原发性肾病外周血肿瘤坏死因子与中医辨证

肿瘤坏死因子(TNF),主要是由激活的巨噬细胞产生的一种细胞因子,大量资料表明,TNF具有多种生物学活性,是机体炎症及免疫反应的重要调节因子,在肾小球损伤及肾间质病变中具有重要作用。结合中医学理论,笔者对TNF与中医分型关系进行了探讨,现报道如下。1　材料与方法检测对象　本组66例原发性肾小球疾病(下称“肾病”)患者为本科门诊及肾内科住院病人,已除外各种继发性肾脏疾病,均符合1992年6月中华肾脏病学会制订的原发性肾小球疾病的临床分型标准[1]。本组66例中,诊为慢性肾炎23例,隐匿性肾炎30例,肾病综合征13例。正常人30例,均为本院…     

RNAi沉默Megalin基因对尿白蛋白激活肾小管上皮细胞的影响

目的探讨Megalin基因对尿白蛋白刺激肾小管上皮细胞(HK-2)后释放趋化因子的影响。方法构建长期下调人Megalin基因表达的慢病毒载体,并包装慢病毒感染人HK-2细胞,以此获取Megalin表达下调的HK-2细胞株,用尿白蛋白刺激此细胞株,检测对照组和干扰组细胞释放MCP-1、RANTES、Fractalkine等趋化因子的表达变化。结果与对照组相比,干扰组MCP-1、Fractalkine的表达有显著性下降,RANTES的表达没有明显变化。结论 Megalin受体在介导肾小管上皮细胞白蛋白内吞的同时,能刺激趋化因子的释放;Megalin受体表达下调能显著抑制趋化因子的释放从而缓解炎症刺激。     

小剂量FK778对大鼠移植肾慢性排斥反应的预防作用

目的探讨小剂量FK778对大鼠移植肾慢性排斥反应的预防作用。方法应用显微外科技术制作移植肾慢性排斥反应大鼠模型，将肾移植大鼠分为两组。肾移植后第16周开始治疗组大鼠接受FK778每日5mg／kg体重灌胃，对照组接受赋形剂。移植后每4周行24h尿蛋白含量测定，第24周处死大鼠，对移植肾组织行组织学、免疫组织化学及实时定量RT—PCR检测。结果治疗组大鼠蛋白尿、肾组织病理损害程度，淋巴细胞和单核／巨噬细胞浸润程度和对照组比较显著减轻，肾组织生长因子TGF-β基因的表达也减少。结论小剂量FK778能预防大鼠移植肾慢性排斥反应。移植肾组织T淋巴细胞和单核／巨噬细胞浸润减轻，TGF-β生长因子基因表达的减少，可能是其预防同种移植肾慢性排斥反应机制中的重要环节。     

HMG-CoA还原酶抑制剂对肾病综合征大鼠肝脏低密度脂蛋白受体表达的影响

目的观察在大鼠肾病综合征模型中使用3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂洛伐他汀（Lovastatin）治疗对肝脏低密度脂蛋白（LDL）受体表达的影响，探讨他汀类药治疗肾病综合征高脂血症的机制。方法大鼠2次尾静脉注射阿霉素建立肾病综合征大鼠模型；采用灌胃法给予大鼠洛伐他汀治疗2周。采用Western blot和RT-PCR技术分别检测LDL受体蛋白和其mRNA在肝脏的表达，同时检测大鼠相关血生化指标。结果肾病综合征大鼠洛伐他汀治疗2周后，血清总胆固醇、LDL胆固醇和三酰甘油以及尿蛋白均显著降低（均P〈0．05），血清白蛋白显著升高（P〈0．05），血肌酐在各组间差异无显著性意义（P〉0．05）；肝脏LDL受体蛋白较肾病综合征组显著增加（P〈0．01）；肝脏LDL受体mRNA水平在各组间差异无显著性意义。结论肾病综合征大鼠经洛伐他汀治疗后，其肝脏LDL受体缺乏得到明显改善，伴随的高脂血症也得到明显改善。     

重组人IL-6对近曲肾小管上皮细胞增殖及生物学表型的影响

【目的】观察重组人白细胞介素6（rIL-6）在体外对人近曲肾小管上皮细胞株（HK-2）增殖及生物学表型的影响。探讨rIL-6对HK-2细胞作用的时间-效应及剂量-效应关系。【方法】用MTT比色法检测rIL-6对细胞增殖的影响；用流式细胞术检测rIL-6对细胞周期及α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）阳性细胞百分率的影响；倒置显微镜观察rIL-6对HK-2细胞形态改变的影响。【结果】MTT比色法示，rIL-6在10～50ng／mL作用浓度范围内促进HK-2细胞增殖，呈剂量、时间依赖效应；rIL-6作用浓度为100～200ng／mL时抑制细胞增殖，随作用浓度增加抑制作用加强（F=201．582，P〈0．001），（F=43．943，P〈0．001）。rIL-6影响HK-2细胞的DNA合成。HK-2细胞有基础量的α—SMA表达，25ng／mL rIL-6与HK-2孵育1～48h后，α—SMA阳性细胞百分率高峰出现在48h（F=442．22，P〈0．001）。rIL-6干预下，HK-2细胞形态由卵园型渐转变为长棱型、长条型。【结论】rIL-6可促进HK-2细胞增殖及生物学表型的转化，但大剂量的rIL-6可抑制HK-2细胞增殖。     

蛋白尿激活肾小管上皮细胞的分子机制

肾小球基膜是血浆蛋白的机械和电荷屏障。生理状况下，仅低分子量的血浆蛋白能从基膜滤出。肾小球基膜损伤后，中、高分子量的血浆蛋白滤出增加，导致近端肾小管过度重吸收和转运蛋白。近年来对伴蛋白尿的慢性肾脏疾病进行性恶化的病理机制进行了广泛研究。     

蛋白尿在IgA肾病小管间质损害中的意义

目的探讨蛋白尿对IgA肾病（IgAN）小管间质病理变化的影响.方法对68例IgA肾病患者临床病理资料进行回顾性分析.根据24小时尿蛋白排泄量将68例患者分为A组（21例,＜1 g/24 h）、B组（33例,1.0～3.0 g/24 h）和C组（14例,＞3.0 g/24 h）.小管间质病理损害按Katafuchi R的半定量标准评分.结果蛋白尿程度增加,肾小管间质病理损害明显,组间比较有显著性差异（P＜0.05）.蛋白尿程度与尿视黄醇结合蛋白含量及血清C反应蛋白水平呈显著正相关（r=015302,P＜0102）.结论蛋白尿可能通过促进小管间质的免疫炎症反应,加重小管间质的损伤,是IgA肾病慢性进展的重要影响因子之一.对IgA肾病蛋白尿进行早期干预治疗有重要临床意义.     

罗格列酮对尿酸诱导HPMC表达炎症因子的影响

目的 观察600 μmol/L尿酸浓度在不同时间范围内(24、48、72 h)诱导人HPMC表达炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、整合素连接激酶( ILK)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的作用以及罗格列酮对其干预作用.方法 (1)细胞培养及分组:待生长状况良好的HPMC株60%～80%细胞贴壁后,无血清培养基同步24 h,将细胞分为对照组(只使用培养液)、尿酸组(培养液+ 600 μmol/L尿酸)、罗格列酮组(培养液+ 15 μmol/L罗格列酮)、尿酸+罗格列酮组(培养液+ 600 μmol/L尿酸+15 μmol/L罗格列酮).干预组分别先采用15 μmol/L罗格列酮预处理细胞4 h,然后根据分组给予相应的刺激.(2)指标检测:采用酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测HPMC上清液中MCP-1蛋白的浓度、采用Western blot 方法、荧光定量PCR技术检测HPMC的ILK、TGF-β1蛋白和基因表达.结果 (1)尿酸刺激组细胞MCP-1的蛋白表达呈时间效应性,均较空白对照组显著升高;(2)HPMC在尿酸刺激下,ILK、TGF-β1的基因和蛋白表达于24、48、72 h均较空白对照组显著升高,但其基因表达于48 h已开始下降,与对照组相比差异无显著性,蛋白表达在48 h仍持续升高,呈现出时间依赖关系.罗格列酮部分抑制MCP-1蛋白表达、部分抑制尿酸诱导的ILK、TGF-β1的基因和蛋白表达的上调.结论 尿酸能直接作用于人HPMC,诱导炎症分子的超表达,可能是其腹膜慢性纤维化形成的重要机制之一;罗格列酮能够抑制尿酸诱导的HPMC炎症因子的表达,可能具有拮抗腹膜慢性纤维化的作用.     

稳定长期沉默肾小管上皮细胞Megalin基因表达的载体构建

目的：为探讨沉默Megalin基因对肾小管上皮细胞Megalin蛋白诱导表达的抑制作用,构建长期下调Megalin蛋白表达的慢病毒载体作为研究工具。方法：分别用30,50,80,100nmol/LsiRNA或对照siRNA转染人HK-2细胞,48h后用免疫荧光和RT-PCR鉴定Megalin基因表达筛选有效的序列,用有效或对照组序列的正义链和反义链,中间加loop环,两端加入XhoⅠ和hindⅢ的酶切位点作为目的序列,经过XhoⅠ和HindⅢ双酶切的慢病毒载体质粒PLL3.7作为载体,将目的序列与载体连接,转化到XL-10Gold高感受态大肠杆菌中,XhoⅠ和HindⅢ双酶切初步鉴定,测序进一步鉴定正确的序列。得到长期下调人Megalin基因表达的慢病毒载体,并包装慢病毒感染人HK-2细胞,免疫组化鉴定干扰有效,以此获取Megalin表达下调的HK-2细胞株。结果与结论：成功筛选出有效干扰人Megalin基因的siRNA,通过慢病毒感染成功获得长期稳定下调人Megalin表达的肾小管上皮细胞株。