胆汁、胆石中结合胆汁酸高效液相色谱测定法

胆汁酸在胆汁中的重要作用已被人们所认识,其含量分析有助于胆石成因的探讨,同时也可为胆结石病人提供治疗依据。现代化分析手段,如薄层层析法、气相色谱法、高率液相色谱法(HPLC法)等均可用于测定胆汁酸,其中尤以HPLC法具有方法简单、灵敏度高等优点。我们参考国内外文献报道,取其所长建立了用HPLC连用紫外检测器对胆汁,胆石中结合胆汁酸的测定方法,现介绍如下。     

单结合胆红素与胆固醇成核关系的初步探讨

在制备出大量较为纯净的单结合胆红素的基础上，对５８例胆囊结石（胆固醇结石３８例、色素性结石２０例）和１８例非胆囊结石患者胆囊胆汁中３种不同比例的ＭＣＢ对胆固醇成核时间的影响进行比较，结果：胆固醇结石患者胆汁中胆固醇成核时间分别为：４３０±２．１７天、３５５±１９５天和２５０±１５６天；色素性结石患者胆汁中分别为：８３０±２５２天、７４５±１９０天和６９５±２３５天；非结石患者胆汁中分别为：７８３±２７８天、５７８±２０７天和４５６±２０４天。胆固醇结石和非结石患者胆汁中随ＭＣＢ比例的增加，胆固醇成核时间显著地缩短（Ｐ＜０．０１）；而色素性结石患者胆汁中ＭＣＢ比例的增加对胆固醇成核时间无显著影响（Ｐ＞０．０５）。提示ＭＣＢ有促胆固醇成核的倾向；可能在胆固醇结石形成的早期起一个始动因子的作用。     

中国北方汉族人基质金属蛋白酶1、9、12基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的研究

目的探讨基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）基因多态性与慢性阻塞性肺疾病（COPD）易感性的关系。方法采用病例对照研究方法，收集147例吸烟COPD患者和120名吸烟非COPD正常对照。调查研究对象的性别、年龄、吸烟史、职业粉尘接触史、临床症状、体格检查、测定肺通气功能和支气管舒张试验。应用聚合酶链反应、限制性内切酶分析法比较MMP-9（-1562C／T）、MMP-1（-16071G／2G）、MMP-12（-82A／G）、MMP-12（-357Asn／Ser）基因多态性在COPD组和吸烟非COPD对照组的差异。结果MMP-12基因型Asn／Asn和CT／AsnAsn可增加患COPD的危险性。OR值分别为2361（95％CI：1．369～4．017）和2．433（95％CI：1．159～5．342）；CC／1G1G／SerSer对COPD患病有保护作用。OR值为0．457（95％CI：0．231～0．911）。结论CT和AsnAsn两基因型同时存在，可增加COPD的易感性，CC、GG和SerSer三基因型同时存在对患COPD有防护作用；多基因联合作用对多基因遗传病发病的影响比单个易感基因的作用更重要。     

逆转录病毒介导的人卵巢癌 p53基因治疗体外及小鼠体内实验研究

目的 :评价人卵巢癌的 p5 3基因治疗效果。 方法 :用携带人野生型 p5 3的逆转录病毒转导 p5 3蛋白表达缺如的人卵巢癌细胞系SK OV 3,通过体外及小鼠体内实验研究转基因的表达及对肿瘤的抑制作用。结果 :逆转录病毒介导的 p5 3基因能够在体外及小鼠体内人卵巢癌细胞SK OV 3中表达 ,并对人卵巢癌生长有抑制作用。体外抑制率为 5 7%～ 88% ;对体内肿瘤抑制率为 40 %。结论 :逆转录病毒介导的外源野生型p5 3能够抑制人卵巢癌生长 ,增加病毒滴度将进一步提高体内治疗效果     

羟乙基淀粉对大鼠蛋白尿的治疗作用

目的：探寻羟乙基淀粉治疗大鼠蛋白尿的可行性。方法：建立蛋白尿大鼠动物模型,在静脉点滴6％羟乙基淀粉前后,通过大鼠输尿管插管收集肾后膀胱前尿液,测定尿蛋白分子量并比较治疗前后尿蛋白含量,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对尿蛋白分子量进行分析,同时观察治疗前后血肌酐和尿素氮变化。结果：羟乙基淀粉治疗后尿蛋白定量较治疗前明显下降,尿蛋白电泳表明高、中分子蛋白条带数目和含量较治疗前显减少。治疗前后尿量、血肌酐和尿素氮无明显变化。结论：羟乙基淀粉能够安全、有效地减少实验大鼠的蛋白尿,为探寻蛋白尿的新的治疗方法提供了理论依据。     

MicroRNAs在唐氏综合征模型小鼠海马中的异常表达

目的：寻找唐氏综合征模型鼠Ts65Dn和对照二倍体组小鼠海马组织中差异表达的microRNAs。方法：从小鼠的海马组织中提取小分子RNA,采用RNA加尾和引物延伸RT- PCR法检测microRNAs。通过geNorm软件和Normfinder软件分析选择最佳的内参照基因,将每种microRNAs按其引物Tm值排成阵列,用梯度实时PCR仪在不同的退火温度扩增,并计算每种相对于microRNAs内参照基因的表达量。结果： geNorm和Normfinder两种方法均选定miR-27a为最稳定的内参照基因,共检测了52种microRNAs,其中miR-33 和miR-19a在Ts65Dn小鼠海马组织中表达显著下调,miR-130在Ts65Dn小鼠海马组织中表达显著上调,小鼠16号染色体三体区段包含的miR-802在Ts65Dn小鼠和对照二倍体小鼠海马组织中表达量均低,差异没有统计学意义。结论：MicroRNAs在Ts65Dn小鼠海马组织中的异常表达可能与唐氏综合征脑发育不良有关。     

通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性

目的：了解因某些microRNA (miRNA) 家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法: 采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果：提高退火温度12 ℃~14 ℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′ 末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′ 末端置于miRNA第18~20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论：精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。     

p16基因抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的体外和体内实验研究

目的 :探讨p16基因对乳腺癌的治疗作用 ,为乳腺癌 p16的基因治疗提供实验依据。 方法 :构建p16的逆转录病毒载体 pLMSN ,包装成病毒后 ,体外转导p16基因纯合性缺失的乳腺癌细胞株MCF 7,Westernblot证明该基因在转导后的MCF 7细胞中有表达 ,用活细胞计数、流式细胞仪、形态观察等方法来检测 p16表达在体外对MCF 7细胞生物学行为的影响。进行SCID鼠体内成瘤实验和逆转录病毒直接注射SCID鼠乳腺癌模型的治疗性实验来观察 p16对乳腺癌细胞的体内抑制作用。 结果 :外源性 p16在MCF 7细胞中表达后 ,体外细胞发生形态改变 ,生长明显慢于对照细胞 ,流式细胞计数显示G1期细胞增多 ,细胞在SCID鼠体内成瘤性下降 ,p16逆转录病毒直接注射有使SCID鼠乳腺肿瘤缩小的趋势。结论 :p16逆转录病毒对p16基因纯合性缺失的乳腺癌有一定治疗意义     

血清和胆汁中头孢噻肟含量的观察

对六例胆道术后病人静脉滴注2g国产头孢噻肟后6小时内,对血清及胆汁中药物浓度的变化进行观察。结果:(1)平均最高血药浓度(138.8μg/ml)出现于用药后15分钟;最低浓度(6.6μg/ml)见于6小时;(2)观察6小时内,药物经胆汁排出的浓度远远超过对肠杆菌科细菌MIC_(90)。平均总排药量占投药量的0.065％,最高浓度及最大排药速度见于用药后1/2～2小时;(3)本药应用间隔不应超过4～6小时。     

实时定量PCR阵列检测小鼠大脑组织microRNA表达谱

目的：分析小鼠大脑组织microRNA(miRNA)表达谱,为研究特定miRNA及其靶基因、中枢神经系统miRNA相关的调节网络,以及miRNA在中枢神经系统疾病中的作用提供参考。方法：采用RNA加尾和引物延伸序列RT-PCR法,将精心设计的特异引物按Tm值排成阵列,用梯度实时PCR仪在不同的退火温度扩增每一个miRNA,并计算出每种miRNA相对于内参的表达量。结果：共检测了285个miRNA,阳性者260个,它们丰度不同,频数分布图大致呈正态。大部分miRNA的表达水平与已发表的芯片结果一致,而阳性率高于芯片结果。源自同一miRNA前体的2个成熟miRNA表达量,有些相差无几,有些则相差甚多。同簇相邻miRNA的丰度有些相近,有些则差异明显,提示miRNA转录后的归宿决定其丰度。结论：采用实时定量PCR阵列法,分析了小鼠大脑组织的miRNA表达谱,特别是获得了一些低丰度miRNA在小鼠大脑中表达的数据,这将有助于对这些低丰度miRNA的功能研究。