甲肝IgM抗体诊断试剂盒在甲肝病毒抗原检测中的应用

将HAV IgM-Ab诊断试剂盒用HAV-Ag标准品调控灵敏度后,用于检测HAV-Ag,并比较快速检测法和常规过夜法两种检测方法的测定效果,以选择在甲肝疫苗生产中,抗原检测的合适方法.经过调控灵敏度后,抗HAV IgM诊断试剂盒完全可以用来检测HAV-Ag.并可以正确评价HAV-Ag滴度,HAV感染性滴度.适用于甲肝疫苗的检定工作.     

肠道病毒71型疫苗上市后疫苗保护效果和免疫原性分析

目的 分析肠道病毒71型（EV-A71）疫苗上市接种后的疫苗保护效果和免疫原性。方法 采用队列研究于2017年10－12月在上海市静安区招募符合纳入标准的预防接种门诊受种者为研究对象,按0、30 d程序接种疫苗者纳入接种组,不接种疫苗者纳入对照组,随访观察1年,评估疫苗保护效果和接种2剂次疫苗后抗体水平及阳转率。结果 共纳入3 018名8~20月龄的儿童,接种组1 211人,对照组1 807人,经过1年随访,EV-A71疫苗对EV-A71感染引起的手足口病保护率为100.00%（95% CI：-66.99%~100.00%）。接种组中124人检测了中和抗体,接种首剂疫苗后60 d抗体几何平均滴度（GMT）为41.76（95% CI：35.60~49.34）,接种后365 d GMT为28.44（95% CI：23.59~34.54）。结论 EV-A71疫苗对于儿童有良好的免疫应答,EV-A71感染引起的手足口病病例较少,需进一步观察。     

猴血SV40抗体和SV40 DNA携带关系分析

目的　检测 5 7份恒河猴血清及对应的猴血中抗SV4 0抗体、SV4 0DNA的携带情况 ,找出抗体滴度与DNA携带的相关关系。方法　用间接免疫荧光法检测猴血中SV4 0中和抗体 ,聚合酶链反应 (PCR)法检测SV4 0st抗原DNA的携带情况。结果　 5 7份猴血清中 ,SV4 0抗体阳性率为 93% (5 3 5 7) ,抗体滴度最高为 1∶12 80 ,最低为 1∶10 ,GMT为 15 9.5 6 ,PCR检测猴血淋巴细胞SV4 0DNA阳性率为 2 4 .5 6 % (14 5 7) ,当抗体为 1 80以下时 ,病毒整合于血细胞 ,1∶80以上时 ,对st抗原基因的整合有抑制作用。结论　恒河猴SV4 0DNA的携带情况与抗体阳性和滴度呈反相关     

HRSV A2株细胞低温传代适应减毒指标的初步探索

[目的]分析人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)经人二倍体KMB17细胞低温传代后培养特性的改变.[方法]将HRSV A2株病毒接种到人二倍体KMB17细胞进行低温培养传代,将不同代次的病毒经鼻腔接种豚鼠,于d 7、d 14分别取肺组织作病理切片检查、分离血清进行中和抗体检测,同时测定不同代次病毒的一步生长曲线及温度敏感性特征.[结果]豚鼠经鼻腔接种,接种原代病毒组d 14处死时体重明显较对照组轻,低温第6代组和11代组与对照组接近,3组病毒均引发豚鼠间质性肺炎.低温第6代组和11代组与原代病毒相比,一步生长曲线未发生明显改变,增殖高峰约为9-12 d.[结论]HRSV经鼻腔接种豚鼠能引起强烈的肺部感染,豚鼠可作为HRSV毒力评价的动物模型;HRSV在KMB17细胞上经低温传11代,未出现明显的减毒株特征,还需要进一步减毒.     

人呼吸道合胞病毒不同纯化方法的比较研究

目的比较人呼吸道合胞病毒(HRSV)的2种纯化方法。方法 HRSV经超滤浓缩后,分别采用蔗糖密度梯度离心法和Sepharose 4FF凝胶过滤层析法纯化。对纯化产物进行感染性效价、SDS-PAGE还原电泳分析及Western blot检测,并取目的产物免疫ICR小鼠,检测免疫血清的中和抗体效价。结果经还原电泳,蔗糖密度梯度离心和Sepharose 4FF凝胶过滤层析的纯化产物都在60~70kDa间呈现一主要条带,前者证实为HRSV特异性F蛋白;但在Sepharose 4FF凝胶过滤层析3个样品(第2峰)中检测出目的病毒,感染性效价分别为4.50、4.25和6.25 lgCCID50/ml。两种方法所得纯化产物免疫ICR小鼠均能诱导产生中和抗体,几何平均效价(GMT)为1∶13.93~1∶4.00。含铝佐剂组的抗体阳性率和中和抗体GMT分别是不含铝佐剂组的1.5~2.0倍和1.0~1.4倍。β-丙内酯灭活组的抗体阳性率和中和抗体GMT分别是甲醛灭活组的1.0~1.3倍和1.0~1.1倍。结论蔗糖密度梯度离心法和Sepharose 4FF凝胶过滤层析法均能纯化出HRSV,后者效果更好、效率更高。加铝佐剂有助于提高抗体阳转率;β-丙内酯和甲醛2种灭活剂对免疫效果的影响差异不大。     

SV_(40)的对流免疫电泳及其在脊髓灰质炎活疫苗生产检定中的应用

SV_(40)(Simian Virus)系一种致肿瘤DNA病毒,生产脊髓灰质炎活疫苗必须对培养疫苗的猴肾培养物进行SV_(40)检测,这是世界卫生组织(WHO)法定的重要项目。WHO推荐的检测SV_(40)的方法,如用敏感细胞分离、中和试验,以及其它方法,如蚀斑滴定、免疫荧光、快速荧光病灶试验和免疫过氧化物酶技术等,均需要对SV_(40)敏感的非洲绿猴肾原代或传代细胞。我国无非洲绿猴,进口传代细胞往往代次较高,易失去对SV-(40)的敏感性,这是我国长期不能对脊髓灰质炎活疫苗进行SV_(40)检定,使该种疫苗未能全面达到国际水平的主要障碍。国内虽然建立了中和试验和免疫电镜技术,但前者需要敏感     

残余牛血清蛋白ELISA检测方法的建立及其初步应用

建立检测疫苗中残余牛血清蛋白(CSP)含量的ELISA检测法。将混合的小牛血清分别免疫鸡和家兔,然后分别提取、纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)和兔抗小牛血清抗体IgG。IgY用作包被抗体,IgG用作酶标抗体,四甲基联苯胺(TMB)显色检测残余CSP含量。结果:包被用IgY的最适浓度为25—30μg/mL,用含0.4%明胶的0.01mol/LPBS(pH7.4)溶液作为包被缓冲液,HRPIgG的最适稀释度为1:20001:3000。该方法的检测灵敏度为2.5ng/mL,变异系数为6.3%—9.4%,回收率为90.4%—112.8%,与猪、猴、豚鼠血清皆无交叉反应。10批不含Al(OH)3的疫苗ELISA法与RPHA法(反相间接血凝法)检测结果无显著性差异(P>0.05);而10批含Al(OH)3的疫苗,两种方法检测结果相差很大(P<0.05)。建立的ELISA检测法不受Al(OH)3的影响,简便、特异和灵敏,更适用于检测生物制品中的残余CSP。     

OPV疫苗感染性滴度检测的影响因素分析

目的探索影响口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)感染性滴度检测的主要因素。方法采用96孔组织培养板微量细胞病变法进行感染性滴度检测,分析对检测有影响的各种因素。结果细胞浓度在5～40万个/ml时,所测滴度差异不明显;当细胞浓度在2.5万个/ml时,所测滴度明显降低;33.5℃及35.5℃温度下检测结果之间差异无统计学意义(P>0.5);290～300代细胞所测滴度均低于150～160代细胞所测滴度,差异有统计学意义(P<0.001)。PolioⅡ+Ⅲ多克隆血清对Ⅰ型病毒的交叉抑制值为0.120±0.116;PolioⅠ+Ⅲ多克隆血清对Ⅱ型病毒的交叉抑制值为0.161±0.179;PolioⅠ+Ⅱ多克隆血清对Ⅲ型病毒的交叉抑制植为0.227±0.145。结论温度及细胞浓度不是影响检测结果的敏感因素;细胞代次是影响检测结果的敏感因素;分型滴度检测时不同血清之间交叉抑制值的高低,取决于病毒与血清之间的比例,血清含量越高,交叉抑制值越大。     

赋形剂-甘露醇粉剂细菌内毒素检查法的研究

甘露醇粉剂作为注射用转移因子的赋形剂,由于其作为终产品的一部分,根据国家药品标准WS1—XG—040—2000[1],要求注射用转移因子的细菌内毒素小于7EU/ml,由此首先必须从原辅材料开始,把好质量关,才能保证终产品在国家药品标准的要求范围内。鲎试剂用于药品中细菌内毒素的检测具     

检测甲型H1N1流感病毒富集方法的初步探索

目的探索甲型H1N1流感病毒的富集方法,提高流感病毒核酸检测的灵敏度。方法分别用ProteinA/G及H1N1特异性血清处理流感病毒样品,根据国家流感中心设计的H1N1亚型检测通用引物,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,扩增产物为527bp,来评价病毒的富集效果。结果两种富集方法均能提高检测灵敏度,用ProteinA/G富集处理后检测灵敏度可达10-6,用H1N1特异性血清沉淀富集处理后灵敏度为10-5。结论初步建立的富集甲型H1N1流感病毒方法,有效提高了流感病毒RT-PCR检测的灵敏度,可用于甲型H1N1流感病毒的检测。