靶向人端粒酶反转录酶RNA干扰载体质粒的构建与筛选

目的:设计靶向人端粒酶反转录酶的RNAi序列,构建shRNA表达载体质粒和hTERT真核表达质粒,采用共转染工具细胞筛选出有效靶点.方法:首先以EASYMsiRNA软件针对hTERT设计5个靶点siRNA序列和1条通用阴性对照序列,合成shRNA oligo表达框架,将其分别连接至经酶切消化的载体质粒、pGCsi-U6/Neo/GFP、pGCL-GFP,重组质粒转化1)H5α,阳性克隆进行PCR与测序鉴定;然后从cDNA文库中利用PCR钓取hTERT基因片段,与表达载体pEGFP-C1分别进行双酶切、纯化及定向连接、重组、转化,阳性克隆行PCR与测序鉴定,荧光镜检GFP表达;最后上述2个质粒系统共转染293T细胞,Western印迹检测hTERT蛋白表达水平,筛选最有效序列.应用SPSS16.0软件包对所得数据进行单因素方差分析.结果:BLAST检索5条hTERT siRNA序列均能100%命中,且不与其他基因同源:PCR鉴定及阳性克隆测序验证shRNA oligo与载体质粒成功连接、重组.hTERT基因PCR钓取片段产物大小1.4 Kp,经酶切与质粒连接,形成pEGFP-C1-hTERT表达载体,阳性克隆PCR、测序鉴定确定成功重组;转染293T细胞48h时荧光镜F可观察到GFP标记的hTERT融合蛋白.hTERT表达质粒和shRNA载体质粒共转染293T细胞,48h时Western印迹榆测结果显示:实验各组hTERT蛋白量均有不同程度减少,而内参对照B-aetin和GAPDH尤明显变化.经β-actin校正,得到各组hTERT蛋向相对表达量:KD No.1-5实验组与NC组相比,hTERT基因表达均得到不同程度的敲减(54.61%～76.84%.P＜0.05),其中No.4敲减效能最高.结论:5条RNAi设计序列均可有效、特异性地沉默hTERT基因的转录和表达水平,其中以5'-GCAAGTTGCAAAGCArrGGAA-3'敲减效能最优;构建外源基因的过表达载体质粒转染工具细胞,可作为RNAi敲减效率筛选的验绩标靶.     

颌骨中心性粘液表皮样癌的临床表现及治疗

目的 :探讨颌骨中心性粘液表皮样癌 (centralmucoepidermoidcarcinomaofthejaws ,CMCJ)的临床特点及诊治原则。方法 :回顾 5例CMCJ临床资料并进行随访。结果 :CMCJ常见临床表现为局部肿胀和疼痛 ,X线表现为单房或多房透光阴影 ,光镜下所见同涎腺粘液表皮样癌。所有病例均行根治术 ,1例术后 6个月死于并发症 ,4例经 0 .5 -14年随访 ,未见复发及转移。结论 :CMCJ的确诊有赖于详尽的临床检查 ,治疗应首选根治术     

人内皮抑素基因导入对裸鼠舌鳞癌移植瘤的抑制影响

目的:探讨经体内注入人内皮抑素(humanendostatin,hES)基因治疗口腔鳞癌的可行性。方法:荷瘤人舌鳞癌Tca8113细胞裸鼠瘤体内和肌内分别注射含hES的基因质粒,观察转入hES基因对舌鳞癌移植瘤生长的影响,免疫组织化学检测肿瘤组织中hES及血管内皮细胞生长因子(vascularvesselendotheliacellgrowthfactor,VEGF)的表达,Weidern法行肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)计数,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,采用精确概率法和单因素方差分析进行统计学处理。结果:荷瘤注射hES后第16天,瘤体注射组抑瘤率为75.0%,肌内注射组抑瘤率为66.1%(P<0.01)。免疫组织化学检测结果显示,hES在瘤体注射组和肌内注射组肿瘤中的表达率分别为90.0%和85.0%,均高于对照组的20.0%(P<0.01)。2实验组肿瘤MVD值分别为18.60±3.44和16.70±2.63,均低于对照组的22.40±3.41(P<0.01)。流式细胞仪检测发现,瘤体注射和肌内注射hES基因质粒后,肿瘤细胞凋亡率分别为11.36%±3.20%和8.08%±2.00%,均高于对照组的1.80%±0.50%(P<0.01)。结论:注射hES基因具有抑制舌鳞癌Tca8113细胞移植瘤生长的效应。     

颌面部恶性"蝾螈"瘤1例

恶性"蝾螈"瘤(malignant "triton"tumor)是指含有横纹肌肉瘤成份的恶性神经鞘瘤.临床上较罕见,目前国内报告18例,发生于口腔颌面部的仅3例[1].2001年5月我科收治1例,现报告如下.     

884例先天性唇腭裂的临床资料分析

目的：了解近7年先天性唇腭裂的发病情况并分析其发病因素。方法：对1994年1月－2001年1月884例先天性唇腭裂住院手术患者进行回顾性统计分析。结果：唇裂合并腭裂、唇裂或伴牙槽裂、单纯腭裂分别占56．79％、22．06％和21．15％。男女比例为2．25：1。结论：多基因遗传和胚胎的环境因素包括感染、药物、精神因素是唇腭裂的重要病因。     

ICU在老年口腔癌患者术后监护和治疗中的作用

目的:探讨ICU在老年口腔癌患者术后的监护和治疗作用及必要性。方法:62例老年患者术前完善各项辅助检查排除手术禁忌,均接受根治性手术。术后转入ICU监护和治疗1至3天,其中28例行气管切开术,其余34例患者保留气管插管。结果:3例患者术后心电图提示心肌供血不足,4例出现心律失常,2例拔除气管插管后发生呼吸道梗阻。经相关处理,患者得到及时抢救,62例患者无1例死亡。结论:ICU能够对老年口腔癌患者术后进行及时、连续和系统的严密监护和治疗,有利于降低术后死亡率。     

老年口腔癌患者手术前后血糖的比较

目的：比较老年口腔癌患者手术前后血糖的变化.方法：对57例70岁以上行口腔癌根治术的患者手术前后空腹血糖进行比较,并与同期其他年龄段行口腔癌根治术患者手术前后空腹血糖进行对比,行统计学分析.结果：所有口腔癌根治术患者术后血糖均较术前升高,而老年口腔癌患者术后血糖升高,较其他年龄段患者血糖升高差异有显著性.结论：胰腺功能和肾功能的减退,是老年口腔癌患者术后血糖升高的主要原因;术后严密的血糖监测和合理,适量的应用胰岛素,是避免老年口腔癌患者术后血糖升高的关键.     

带血管蒂游离组织瓣同期修复舌癌术后缺损及临床评价

目的 评价带血管蒂游离组织瓣修复舌嶙癌术后缺损的外形及功能恢复效果。方法32例舌癌患者进行根治术的同期．分别采用带血管蒂的前臂游离皮瓣、足背游离皮瓣进行修复，术后观察组织瓣成活状况．舌功能和外形，并评价表评价患者的语言和（或）吞咽的功能恢复情况.结果 32例中,31例成活,成活率93.9%,术后观察见舌形态良好,语言,咀嚼,吞咽,证食等功能恢复至正常或接近正常,未发现复发及死亡病倒.结论 舌癌根治术同期选择带血管蒂游离组织瓣修复,可以较好地恢复舌的功能,并可能提高生存率.     

ICU在大型口腔癌手术后的监护作用和必要性

目的:探讨ICU在大型口腔癌手术后监护治疗中的作用及必要性。方法:122例患者术前完善各项辅助检查,排除手术禁忌,均接受根治性手术。其中28例行气管切开术,其余94例患者保留气管插管,所有患者术后带气管套管转入ICU监护治疗。结果:122例患者术后无一例死亡,6例术后心电图出现心肌缺血,4例出现心律失常并及时纠正;3例患者拔管后出现呼吸道梗阻,经抢救后呼吸平稳。结论:ICU能够对大型口腔癌患者进行及时、连续和系统的严密监护和治疗,有利于降低术后死亡率。     

放射诱导调控序列的合成及其辐射诱导特性的研究

目的　合成放射诱导调控序列并鉴定其辐射诱导特性。方法　利用人工寡核苷酸片段合成含有 6个重复CArG元件的放射诱导调控序列 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞检测其辐射诱导特性。结果　低剂量放射线照射可诱导这种人工调控序列增强GFP在Tca8113细胞中的表达 ,且 3Gy剂量最为明显 ,提高到放射前的 16 1%。结论　人工合成放射诱导调控序列在低剂量放射线照射下能明显增强其下游外源性基因的表达 ,为进一步研究放射 -基因治疗奠定了基础。