈酸与LPS通过TLR4协同促进主动脉平滑肌细胞MCP-1表达,参与动脉粥样硬化病变过程。     

C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道mRNA表达

【目的】观察C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道（TRPM6）mRNA的表达,探讨哮喘低镁血症的可能原因。【方法】健康4～6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠48只,体质量（12&#177;2）g,随机数字表法分为哮喘组和对照组,每组各24只。哮喘组应用卵蛋白（OVA）建立哮喘小鼠模型。第1天（1d）、21d、34d天每组分别随机抽取8只检测血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA的表达。【结果】1d血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平哮喘组与对照组之间差异无显著性：[（0.85&#177;0.07vs.0.89&#177;0.12）mmol/L、（2.48&#177;0.14vs.2.49&#177;0.07）mmol/L、0.51&#177;0.08vs.0.49&#177;0.06,P均〉0.05];21d哮喘组血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平均显著低于对照组：[（0.84&#177;0.09vs.0.95&#177;0.07）mmol/L、（2.39&#177;0.14vs.2.44&#177;0.09）mmol/L、0.32&#177;0.06vs.0.52&#177;0.05,P均〈0.05];34d哮喘组血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平亦显著低于对照组：[（0.67&#177;0.10vs.0.94&#177;0.10）mmol/L、（2.17&#177;0.08vs.2.43&#177;0.08）mmol/L、0.24&#177;0.05vs.0.53&#177;0.06,P均〈0.05]。肾组织TRPM6mRNA表达水平与血浆Mg^2＋浓度呈正相关（r=0.630,P〈0.001）;肾组织TRPM6mRNA表达水平与红细胞内Mg^2＋浓度呈正相关（r=0.715,P〈0.001）。【结论】肾组织TRPM6mRNA的低表达可能是导致C57BL/6哮喘小鼠低镁血症的原因。     

抵抗素在肝脏胰岛素抵抗中的作用及其机制探讨

目的探讨抵抗素在肝脏胰岛素抵抗中的作用及其可能的机制。方法将载有抵抗素基因的重组腺病毒经尾静脉注射构建高抵抗素血症小鼠模型,同时设正常对照组及病毒对照组,取肝脏组织切片行PAS糖原染色半定量观察肝糖代谢变化;以Western blot检测肝腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化,以磷酸化AMPK/总AMPK的比值代表AMPK激活程度;以实时PCR检测肝组织糖异生关键酶葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEP-CK)mRNA表达水平的变化。结果重组腺病毒注射d5获得血中抵抗素高表达构建了高抵抗素血症动物模型,糖原染色示高抵抗素血症小鼠肝糖原含量较正常对照及病毒对照组降低(P<0.05);高抵抗素血症组肝AMPK磷酸化水平较正常对照及病毒对照组下降,磷酸化AMPK/总AMPK比值分别为0.78±0.06vs0.93±0.13,0.89±0.05(P<0.05)。高抵抗素血症小鼠G6Pase和PEPCK的mRNA表达升高,G6Pase分别为2.136±0.857vs1.353±0.49,1.250±0.77;PEPCK分别为3.54±0.90vs2.75±0.78,2.63±0.67(P<0.05)。结论抵抗素可能通过抑制肝脏AMPK活性,增加肝糖异生关键酶的表达而影响机体肝糖代谢,降低肝糖储量,参与肝脏胰岛素抵抗的形成。     

Exendin-4对人肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的:探讨Exendin-4对人肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法:给予不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0nmol/L)的Exendin-4刺激HepG2,使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果:Exendin-4在0.1、1.0nmol/L水平对人肝癌细胞HepG2无明显促进增殖作用,在10.0、100.0nmol/L水平有明显促进增殖作用,差异具有统计学意义(P<0.05),呈现出浓度、时间依赖性地促进HepG2的增殖,并且随着Exendin-4水平的增加,HepG2G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期及G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05)。结论:Exendin-4在低浓度时对人肝癌细胞HepG2无明显促进增殖作用,但浓度增加到一定水平时具有促进增殖作用,且呈现时间依赖性促进H epG2的增殖效应。     

替米沙坦对高脂饮食大鼠肥胖和血脂水平的影响

目的 探讨运用替米沙坦阻断肾索-血管紧张素系统(RAS)对大鼠肥胖和血脂水平的影响.方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、对照治疗组、高脂组、高脂治疗组,分别用正常饮食、正常饮食联合替米沙坦、高脂饮食、高脂饮食联合替米沙坦处理.各组大鼠体质量每周测量一次,喂养10周后取大鼠静脉血检测血脂,测量内脏脂肪质量,计算Lee's指数.结果 高脂饮食组大鼠平均体质鼍随时间变化的趋势显著高于对照组和高脂治疗组(P=0.046,P=0.035).高脂治疗组大鼠平均体质量的增加和平均内脏脂肪质量均显著低于高脂组(P=0.012,P=0.024).高脂治疗组大鼠平均甘油三酯(TG)水平显著低于高脂组(P=0.002),但平均高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平显著高于高脂组(P=0.023).结论 替米沙坦可以抑制大鼠高脂饮食引起的肥胖,同时改善高脂饮食引起的血脂紊乱.     

不同糖耐量人群的血脂多糖水平及其与胰岛素抵抗、β细胞分泌功能的关系

目的 研究不同糖耐量人群的血脂多糖水平及其与胰岛素抵抗、β细胞分泌功能的关系.方法 纳入新诊断的2型糖尿病患者(T2DM组)23例、糖耐量受损者(IGT组)21例和糖耐量正常者(NGT组)23名.血清脂多糖水平采用鲎变形细胞溶解物试验法测定,脂多糖toll样受体4(TLR4)在血浆单核细胞表面的表达采用流式细胞学方法测定,并测定一次高脂饮食后脂多糖在餐后0.5h及2h的变化.胰岛素抵抗指标采用稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)来评估;β细胞分泌功能采用稳态模型评估的胰岛素β细胞功能指数( HOMA-β )/HOMA-IR、早期30 min内胰岛素变化与血糖变化的比值(ΔIns30/ΔG30)/HOMA-IR、120 min内胰岛素曲线下面积(AUCIns120min)/HOMA-IR评估.结果 各组在高脂饮食后的2h脂多糖均较空腹脂多糖显著升高[NGT:0.96(0.33,0.99)对0.62(0.22,0.64),IGT:1.08(0.53,1.22)对0.71(0.39,0.82),T2DM:1.23(0.62,1.43)对0.86(0.45,0.94),EU/ml,均P＜0.01].T2DM组及IGT组的空腹脂多糖、0.5h脂多糖、2h脂多糖和空腹TLR4均高于NGT组[空服脂多糖:0.86(0.45,0.94),0.71(0.39,0.82)对0.62(0.22,0.64),EU/ml;0.5h脂多糖:1.10(0.55,1.18),0.84(0.50,1.07)对0.73(0.31,0.76),EU/ml;2h脂多糖:1.23(0.62,1.43),1.08(0.53,1.22)对0.96(0.33,0.99),EU/ ml;空腹TLR4:36.96(17.22,55.19),30.34(15.00,45.18)对15.66(6.09,9.76),MIF/105细胞,均P＜0.01].相关分析显示,所有受试者的空腹脂多糖、120 min内脂多糖曲线下面积(AUCLPS120min)、空腹TLR4与胰岛素抵抗指标正相关(P＜0.05),与β细胞分泌功能指标负相关(P＜0.05).多重线性回归分析显示,空腹脂多糖是HOMA-IR的独立相关因素,0.5h脂多糖是(AIns30/ΔG30 )/HOMA-IR和AUCIns120min/HOMA-IR的独立相关因素.结论 不同糖耐量人群的空腹及高脂饮食后的脂多糖水平及空腹TLR4水平存在差异,并与胰岛素抵抗、β细胞分泌功能具有一定的相关性,提示脂多糖可能与血糖调节异常的发生发展有关.     

替米沙坦对高脂饮食诱导的大鼠体重增加和血脂异常的影响

 目的 探讨特异性阻断血管紧张素Ⅱ受体是否抑制高脂饮食诱导的肥胖,以及改善血脂紊乱。方法 40只雄性SD大鼠随机分为高脂治疗组、高脂组、对照治疗组和对照组。高脂组给予高脂饲料,对照组给予标准大鼠饲料,高脂治疗组给予高脂饲料＋替米沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃,对照治疗组给予标准大鼠饲料＋替米沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃。共饲养10周,每周称重（g。10周后经大鼠上腔静脉取血,测血脂、FFAs及胰岛素水平。应用RT-PCR检测内脏脂肪的脂联素、TNF-α、IL-6、CD68和MCP-1的mRNA表达水平。结果 4组大鼠体重随时间变化的趋势的差别有统计学意义（P＝0.002,喂养10周后高脂治疗组大鼠平均体重增加低于高脂组（P＝0.012,高脂治疗组大鼠平均血TG水平显著低于高脂组（P＝0.002;高脂治疗组平均血HDL-C水平显著高于高脂组（P＝0.023;高脂治疗组和高脂组大鼠血TC水平无显著差异（P＝0.054;高脂治疗组和高脂组大鼠血LDL-C水平无显著差异（P＝0.842;高脂饮食减少大鼠脂肪组织中脂联素mRNA表达水平（P＝0.014,替米沙坦对大鼠脂肪组织中脂联素mRNA表达水平无影响（P＝0.063;高脂饮食和替米沙坦对TNF-α、IL-6、CD68和MCP-1的mRNA表达水平均无影响（P>0.05。 结论 阻断RAS系统抑制饮食诱导的体重和内脏脂肪的增加,并改善高脂饮食引起的血脂异常。