DC-Chol阳离子脂质体佐剂对流感疫苗免疫效果的影响

  目的  观察阳离子脂质体DC-Chol修饰的四价流感疫苗的免疫原性。  方法  采用薄膜分散结合冻融-冻干法制备DC-Chol脂质体，检测其包封率。将小鼠分为七组，为DC-Chol脂质体疫苗组（250 μg/只、500 μg/只、750 μg/只、900 μg/只）、PBS组、中性脂质体组、疫苗原液组（n = 3），通过MTT法确定DC-Chol脂质体的最佳剂量。将小鼠分为四组，DC-Chol脂质体组、疫苗原液组、中性脂质体组以及PBS对照组，腹腔免疫小鼠，于第7天、14天、28天处死，MTT法和T淋巴细胞表面标记实验检测小鼠淋巴细胞增殖情况观察免疫原性。  结果  MTT实验表明，DC-Chol修饰脂质体的最佳用量为500 μg/鼠（P < 0.05）；T淋巴细胞表面标记实验显示，DC-Chol 阳离子脂质体能明显增强脾淋巴细胞数（P < 0.05）。  结论  与中性脂质体相比，DC-Chol 阳离子脂质体作为四价流感疫苗的佐剂具有良好的免疫增强作用。     

丙型肝炎病毒感染者F基因区变异临床意义的初步研究

目的探讨丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）F基因区变异的临床意义。方法以78例未治疗慢性丙型肝炎患者为研究对象,采用单链构象多态性分析对HCV-F基因区进行准种分析,实时荧光定量聚合酶链反应对HCV RNA进行定量检测,利用酶联免疫吸附试验分别对患者血清中的抗F蛋白抗体、Th1（IL-12,IFN-γ）和Th2（IL-5,IL-10）细胞因子水平进行检测分析。结果 78例慢性丙型肝炎患者中有46例为抗HCV-F抗体阳性,阳性率为59%。HCV1b亚型患者F基因区准种数目高于非HCV1b亚型（P=0.002）。F基因区SSCP条带数与HCV RNA载量及ALT/AST水平呈正相关（均有P〈0.05）。另外,与F基因准种数量≤2的患者相比,F基因准种数量〉2的患者血清中,Th1细胞因子IL-12、IFN-γ水平降低（P=0.023,P=0.010）,Th2细胞因子IL-5、IL-10水平显著升高（P=0.024,P=0.012）。结论 HCV-F基因区准种多样性与病毒复制、肝损伤和机体Th2优势应答有关,具有一定的临床意义。     

A群脑膜炎奈瑟球菌多糖单克隆抗体的制备及其应用

目的:筛选能分泌A群脑膜炎奈瑟球菌多糖抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,运用该单抗建立检测ACYW135群脑膜炎奈瑟球菌多糖疫苗中A群多糖的竞争ELISA方法?方法:运用经典的杂交瘤技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠腹腔注射收获腹水型单克隆抗体,优化条件建立间接竞争ELISA,分别测定5支同一批和3个不同批次的ACYW135群脑膜炎奈瑟球菌多糖疫苗成品中的A群多糖含量,检测结果应用SPSS软件做单样本t检验分析?结果:标准曲线经Log-logit处理,得到回归方程:y=-1.664 8-2.254 2x,R 2=0.989 5,线性范围0.022 8~1.200 7 μg/mL,IC50为0.165 8 μg/mL,最低检测限为0.022 8 μg/mL,检测疫苗中A群多糖含量,检测值与疫苗标示量无统计学差异(P > 0.05)?结论:成功筛选杂交瘤细胞株,制备A群多糖特异性单克隆抗体,建立的间接竞争ELISA方法,灵敏度高?稳定性好?可重复性强,可用于脑膜炎奈瑟球菌多糖疫苗研发过程中的定量检测,能克服磷含量法和火箭免疫电泳法检测A群多糖含量的缺点?     

流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺

目的在流感疫苗脂质体的基础上制备壳聚糖脂质体载药微粒,建立流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺．方法采用薄膜分散法制备流感疫苗脂质体,以不同N/P比（壳聚糖中的氮和卵磷脂中的磷比值）制备壳聚糖载药微粒．观察形态并测定其平均粒径、粒度分布、包封率与结合率．通过对比不同N/P比制备壳聚糖载药微粒的包封率与结合率等指标,确定流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺．结果流感疫苗脂质体形态均呈圆或椭圆形,粒度分布较均匀,壳聚糖包覆后脂质体仍为圆形,平均粒径由2．14μm增加到4．05μm．壳聚糖包覆前后流感疫苗脂质体平均包封率由80．41％变为84．37％．比较6种不同N/P比流感疫苗壳聚糖脂质体的结合率,当N/P为5：1时,为壳聚糖与脂质体孵育的最佳比例,结合率为19．40％．结论壳聚糖包覆后脂质体仍接近圆形,粒径增加,包封率提高,当N/P为5：1时,为壳聚糖与脂质体孵育的最佳比例．     

复方蛇床子泡腾栓的制备及质量控制

目的 :制备用于治疗老年性阴道炎的复方蛇床子泡腾栓 ,并制订质量控制指标。方法 :采用 95 %乙醇提取有效成分 ,对有效成分进行增溶后再根据处方将其制成泡腾栓 ,采用 UV /VIS- 75 0 1紫外可见分光光度计测定制剂中血竭的含量。结果 :本制剂泡沫量大、泡沫持续时间长、泡沫均匀细腻 ,且 p H与阴道生理 p H较接近 ,制剂中含量测定方法可靠。结论 :制剂中药物释放快、药效持续时间长 ,是用于治疗老年性阴道炎的较好剂型 ,所制订的质量控制方法可行。     

丙型肝炎病毒感染者F基因区变异临床意义的初步研究

目的探讨丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）F基因区变异的临床意义。方法以78例未治疗慢性丙型肝炎患者为研究对象,采用单链构象多态性分析对HCV-F基因区进行准种分析,实时荧光定量聚合酶链反应对HCV RNA进行定量检测,利用酶联免疫吸附试验分别对患者血清中的抗F蛋白抗体、Th1（IL-12,IFN-γ）和Th2（IL-5,IL-10）细胞因子水平进行检测分析。结果 78例慢性丙型肝炎患者中有46例为抗HCV-F抗体阳性,阳性率为59%。HCV1b亚型患者F基因区准种数目高于非HCV1b亚型（P=0.002）。F基因区SSCP条带数与HCV RNA载量及ALT/AST水平呈正相关（均有P<0.05）。另外,与F基因准种数量≤2的患者相比,F基因准种数量>2的患者血清中,Th1细胞因子IL-12、IFN-γ水平降低（P=0.023,P=0.010）,Th2细胞因子IL-5、IL-10水平显著升高（P=0.024,P=0.012）。结论 HCV-F基因区准种多样性与病毒复制、肝损伤和机体Th2优势应答有关,具有一定的临床意义。     

苦荞中肌醇含量的测量方法研究

目的为得到一种简单、快速、准确测定苦荞中肌醇的方法.方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法进行测定,色谱柱为美国Phenomenex公司提供的Luna C18柱（4.6 mm×150 mm,3μm）,流动相为甲醇-水（含0.1%的冰醋酸）,流速：1 mL/min.漂移管温度50℃,载气压力40 psi.结果肌醇进样量在0.0268～0.1340μg范围内（r=0.9997）线性关系良好,平均加样回收率为99.7%（相对标准偏差RSD=3.49%）.结论该方法简便可靠,可用于苦荞中肌醇含量的质量控制.     

猪囊虫DNA疫苗pEP1的生物安全性研究

猪囊虫核酸疫苗pEP1能在猪体内产生较高滴度的保护性抗体,具有较高的免疫保护率,本研究就核酸疫苗pEP1的生物安全性问题进行了深入探讨.首先,将核酸疫苗pEP1以肌注方式免疫仔猪,分别于接种后1天、7天、4周、8周分离各组织,提取组织总DNA,利用PCR技术分析质粒DNA在各组织的分布.研究发现,在疫苗接种后第1天几乎所有组织都能检测到质粒DNA,随着时间的延续,仅在注射部位检测到质粒的存在,说明肌注DNA疫苗在注射部位以外组织中很快被清除.其次,对残存质粒的注射部位组织进行细胞基因组整合可能性分析,并未发现质粒DNA整合入宿主细胞基因组中.同时采集猪舍周围样品,PCR法分析DNA疫苗上的CMV启动子基因、抗性基因和抗原表位基因在环境中发生转移和扩散的可能性,结果显示疫苗质粒并没有转化整合环境细菌.因而我们认为该猪囊虫核酸疫苗对猪体和环境都是安全的,具有很好的应用前景.     

MRI结合腔内充盈耦合剂对直肠癌术前评估的应用研究

目的探讨直肠MRI结合腔内充盈耦合剂对直肠癌术前评估的价值。 方法选取直肠癌76例,所有患者均行直肠MRI检查及腔内充盈耦合剂后MRI检查,分别评估肿瘤的T分期、N分期、系膜血管受侵、环周切缘情况,并与术后病理结果进行对比分析。 结果直肠MRI对于直肠癌T分期与术后病理一致58例,总体符合率76.3%。N分期与术后病理一致55例,总体符合率72.3%（Kappa=0.572,χ2=24.366,P＜0.001）。系膜血管受侵（extramural vascular invasion,EMVI）分析MRI与病理一致55例,其中EMVI（+）误判为EMVI（-）9例,EMVI（-）误判为EMVI（+）12例,总体符合率72.3%（Kappa值=0.564,χ2=23.677,P＜0.001）。环周切缘（circumferential margin,CRM）分析MRI与病理一致68例,其中CRM（+）误判为CRM（-）4例,CRM（-）误判为CRM（+）4例,总体符合率89.5%（Kappa值=0.754,χ2=8.556,P=0.004）。直肠腔内充盈耦合剂后MRI对于直肠癌T分期与术后病理一致66例,总体符合率86.8%,与直肠MRI检查符合率经卡方检验（Kappa值=0.736,χ2=3.102,P=0.043）。N分期与术后病理一致55例,总体符合率72.3%,与直肠MRI检查符合率经卡方检验（Kappa值=0.569,χ2=0.000,P=1.000）。EMVI分析MRI与病理一致61例,其中EMVI（+）误判为EMVI（-）7例,EMVI（-）误判为EMVI（+）8例,总体符合率80.3%,与直肠MRI检查符合率经卡方检验（Kappa值=0.612,χ2=1.314,P=0.252）。CRM分析MRI与病理一致65例,其中CRM（+）误判为CRM（-）4例,CRM（-）误判为CRM（+）7例,总体符合率85.5%,与直肠MRI检查符合率经卡方检验（Kappa值=0.712,χ2=0.543,P=0.465）。 结论直肠MRI结合腔内耦合剂可提高判断直肠癌术前T分期、系膜血管受侵的准确率,对于判断N分期、环周切缘情况的准确率无明显影响。     

流感疫苗脂质体干粉黏膜免疫研究

目的考察H3N2单价流感疫苗脂质体诱发呼吸道黏膜免疫的效果,并比较呼吸道不同部位产生抗体水平的差异。方法将实验小鼠分为非脂质体疫苗原液组、脂质体疫苗冻干粉组、阳性对照和阴性对照组（n=5）。非脂质体疫苗原液组和脂质体疫苗冻干粉组各以每只4μg和6μg血凝素含量（H3N2亚型）滴鼻免疫,同时以非脂质体疫苗原液腹腔给药和脂质体疫苗冻干粉腹腔给药作为阳性对照,以未免疫小鼠（磷酸盐缓冲液给药）作为阴性对照。免疫28 d后,采用间接ELISA法检测血清IgG和呼吸道黏膜sIgA分泌水平。结果脂质体滴鼻给药诱导的黏膜sIgA水平高于腹腔给药免疫组（P〈0.05）,上呼吸道（鼻咽部）黏膜sIgA水平明显高于下呼吸道（肺部）（P〈0.01）;与非脂质体组滴鼻免疫相比,上呼吸道脂质体组诱发的sIgA水平较低（P〈0.01）,而下呼吸道脂质体组诱发的sIgA水平较高（P〈0.05）。结论流感疫苗脂质体滴鼻给药能有效诱发体液免疫和呼吸道黏膜免疫,上呼吸道黏膜免疫水平高于下呼吸道,但与非脂质体相比,脂质体在下呼吸道（肺部）能表现出更好的免疫佐剂效应。