农村寄宿制学校宋内志贺菌菌痢暴发及全基因组溯源分析

对陕西省3起寄宿制学校感染性腹泻暴发事件进行流行病学调查、病原分离鉴定及分子溯源分析,为科学指导临床诊断治疗及流行病学调查工作提供参考.方法 对陕西省3起寄宿制学校感染性腹泻事件开展现场调查,描述疫情三间分布,分析流行特征.采集病例肛拭子标本、剩余食物、环境及水源标本,进行病原分离鉴定.选择代表菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,全基因组多位点序列分型(MLST),单核苷酸多态(SNP)分析,预测毒力基因谱及耐药基因谱.结果 2017年8-9月报告的3起疫情共发病282例,以发热、腹泻为主,里急后重及粘液脓血便症状不明显,均为学生群体,性别间差异无统计学意义.病例肛拭宋内志贺菌检出率为62.22% (56/90),肛拭ipaH基因检测阳性率为69.70% (46/66),环境样本阳性率为12.31% (8/65);PFGE,全基因组MLST,SNP分析表明,3起疫情代表菌株不同源.毒力基因预测共有12种毒力基因.耐药基因预测有氨基糖苷类、甲氧苄啶类、磺胺类、β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类的耐药基因.结论 陕西省3起寄宿制学校宋内志贺菌引起的细菌性痢疾暴发之间无直接关联,病原菌毒力基因谱与国内常见宋内志贺菌特征一致,存在多重耐药基因.     

陕西省麻疹病毒基因分型及疫苗免疫因素分析

目的确定引起陕西省麻疹流行的病原毒株,探讨相关的疫苗免疫因素。方法采集麻疹病人咽拭子标本分离病毒,用酚-氯仿抽提法提取病毒悬液中的RNA,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增N基因碳末端的核苷酸450个（bp）片段,对扩增产物进行序列测定和基因分型。用微量中和试验测定健康人群麻疹病人急性期血清中和麻疹疫苗株和野毒株的中和抗体水平。结果从82份咽拭子中分离出19株H1基因型麻疹病毒。麻疹疫苗免疫血清和有免疫史麻疹急性期病人血清对麻疹野毒株的中和抗体几何平均滴度（GMT）分别为26.36和26.90,明显低于疫苗株,GMT分别为49.30和56.18。结论陕西省近年麻疹流行是由H1基因型麻疹野病毒引起,不排除疫苗对目前流行株保护性不足的因素。     

陕西省人群乙型肝炎血清流行病学调查

目的了解陕西省人群乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）感染现状,评价接种乙肝疫苗（HepB）15年后人群血清流行病学变动情况。方法采用多阶段随机抽样方法,抽取1～59岁人群2 224人进行问卷调查并采集血标本,用ELISA方法检测HBV血清学标志。结果调查人群HBsAg、抗-HBs、抗-HBc标化阳性率分别为3.50%、48.51%、24.45%,HBV标化感染率为37.58%。HepB接种率为50.09%,接种人群HBsAg阳性率（1.62%）及HBV感染率（8.80%）低于未接种人群（4.05%、50.00%）。15岁以下儿童HBsAg、抗-HBc阳性率和HBV感染率低于15岁以上人群,而抗-HBs阳性率、HepB接种率高于15岁以上人群。HBsAg阳性率、HBV感染率较1992年流行病学调查结果分别下降54.78%、31.86%,抗-HBs阳性率上升60.79%。HBV感染率农村（33.33%）高于城市（24.17%）,HepB接种率城市（88.61%）高于农村（75.96%）。结论陕西省实施HepB接种15年后,HBsAg阳性率、HBV感染率均有不同程度下降,15岁以下儿童下降更为明显。     

米面食品中呕吐型蜡样芽胞杆菌的分子分型及耐药性分析

目的 了解陕西米面食品中呕吐型蜡样芽胞杆菌的分子分型和耐药性。方法 对近5年(2012-2016年)陕西地区的米面食品中收集到的208株蜡样芽胞杆菌用PCR方法进行呕吐型菌株的鉴别,用多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)技术对鉴别的呕吐型菌株分子分型,用微量肉汤稀释法测定其药物敏感性。结果 鉴别出8株呕吐型蜡样芽胞杆菌,分为ST-1050、ST-1606和ST-26三个ST 型。呕吐型蜡样芽胞杆菌对氨苄西林、青霉素、苯唑西林、复方新诺明耐药率100%。对头孢西丁、头孢唑林,耐药率分别为62.5%、50.0%。对红霉素、克林霉素、四环素,敏感率均为87.5%,对环丙沙星、达托霉素、万古霉素、氯霉素、庆大霉素100%敏感。结论 陕西地区米面食品中存在呕吐型蜡样芽胞杆菌的污染,ST-26是优势型别,应作为陕西防控工作的重点。氨苄西林、青霉素、苯唑西林、复方新诺明耐药率高不应作为临床治疗用药。     

麻疹中和试验对酶联免疫吸附试验的质量控制探讨

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测麻疹IgG抗体的质量控制方法。方法2003年对3个年龄组的294份ELISA法检测麻疹IgG抗体后的血清,用中和试验加以证实。结果两种方法相关,但差异较大,相关系数0.423~0.684,阳性符合率64.76%~98.24%。结论排除两种试验方法本身敏感性的差异,麻疹ELISA-IgG试剂盒质量的稳定性、操作方法的精确性等问题值得关注,必须确保血清学检测方法标准化。     

西安市麻疹野病毒核蛋白基因序列分析

目的:研究西安市流行麻疹病毒的基因型别及特征. 方法:采集3 d内出疹麻疹患者咽拭子标本分离病毒,提取病毒RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒的核蛋白N基因碳末端的450 bp的核苷酸片段,对扩增产物进行序列测定和比较分析. 结果:采集咽拭子标本13份,分离出麻疹病毒8株,分离率62%;8株麻疹病毒均为H1基因型. 结论:H1基因型麻疹病毒是西安市麻疹病毒的优势流行株,与全国麻疹病毒流行株无明显差异.     

西安市麻疹流行病原毒株和疫苗免疫因素研究

目的 确定引起西安市麻疹流行的病原毒株，探讨相关的疫苗免疫因素。方法 采集麻疹病人咽拭子标本分离病毒，用酚-氯仿抽提法提取病毒悬液中的RNA，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增N基因碳末端的450个核苷酸（bp）片段，对扩增产物进行序列测定和基因分型。用微量中和试验测定麻疹病人急性期和恢复期血清中和麻疹疫苗株和野毒株的中和抗体水平。结果 采集咽拭子标本13份，分离出麻疹病毒8株，分离率61．54％；8株麻疹病毒均为H1基因型H1a亚型。结论 H1基因型H1a亚型是引起西安市本次麻疹流行的病原病毒。此次麻疹流行不排除疫苗保护性下降因素和麻疹疫苗免疫工作中存在无效接种而造成的免疫空白。     

DNA重复序列鉴定陕西省利什曼原虫

提取陕西省韩城市犬源利什曼原虫分离株(1份)、病犬骨髓(1份)、患者骨髓(3份)和白蛉(2份)共7份样品的利什曼原虫DNA,PCR扩增DNA重复序列,扩增产物经毛细管电泳后进行双向测序。采用DNAstar Seq Man软件进行序列拼接,与国内外发表的DNA重复序列进行比对,分析同源性,并用邻接法(NJ)构建系统进化树。结果 7份利什曼原虫DNA样品均扩增出260 bp左右的条带,与目的序列大小一致,且测序结果完全相同。序列比对结果显示,7条DNA重复序列与参考序列的婴儿利什曼原虫(GenBank登录号为L42486)、杜氏利什曼原虫(GenBank登录号为L42486)仅1个碱基的差异。同源性分析结果显示,同种原虫序列相似性大于90%,个别达100%。系统进化树结果显示,7条序列与杜氏利什曼原虫、婴儿利什曼原虫聚为一支。结合流行病学资料,陕西韩城利什曼原虫为婴儿利什曼原虫。     

陕西省儿童风疹、腮腺炎抗体水平检测

目的 了解陕西省健康儿童麻疹、风疹、腮腺炎的抗体水平.方法 采集1～14岁健康儿童血标本225份,检测麻疹、风疹、腮腺炎抗体.结果 麻疹抗体阳性率维持>94%.城市儿童风疹和腮腺炎抗体几何平均浓度(GMC)1～2岁组最高(27.74%,28.94%),随年龄增长呈下降趋势;农村儿童风疹和腮腺炎体阳性率1～2岁组最低(24.2%,21.2%),随年龄增长呈上升趋势.结论 陕西省健康儿童对风疹和腮腺炎的免疫力较低,有必要对所有1岁儿童接种麻风腮三联疫苗.     

陕西省流行性腮腺炎病毒基因及抗体水平分析

目的了解陕西省腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)流行株的基因型和人群抗体水平。方法采集腮腺炎病人咽拭子标本分离病毒,针对分离到的MuV小疏水蛋白(small hydro-phobic protein,SH)基因316个核苷酸片段进行逆转录-聚合酶链反应扩增,对扩增产物进行序列测定和基因分型;用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定健康人群腮腺炎IgG抗体。结果采集咽拭子标本55份,分离出腮腺炎病毒6株,均为F基因型。腮腺炎抗体阳性率为66.08%。IgG抗体含量和阳性率均为1.5岁组最低,分别为236.88 U/mL和37.04%,以后随年龄增加逐渐升高,性别间差异均无统计学意义(P0.05)。结论陕西省腮腺炎流行是由F基因型MuV引起,健康儿童腮腺炎免疫水平偏低。