340例儿童急性呼吸道感染常见病毒病原的检测

目的: 了解小儿急性呼吸道感染(acute respiratory tract infection ARTI)中病毒感染状况,为预防和治疗疾病提供依据?方法:收集2009年5月~2010年4月期间340例确诊为ARTI住院患儿的深部鼻咽分泌物(NPS)临床标本,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测常见的7种呼吸道病毒:呼吸道合胞病毒(RSV)?流感病毒(IFV)?副流感病毒(PIV)?人类偏肺病毒(HMPV)?腺病毒(ADV)?鼻病毒(HRV)和肠道病毒(EV)?统计分析各种病毒所致ARTI的临床特点及流行特征?结果:340例标本中共检出212例阳性,阳性率为62.35%?其中RSV感染为132例,阳性率为62.3%;IFV感染为45例?阳性率为21.3%;PIV感染为13例,阳性率为6.1%; HMPV感染为13例,阳性率为6.1%;ADV感染为4 例,阳性率为1.9%; HRV感染为2例,阳性率为0.9%; EV感染为7例,阳性率为3.3%?结论:本地区诊断为ARTI住院儿童中病毒感染率为62.35%,其中以RSV为主?     

改良型TNF-α和IFN-γ诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO和细胞毒作用的影响

应用改良型ＴＮＦ α（Ｉ ＴＮＦ α）和ＩＦＮ γ刺激小鼠腹腔巨噬细胞（ＭΦ）诱生一氧化氮（ＮＯ）,并观察对细胞毒作用的影响。结果：ＩＦＮ γ可激活小鼠腹腔ＭΦ产生小量ＮＯ,并伴随产生低度细胞毒活性,尤其是对经ＩＦＮ γ处理的靶细胞（γ Ｌ１２１０细胞）为显著。单用Ｉ ＴＮＦ α刺激的ＭΦ,诱生ＮＯ不显著或微量,对靶细胞也无明显细胞毒作用。但Ｉ ＴＮＦ α（１００ｎｇ／ｍｌ）和ＩＦＮ γ（５０Ｕ／ｍｌ）共同刺激ＭΦ,可产生有意义量的ＮＯ（Ｐ＜００５）,对γ Ｌ１２１０细胞有显著细胞作用（Ｐ＜００１）,而对未经ＩＦＮ γ处理的靶细胞（Ｌ１２１０ｃｅｌｓ）无明显细胞毒作用。这可能是ＩＦＮ γ促进ＭΦ诱生ＮＯ和靶细胞表面粘附分子的表达,加强效靶识别和结合,提高了对靶细胞的杀伤力。     

甲型流感病毒FM1非结构蛋白(NS1)在大肠杆菌表达及其ELISA检测方法建立

目的:构建流感病毒FM1非结构蛋白NS1全长基因表达载体在大肠杆菌(E.coli)中表达,并将表达蛋白用于病毒感染和疫苗免疫小鼠的血清检测.方法:提取流感病毒鸡胚尿囊液RNA,RT-PCR扩增NS1全长基因,克隆到pET28a,转化E.coliBL21感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出阳性重组质粒pET28-NS1.异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达蛋白在变性条件下经镍柱亲和层析纯化,并用Western blot法检测其抗原活性.以纯化的NS1蛋白为抗原建立了检测NS1抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法分别对7、15和30天灭活疫苗免疫和病毒感染小鼠血清进行检测.统计分析各组吸光度(A)差异,并以灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等指标对NS1-ELISA进行方法学评价.结果:重组质粒经PCR及酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确.SDS-PAGE和Western blot结果显示表达重组蛋白分子质量约为26 ku.NS1-ELISA法在第15～30天,感染组血清吸光度明显高于疫苗免疫组.结论:成功获得了NSl重组基因表达蛋白,建立的NS1-ELISA法可用于病毒感染和疫苗免疫血清的鉴别检测.     

留学生医学微生物学理论教学的体会和建议

随着我国高等教育国际化趋势的发展,留学生教学现已成为众多高校普遍面临的一项具有挑战性的教学任务.医学微生物学作为留学生医学教育中一门重要的基础课,如何提高教学效果,确保教学质量以适应留学生教育教学的特殊性有待探索.文章就留学生医学微生物学教学中存在的一些问题进行了分析,为更好地开展留学生教学工作积累经验.     

人类疱疹病毒6A亚型潜伏感染人神经胶质瘤细胞系U251

目的:采用人神经胶质瘤细胞系U251作为宿主建立HHV-6A亚型潜伏感染神经系统细胞的体外模型?方法:HHV-6A急性感染U251细胞后随细胞传代,通过观察细胞形态变化?病毒复制及检测病毒基因表达情况等确定其进入潜伏感染阶段?结果:HHV-6A在急性感染U251细胞后随传代数的增加,病毒基因拷贝量逐渐减低至稳定的低水平,而代表处于潜伏感染阶段的HHV-6A病毒U94基因的转录逐渐下降随后维持在稳定水平表达?结论:HHV-6A 在体外感染U251后通过传代使病毒从急性感染期逐渐转入潜伏感染期?     

应用多重反转录PCR技术检测病毒性呼吸道感染

目的：为了寻求呼吸道感染病毒的快速诊断并指导治疗，建立一种多重反转录PCR体系。方法：分别设计针对肠病毒、腺病毒、乙型流感病毒和甲型流感病毒标准株的特异性引物，采用多重反转录PCR检测4种病毒。结果：应用此多重反转录PCR系统可以特异的同时检测到同一模板中的肠病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒。通过用多重反转录PCR和单一PCR对36份临床标本的检测相比较，结果表明多重反转录PCR的检测与单一PCR的检测结果是一致的。结论：通过与单一的PCR对比，证明该多重反转录PCR系统可替代单一的PCR用于肠病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒引起的呼吸道感染的快速诊断。     

人类疱疹病毒6型U94基因克隆?表达?纯化及抗体制备

目的:制备人类疱疹病毒6型U94蛋白及其抗体.方法:PCR扩增U94基因,经测序后克隆到原核表达载体PGEX-6p-1中.重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导蛋白表达.应用酶切鉴定、SDS-PAGE及Western blot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性.表达的蛋白经亲和层析纯化.纯化的蛋白免疫动物制备抗血清.结果:成功地获得了高纯度的U94融合蛋白,纯度可达90%以上.用其制备多克隆抗体滴度可达1:100 000.结论:获得高纯度的U94融合蛋白及其高效价的抗体.     

抗人类疱疹病毒7型南京分离株YY5单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人类疱疹病毒7型(HHV-7)单克隆抗体,应用于临床与科研。方法:用纯化的HHV-7南京株YY5免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选。间接免疫荧光、免疫印迹试验等方法鉴定单抗。结果:获得了3株分泌抗(HHV-7)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为6H9、6C11、4D5。单克隆抗体亚类鉴定表明:6H9为IgG1类,6C11、4D5为IgM类。用间接ELISA方法检测单抗腹水滴度分别为:1:6.40×104,1:1.28×105,1:1.00×103。免疫印迹试验结果表明:6C11能与分子质量约70 ku大小的病毒蛋白结合。结论:成功制备并鉴定3株抗HHV-7单克隆抗体,为进一步研究HHV-7的特性及为临床快速诊断提供可能。     

PBL教学法在七年制医学微生物学授课中的应用与体会

探讨医学微生物学的教学方法,在临床专业七年制学生中尝试PBL教学和传统教学,采用问卷调查和考试成绩相结合的形式进行教学效果的评估,PBL教学法在医学微生物学的教学中可获得良好的教学效果。     

200例无精子症患者的染色体核型分析

对200例无精子症患者进行染色体显带分析,发现染色体异常47例,异常率23．5％(47／200),其中性染色体异常40例,占20％(40／200),常染色体异常6例,占3％(6／200),性反转综合征1例,占0．5％(1／200)。性染色体异常最常见的是XXY综合征,其次是X染色体与常染色体的易位和小Y染色体,而Y染色体的易位则较少见;常染色体易位较为普遍,易位的常染色体涉及1、2、3、12、15、18、21号染色体,以18号染色体易位的频率为高。提示性染色体异常导致无精子可能与决定性别的基因异常和(或)精子发生基因缺陷有关,常染色体异常可能影响生殖细胞减数分裂过程,导致生精障碍。