心肌损伤修复实验指标：MyoD基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

背景：MyoD基因是肌肉转录因子家族成员之一，转染MyoD基因可以启动肌分化过程，使非肌细胞转变为肌细胞。MyoD基因仅在骨骼肌表达，基于心肌细胞和骨骼肌细胞有相同的收缩装置，可以设想将外源MyoD基因诱导坏死心肌局部的成纤维细胞向具收缩功能的骨骼肌细胞转化，可能会成为临床治疗心衰的又一种方法。目的：构建和鉴定MyoD基因重组腺病毒载体，为研究MyoD对心肌损伤的修复作用提供试验基础。设计：单一样本实验。单位：南京医科大学第一附属医院心脏科。材料：实验于2004-09／2005-09在南京医科大学微生物学与免疫学实验室完成。以MyoD基因和非复制型腺病毒表达载体为研究对象。方法：从pEMSV—MyoD质粒上用聚合酶链反应法扩增出MyoD cDNA片段，再通过聚合酶链反应使MyoD基因加上CACC序列接头，经过定向拓扑克隆使目的基因连接到转移载体上，再通过LR酶促反应，将目的基因转移到腺病毒表达载体DNA上，获得MyoD基因重组的腺病毒DNA，用脂质体转染法转染HEK293A细胞，包装扩增出MyoD基因重组的腺病毒。主要观察指标：聚合酶链反应鉴定和DNA测序来证实MyoD cDNA片段大小和序列的正确性，并测定病毒滴度。结果：经聚合酶链反应鉴定和DNA测序证实MyoD基因重组腺病毒含大小正确的目的片段，其DNA序列正确。病毒滴度为1．3&;#215;10^11pfu／mL。结论：成功构建了MyoD基因重组腺病毒载体。     

获得性免疫缺陷综合征的流行病学研究进展

获得性免疫缺陷综合征AIDS,又称爱滋病。1984年美国Gallo 实验室从AIDS 和前AIDS 病人末梢血淋巴细胞中分离培养出一株病毒,命名为嗜人T 细胞病毒Ⅲ型(HTLV-Ⅲ),病人血清中89～100%查到HTLV一Ⅲ抗体。同时期法国巴斯德研究所Montagnier 等从持续性全身淋巴病(LAS)病人淋巴结中也分离到一株病毒命名为淋巴结病相关病毒(LAV),     

340例儿童急性呼吸道感染常见病毒病原的检测

目的: 了解小儿急性呼吸道感染(acute respiratory tract infection ARTI)中病毒感染状况,为预防和治疗疾病提供依据?方法:收集2009年5月~2010年4月期间340例确诊为ARTI住院患儿的深部鼻咽分泌物(NPS)临床标本,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测常见的7种呼吸道病毒:呼吸道合胞病毒(RSV)?流感病毒(IFV)?副流感病毒(PIV)?人类偏肺病毒(HMPV)?腺病毒(ADV)?鼻病毒(HRV)和肠道病毒(EV)?统计分析各种病毒所致ARTI的临床特点及流行特征?结果:340例标本中共检出212例阳性,阳性率为62.35%?其中RSV感染为132例,阳性率为62.3%;IFV感染为45例?阳性率为21.3%;PIV感染为13例,阳性率为6.1%; HMPV感染为13例,阳性率为6.1%;ADV感染为4 例,阳性率为1.9%; HRV感染为2例,阳性率为0.9%; EV感染为7例,阳性率为3.3%?结论:本地区诊断为ARTI住院儿童中病毒感染率为62.35%,其中以RSV为主?     

用二种诱生剂相继加入脐全血制备γ型和α型干扰素的研究

报道29批人脐带全血干扰素制备中,对同一份脐带全血先籍助PHA刺激产生IFN-γ,72小时后再用NDV诱生IFN-α,和常规法单独用NDV诱生IFN-α进行比较。经统计学处理二者比较P>0.05,无显著性差异。     

流行性喘憋性肺炎的流行病学调查

流行性喘憋性肺炎的流行病学调查杜亚平，陈沛文，吴小玲，姚堃，季晓辉，赵有红，陈慎宝１９９２年１～３月间，靖江市部分乡镇发生了流行性喘憋性肺炎（简称流喘肺炎）流行，现将流行病学调查结果报告如下。１材料与方法１．１流行发生期间对乡防保人员紧急培训，拟订统...     

人疱疹病毒6型感染与口腔鳞癌关系的初步研究

目的研究人疱疹病毒6型(HHV-6)感染与口腔鳞癌的关系。方法用间接免疫荧光试验及聚合酶链反应,分别检测口腔鳞癌和对照组患者血清中抗HHV-6 IgG及外周血单个核细胞中HHV-6 DNA序列;用免疫组化染色法检测口腔鳞癌组织标本中HHV-6抗原。结果16例口腔鳞癌患者和16例其他口腔疾病患者血清中抗HHV-6 IgG的阳性数分别为16例和12例,几何平均滴度分别为1:118和1:64,差异有显著意义(P<0.05)。上述两组患者HHV-6 DNA的检出数分别为10例和2例(P<0.05)。其中12例口腔鳞癌组织标本经免疫组化染色检测,9例(9/12)HHV-6抗原阳性,而8例对应癌旁组织中,阳性者仅有2例(2/8),两者间差异有显著意义(P<0.05)。结论HHV-6可能是口腔鳞癌发生的诱因,在肿瘤发生发展中起一定作用。     

EBV-LMP2A重组腺病毒体外转染树突状细胞激发特异性CTL的研究

目的：用EBV潜伏膜蛋白2A(EBV-LMP2A)重组腺病毒转染树突状细胞(DC)激发特异性细胞毒性T细胞(CTL)，分析CTL的特性。方法：用AdS-LaMP2A重组腺病毒转染EBV健康携带者及鼻咽癌患者的DC，与自体来源的外周血单个核细胞(PBMC)混合培养，激发LMP2A特异性CIL。用LDH释放法检测CIL杀伤活性；流式细胞术(FACS)检测培养细胞群体中CD3^ 、CD4^ 、CD8^ 、CD56^ 细胞的组成；生物活性法检测细胞培养上清中IFN-γ含量；RT-PCR分析CTL的FasL mRNA表达。结果：EBV健康携带者及鼻咽癌患者的PBMC，经AdS-LMP2A转染的自体DC两次刺激后，都能诱导出显著的EBV-LMP2A特异的CIL。EBV健康携带者CTL的杀伤活性，随DC刺激次数的增加而逐渐增强，诱导的CTL细胞群体以CD^4 和CD8^ 细胞组成为主，且CD4^ 细胞比例高于CD8^ 细胞，另含少量CD56^ 细胞；在不同时段所诱导的CTL上清中，均含一定量的IFN-γ并随刺激次数和诱导时间的延长呈上升趋势；RT-PCR研究表明，所诱导的CTL有FasL mRNA的表达。结论：以腺病毒载体介导EBV-LMP2A基因转染的成熟DC，在体外能激发较强的LMP2A特异的功能性CTL，可用于EBV相关NPC的免疫治疗。     

M-CSF和IL-10对人单核细胞表面分子表达的影响

本文采用流式细胞术检测人外周血单核细胞表面CD14、CD2 3、CD6 4、CD11b、CD18、CD2 9表达 ,研究巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF )和白细胞介素 (IL ) 10对单核细胞炎症效应和免疫效应功能的影响。结果显示 ,(1)M CSF诱导单核细胞表面CD14及CD2 3分子的表达 (P <0 0 5 )。IL 10抑制CD2 3的表达 ,促进CD6 4的表达 ,并协同M CSF诱导单核细胞CD14的表达 ,拮抗M CSF对CD2 3的诱导作用。M CSF能协同IL 10对单核细胞CD6 4的诱导作用 ;(2 )M CSF能诱导单核细胞表面CD11b及CD18的表达 (P <0 0 5 )。结论 :M CSF通过促进单核细胞表面CD11b、CD18、CD14、CD2 3的表达及协同促进CD6 4的表达而促进单核细胞粘附、炎性渗出、IgG及IgE依赖的细胞杀伤和吞噬功能 ,促进单核 巨噬细胞在炎症反应、体液免疫应答效应阶段发挥效应细胞功能。IL 10通过促进CD6 4的表达 ,增强体液免疫应答效应阶段单核 巨噬细胞的免疫效应功能 ,但通过抑制CD2 3的表达 ,下调IgE介导的体液免疫效应。     

IL-4对DC产生IL-12影响的研究

为了研究白细胞介素 4 (IL 4 )对树突状细胞 (dendriticcell,DC )产生白细胞介素 1 2 (IL 1 2 )p70的调节作用及其机制 ,将小鼠骨髓细胞在含GM CSF和IL 4的培养液中培养 6d ,加入成熟诱导剂脂多糖 (LPS )或TNF α、CpG ODN继续培养 2d以获得成熟DC。流式细胞仪检测DC表面CD80和MHCII类分子 ,混合淋巴细胞反应检测DC促进同种异体T细胞增殖的能力 ,ELISA法检测不同诱导剂诱导DC产生IL 1 2p70的能力 ,RT PCR和荧光定量PCR检测IL 1 2p35和p4 0mRNA的表达及其变化。结果显示小鼠骨髓细胞在含GM CSF、IL 4和成熟诱导剂的培养液中培养后可以获得成熟的DC ,成熟DC高表达CD80和MHCII类分子 ,具有较强的刺激同种异体T细胞增殖的能力 ,LPS、CpG ODN、TNF α、PolyI:C在促进DC成熟的同时能诱导DC产生有活性的IL 1 2 ,IL 4对IL 1 2的产生具有明显的促进作用 ,RT PCR和荧光定量PCR结果显示LPS诱导IL 1 2产生以及IL 4对其的促进作用与IL 1 2p35基因的转录水平增高有关